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	<li>Gao H, Gao S, Kan G, Valentovich LN, An Y. Research progress of base editing and prime editing tools based on the CRISPR/Cas system. Mol Ther Nucleic Acids. 2025;36.</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1M Tris-HCl, pH 8.0</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15568025</td><td></td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>R0491&nbsp;</td><td>Agarose UltraPure 16500500 ThermoFisher 500g</td></tr><tr><td>AMPure XP SPRI Beads&nbsp;</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td>B23317&nbsp;</td><td>A63880, AMPure XP Beads for DNA Cleanup, 5 mL, Beckman Coulter</td></tr><tr><td>ATP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CEPT Cocktail&nbsp;</td><td>Bio-Techne / Tocris&nbsp;</td><td>7200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CleanCap AG Reagent&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-7113&nbsp;</td><td>CleanCap AG 3&prime; OMe CleanScript IVT Kit, 125 x 20 &micro;L rxns,&nbsp;</td></tr><tr><td>CTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Custom DNA Primers&nbsp;</td><td>Integrated DNA Technologies&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNA Loading Dye&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>B7024&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco&rsquo;s Phosphate Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14190-144&nbsp;</td><td>D8537-100ML</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>11965-092&nbsp;</td><td>DMEM High Glucose [4,500 mg/L] with [4.0 mM] L-Glutamine and [110 mg/L] Sodium Pyruvate, 500 mL</td></tr><tr><td>Gel Extraction Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28704&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>GTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Illumina Indexing Primers&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>FC-131-2001&nbsp;</td><td>10uM stocks</td></tr><tr><td>Illumina MiSeq Sequencer&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>SY-410-1003&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lithium Chloride RNA Precipitation Solution&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9480&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lonza 4D Nucleofector System&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>AAF-1002X&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ssRNA Ladder NEB</td><td>NEB</td><td>N0362S</td><td>5ul/ reazione</td></tr><tr><td>MiSeq Reagent Kit v3 (300 cycles)&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>MS-102-3002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methyl-Pseudouridine-5&prime;-Triphosphate&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-1081&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NEBNext Ultra II Q5 Master Mix&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0544&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease-Free Water&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9937&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC Slide A8&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>941-0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC-3000&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>NC-3000&nbsp;</td><td>10ul di soluzione cellulare e 0,4167 &mu;L di soluzione DAPI&nbsp;</td></tr><tr><td>Solution 15, Hoechst 33342, 1 mL 910-3015 Chemometec</td><td>Chemometec</td><td>910-3013&nbsp;</td><td>500 &mu;g/ml ~ 0.9 mM ~ 0.05%</td></tr><tr><td>Nucleocuvette Strips&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>P3 Primary Cell Nucleofector Solution&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td>1 x 0.675 mL P3 Primary Cell Nucleofector&reg; Solution</td></tr><tr><td>Phusion High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>F530L&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>EO0491&nbsp;</td><td>Quantità: 1mL, >600 U/mL (~20 mg/mL)</td></tr><tr><td>Q5 High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0491&nbsp;</td><td>2,000 units/ml 100 units&nbsp;</td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28104&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA High Sensitivity Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q33230&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit RNA Broad Range Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q10211&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit&trade; Assay Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32856</td><td></td></tr><tr><td>RNA Gel Loading Dye (2x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0641</td><td>5ul/ reazione</td></tr><tr><td>RNA Purification Kit&nbsp;</td><td>Zymo Research&nbsp;</td><td>R1017&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>1236B62&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>SDS, 10% solution</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15553027</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11494</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Safe DNA Gel Stain&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>S33102&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic sgRNA / pegRNA&nbsp;</td><td>Synthego / IDT&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td>2ug&nbsp;</td></tr><tr><td>HiScribe T7 High Yield RNA Synthesis Kit, 250 reactions</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>E2040L</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12604013&nbsp;</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>TE buffer (Tris-EDTA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;AM9849</td><td>TE, pH 8.0, RNase-free Thermo</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>25200056&nbsp;</td><td>1X&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS), Premium, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>mTSER PLUS&nbsp;</td><td>STEM cell Technologies</td><td># 100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin Mixture 10,000 ug/mL, 100 mL, 4-pack</td><td>Quality Biological</td><td>120-095-721&nbsp;</td><td>

editing genomico nelle cellule primarie di mammiferi tramite elettroporazione dell'rna editor

Genome Editing in Primary Mammalian Cells via Electroporation of Editor RNA

Editing genomico nelle cellule primarie di mammiferi tramite elettroporazione dell'RNA editor

CRISPR editors including nucleases, base editors, and prime editors can efficiently correct disease-causing genetic variants or disrupt target genes. ...

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Nucleasi di stilisti come nucleasi dito di zinco (ZFNs) e attivatore di trascrizione come nucleases effettrici (Talens) possono essere utilizzati per modificare il genoma di embrioni preimpianto di topo attivando sia la fine nonhomologous giunzione (NHEJ) e la ricombinazione omologa (HR) percorsi. Questi progressi consentono la rapida generazione di mouse con precise modificazioni genetiche.

Genoma Ingegneria mouse usando Nucleases Designer

Utilizzando un Cas9 preassemblati complesso ribonucleoproteico (RNP) è un metodo potente per l'editing genomico precisa, efficiente. Qui, si evidenzia sua utilità in una vasta gamma delle cellule e degli organismi, tra cui cellule umane primarie e classico ed emergenti organismi modello.

Enhanced Genome Editing con Cas9 ribonucleoproteina nelle Diverse cellule e degli organismi

CRISPR-Cas è una potente tecnologia per progettare i complessi genomi delle piante e degli animali. Qui, dettagliamo un protocollo efficiente modificare il genoma umano usando diverse endonucleasi di Cas. Evidenziamo considerazioni importanti e parametri di progettazione per ottimizzare l'efficienza di editing.

Modifica di genoma in linee cellulari di mammifero usando CRISPR-Cas

Presentato qui è un protocollo per l'efficiente editing genico mediato da ribonucleoproteina CRISPR/Cas9 nelle cellule dei mammiferi utilizzando l'elettroporazione dei tubi.

CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteina-mediato Precision Gene Editing da Elettroporazione Tube

Questo protocollo descrive le tecniche per isolare gli epatociti primari di topo dal fegato e l'elettroporazione di CRISPR-Cas9 come ribonucleoproteine e mRNA per interrompere un gene bersaglio terapeutico associato a una malattia metabolica ereditaria del fegato. I metodi descritti determinano un'elevata vitalità e alti livelli di modificazione genica dopo l'elettroporazione.

Somministrazione mediata da elettroporazione di ribonucleoproteine Cas9 e mRNA in epatociti primari di topo appena isolati

Qui, descriviamo una semplice tecnica destinata alla generazione efficiente di topi geneticamente modificati chiamata CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). Questo metodo fornisce reagenti di editing mediante elettroporazione negli embrioni con un'efficienza vicina al 100%. Questo protocollo è efficace per mutazioni puntiformi, piccole inserzioni genomiche e delezioni in embrioni di mammifero.

Editing efficiente del genoma dei topi mediante elettroporazione CRISPR degli zigoti

Questo protocollo descrive la procedura per l'editing del genoma nei macrofagi derivati dal midollo osseo di topo utilizzando complessi ribonucleoproteici Cas9-sgRNA assemblati in vitro e somministrati mediante elettroporazione.

Distruzione genica ad alta efficienza nei macrofagi primari derivati dal midollo osseo utilizzando complessi elettroporati Cas9-sgRNA

Questo protocollo presenta un approccio ottimizzato per la produzione di modelli di ratto geneticamente modificati. Il virus adeno-associato (AAV) viene utilizzato per fornire un modello di riparazione del DNA e l'elettroporazione viene utilizzata per fornire reagenti CRISPR-Cas9 per completare il processo di editing del genoma nell'embrione a 2 cellule.

Editing del genoma CRISPR-Cas9 di embrioni di ratto utilizzando il virus adeno-associato (AAV) e l'elettroporazione di embrioni a 2 cellule

Il protocollo descrive i metodi per l'editing dell'epigenoma basato su CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) in linee cellulari umane utilizzando la trasfezione del DNA plasmidico e la nucleofecazione dell'mRNA.

Editing dell'epigenoma CRISPR nelle cellule umane mediante trasfezione del DNA plasmidico e consegna della nucleofecazione dell'mRNA

L'efficienza del metodo I-GONAD (Improved Genome Editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery) è paragonabile alla microiniezione tradizionale, che richiede la raccolta di zigoti da femmine donatrici e il trasferimento a femmine pseudo-gravide. Questo protocollo dimostra la sua efficacia introducendo mutazioni indotte da CRISPR/Cas9 nel locus ROSA26 sul cromosoma 6.

Miglioramento dell'editing del genoma tramite la somministrazione di acidi nucleici oviduttali Tecnica di elettroporazione in vivo basata sulla somministrazione per la generazione di topi knockout

Johns Hopkins University School of Medicine.  La somministrazione degli editori genomici come RNA è un mezzo particolarmente potente per modificare i genomi delle cellule e delle linee cellulari primarie dei mammiferi. L'obiettivo di questo protocollo è fornire editori genomici come mRNA nelle cellule e linee cellulari primarie dei mammiferi, seguiti da sequenziamento e analisi mirati di Illumina per quantificare gli esiti di editing.

Editing genomico nelle cellule primarie di mammiferi tramite elettroporazione dell'RNA editor

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