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<ol><li>Winden, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberous+sclerosis+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Tuberous sclerosis complex.</a> Nat Rev Dis Primers. 12, 11(2026).</li>
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<li>Zabegalov, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+repetitive+behaviors+in+zebrafish+and+their+relevance+to+human+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Abnormal repetitive behaviors in zebrafish and their relevance to human brain disorders.</a> Behav Brain Res. 367, 101-110 (2019).</li>
<li>Scheldeman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-related+neuropathology+in+mutant+tsc2+zebrafish%3A+phenotypic%2C+transcriptomic+and+pharmacological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">mTOR-related neuropathology in mutant tsc2 zebrafish: phenotypic, transcriptomic and pharmacological analysis.</a> Neurobiol Dis. 108, 225-237 (2017).</li>
<li>Ilyin, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+intracerebroventricular+lipopolysaccharide+administration+on+behavioral%2C+neurochemical%2C+and+neurogenomic+responses+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of intracerebroventricular lipopolysaccharide administration on behavioral, neurochemical, and neurogenomic responses in adult zebrafish.</a> Behav Brain Res. 493, 115676(2025).</li>
<li>Luo, R., Yao, Y., Chen, Z., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+examination+of+the+LPS-TLR4+immune+response+through+the+analysis+of+molecular+structures+and+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">An examination of the LPS-TLR4 immune response through the analysis of molecular structures and protein-protein interactions.</a> Cell Commun Signal. 23, 142(2025).</li>
<li>Grebennikova, D. V., Shandilya, U. K., Karrow, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+TLR4+and+its+alternative+lipopolysaccharide+%28LPS%29+sensing+pathways+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Beyond TLR4 and its alternative lipopolysaccharide (LPS) sensing pathways in zebrafish.</a> Genes. 16 (9), 1014(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Borosilicate Glass capillaries (Outer diameter 1.0 mm/ inner diameter 0.75 mm)</td><td>Sutter Instrument</td><td>BF150-75-10</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (cloruro di calcio)</td><td>Chempur</td><td>118748703</td><td></td></tr><tr><td>Callibration Slide (1/100 mm)</td><td>Bresser</td><td>5916710</td><td></td></tr><tr><td>Supporto per capillari (Grip head set 4 size 0)</td><td>Fertilart Sp. z o.o</td><td>5196082001</td><td></td></tr><tr><td>Puller per micropipette Flaming/Brown</td><td>Sutter Instrument</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Chempur</td><td>115752837</td><td></td></tr><tr><td>Human IL6</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>200-06-20UG</td><td>Concentrazione in stock: 10 &micro;g/mL, Concentrazione di lavoro: 2 pg/nL (diluito in NaCl 0,9%)</td></tr><tr><td>Pompa iniettore FemtoJet 4i</td><td>Eppendorf</td><td>E5252000021</td><td></td></tr><tr><td>KCl (cloruro di potassio)</td><td>Chempur</td><td>117397402</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot;6H2O (cloruro di magnesio esaidrato)</td><td>Chempur</td><td>116120500</td><td></td></tr><tr><td>Femtotips Microloader Tips per Microiniettore Femtojet</td><td>Eppendorf</td><td>EPE 5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio Leica M165 FC 1983 ingrandimento</td><td>Leica Microsysytems</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/ light-microscopes/stereo-microscopes/p/leica-m165-fc/</td><td></td></tr><tr><td>Olio minerale</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (cloruro di sodio)</td><td>Chempur</td><td>117941206</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5147-1G</td><td>Concentrazione in stock: 20 mg/mL (preparato in acqua ultra pura), Concentrazione di lavoro: 0,5 mg/mL (diluito in E3)</td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Sigma-Aldrich/Merck</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Carl Roth</td><td>4855.3</td><td></td></tr><tr><td>Blu di Tripano</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Agarose a basso punto di fusione</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>16520050</td><td></td></tr><tr><td>Estensione ZebraBox - Photo Motor Response EZBPMR</td><td>Animalab</td><td>https://animalab.eu/zebrabox-high-throughput-monitoring-system</td><td></td></tr><tr><td>Zebrabox</td><td>ViewPoint</td><td>https://www.viewpoint.fr/product/zebrafish/fish-behavior-monitoring/zebrabox</td><td>Camera di analisi automatizzata</td></tr></tbody></table>

microiniezione di interleucina-6 nel flusso sanguigno delle larve di pesce zebra tsc per studiare comportamenti simili a disturbi neuropsichiatrici

Microinjection of Interleukin-6 into the Bloodstream of TSC Zebrafish Larvae to Study Neuropsychiatric Disorder-Like Behaviors

Microiniezione di interleucina-6 nel flusso sanguigno delle larve di pesce zebra TSC per studiare comportamenti simili a disturbi neuropsichiatrici

Patients with tuberous sclerosis complex (TSC1/TSC2 mutations) exhibit variable expressivity of autism spectrum disorder (ASD), and maternal immune ...

La mia ricerca analizza come l'infiammazione indotta da IL-6 interagisce con mutazioni genetiche a rischio per l'autismo per influenzare lo sviluppo e il funzionamento del cervello. A differenza dell'infiammazione indotta in modo generalizzato dal LPS, questo protocollo aumenta selettivamente l'IL-6, consentendo un'indagine precisa degli effetti neurosviluppati specifici della citochina. Per iniziare, procurarsi gli aghi per microiniezione, i reagenti necessari e gli embrioni di pesce zebra di due giorni dopo la fecondazione.Preparare una soluzione di agarosio al 1% peso per volume nel mezzo E3, e riscaldarla fino a quando l'agarosio è completamente disciolto e la soluzione diventa limpida. Lasciare raffreddare brevemente la soluzione di agarosio. Versare circa 30 millilitri in una piastra di Petri da 100 millimetri per garantire uno strato uniforme sulla superficie.Quando l'agarosio è ancora liquido, ma inizia a solidificare, posizionare delicatamente un stampo in silicone sulla superficie per creare scanalature uniformi. Trasferire circa 100 embrioni corionati di due giorni dopo la fecondazione in una piccola piastra di Petri da 50 millimetri rivestita con agarosio. Aggiungere quattro millilitri di soluzione di pronasi appena preparata alla piastra, assicurandosi che gli embrioni siano completamente immersi.Incubare a temperatura ambiente per tre-cinque minuti. Al microscopio stereoscopico, monitorare il rilascio degli embrioni dai corioni. Ruotare o agitare delicatamente la piastra a intervalli per favorire la rimozione enzimatica dei corioni.Continuare fino a quando la maggior parte degli embrioni viene liberata dalle corioni. Lavare accuratamente gli embrioni trasferendoli attraverso cinque o sei cambi di mezzo embrionale E3 fresco. Assicurarsi che tutte le corioni e i residui di pronasi vengano rimossi per prevenire danni alle larve e mantenere condizioni di coltura ottimali.Utilizzando una pipetta di vetro di Pasteur, trasferire circa 50 larve dechorionate in una piastra di Petri da 100 millimetri contenente 40 millilitri di mezzo E3. Mantenere le larve nel mezzo E3 fino alla microiniezione. Sotto un microscopio stereoscopico, utilizzare pinzette fini per rompere con attenzione la punta della capillare di vetro precedentemente preparata, generando una micropipetta con un'apertura di circa tre micrometri di diametro.Preparare una soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% peso/volume per le iniezioni di controllo. E una soluzione di due picogrammi per nanolitro di Interleuchina 6 o IL-6 in cloruro di sodio allo 0,9% per le iniezioni di IL-6. Aggiungere un microlitro di blu di tripano allo 0,05% per ogni 10 microlitri di soluzione da iniettare per facilitarne la visualizzazione durante l'iniezione.Con una pipetta, caricare la soluzione in una punta microloader. Successivamente, utilizzare la punta microloader per riempire all'indietro l'ago da iniezione micropipettato preparato con circa tre microlitri di soluzione di iniezione, assicurandosi che non vengano introdotte bolle d'aria. Fissare l'ago da iniezione caricato nel supporto per capillari da collegare al sistema di microiniezione.Quindi posizionare una piccola goccia di olio minerale su un vetrino di calibrazione. Calibrare il volume di iniezione espellendo gocce nell'olio minerale. Misurare il diametro delle gocce utilizzando il vetrino di calibrazione dotato di scala da 0,01 millimetri.Regolare la pressione di iniezione per ottenere un volume di goccia di circa un nanolitro. Anestetizzare i larve in piccoli lotti aggiungendo tricaina al mezzo E3 fino a una concentrazione finale di 1X per minimizzare lo stress e garantire una sedazione costante. Trasferire singole larve di due giorni post-fecondazione su una piastra di iniezione con agarosio solidificato.Posizionare la piastra sotto il microscopio stereoscopico. Utilizzando una pipetta di vetro, orientare delicatamente ciascun larva in modo che il dotto di Cuvier sia chiaramente visibile e accessibile. Posizionare la punta della micropipetta nel punto di ingresso del dotto di Cuvier, seguendo il movimento delle cellule sanguigne verso il cuore sotto il microscopio stereoscopico.Iniettare la prima goccia della soluzione preparata nel dotto di Cuvier. Dopo circa 20 secondi, iniettare una seconda goccia nel dotto di Cuvier. Dopo l'iniezione, trasferire delicatamente le larve in una nuova piastra di Petri da 100 millimetri contenente 40 millilitri di mezzo E3.Riportare le larve in un incubatore a 28,5 gradi Celsius per il recupero. Il giorno successivo, ripetere la procedura di microiniezione come precedentemente dimostrato. A cinque giorni dalla fecondazione, utilizzare le larve per applicazioni successive, tra cui saggi comportamentali, imaging cerebrale o analisi di immunofluorescenza.La microiniezione di IL-6 non ha influenzato la vitalità delle larve rispetto alle iniezioni di cloruro di sodio. I tassi di sopravvivenza a cinque giorni dalla fecondazione non differivano tra i gruppi iniettati con IL-6 e quelli iniettati con NACL, indicando che il regime di somministrazione è ben tollerato e non introduce tossicità non specifica. Le microiniezioni hanno leggermente ridotto la vitalità rispetto ai fratelli non iniettati.I mutanti omozigoti per il complesso della sclerosi tuberosa 2, o TSC2, hanno mostrato livelli di base di prostaglandina E2 o PGE2 significativamente più elevati rispetto ai fratelli di tipo selvaggio. I mutanti eterozigoti per TSC2 hanno mostrato un lieve aumento, non significativo, della PGE2 basale rispetto ai fratelli di tipo selvaggio. I livelli di PGE2 sono aumentati notevolmente nei mutanti eterozigoti per TSC2 dopo microiniezione di IL-6.Il test del campo aperto ha mostrato che i mutanti TSC2 presentavano un comportamento simile all'ansia aumentato rispetto ai fratelli di tipo selvatico nei controlli non iniettati, e le microiniezioni di IL-6 non hanno influenzato questo comportamento. I mutanti TSC2 eterozigoti e omozigoti hanno trascorso significativamente più tempo nella zona periferica dell'arena ed hanno mostrato una ridotta esplorazione del centro rispetto ai fratelli di tipo selvatico sia nei controlli non iniettati che nei larve TSC2 iniettati con IL-6. Le iniezioni di IL-6 hanno aumentato i modelli di nuoto ripetitivi e stereotipati, in particolare nei mutanti TSC2 eterozigoti.La proporzione di mutanti eterozigoti TSC2 a cui &egrave; stata iniettata IL-6 e che mostravano un comportamento ripetitivo a circuito chiuso era significativamente aumentata rispetto ai controlli a cui era stato iniettato cloruro di sodio. Questo protocollo consente studi controllati sull'infiammazione indotta da IL-6 per valutare gli effetti dell'interazione tra geni e ambiente sullo sviluppo neurologico e sul comportamento nel pesce zebra. Tra le considerazioni fondamentali per l'esecuzione di questo protocollo vi sono l'utilizzo di aghi di dimensioni costanti, un volume di iniezione preciso di due nanolitri e la riduzione al minimo del tempo dei larvi fuori dal mezzo E3. Studi futuri potranno indagare come l'infiammazione indotta da IL-6 e il rischio genetico agiscano congiuntamente sullo sviluppo cerebrale e sul comportamento.

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Questo video mostra come morfolino o mRNA possono essere iniettati in embrioni di pesce zebra alla unicellulare stadio per diminuire o aumentare il livello di prodotti specifico gene durante lo sviluppo successivo.

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Il video dimostra la microiniezione di lipopolisaccaridi (LPS) nel cervello delle larve di zebrafish per indurre la neuroinfiammazione. Le larve vengono posizionate su un piatto foderato di agarosio, l'ago viene inserito nei ventricoli cerebrali e viene iniettato l'LPS. L'LPS iniettato innesca una risposta immunitaria che porta alla neuroinfiammazione.

Induzione della neuroinfiammazione nelle larve di pesce zebra con un'iniezione di lipopolisaccaridi

In questo articolo, abbiamo dimostrato un metodo per la manipolazione dell'espressione genica nelle cellule ventricolari del telencefalo zebrafish adulto utilizzando oligonucleotidi antisenso morpholino. Presentiamo questo metodo come protocollo efficiente e rapido che può essere utilizzato per studi funzionali nel cervello dei vertebrati adulto.

Micromanipolazione di espressione genica in Zebrafish adulti cervello con microiniezione Cerebroventricular di Morpholino oligonucleotidi

Microiniezione di zebrafish embrioni e le larve è una tecnica fondamentale ma impegnativa usata in molti modelli di zebrafish. Qui, presentiamo una gamma di strumenti di Microscala per aiutare nella stabilizzazione e orientamento di zebrafish per microiniezione e di imaging.

Dispositivi microstrutturati Microinjection ottimizzata e Imaging delle larve di Zebrafish

Qui presentiamo un protocollo per lo sviluppo e la caratterizzazione di un modello di epilessia zebrafish derivante dall'inibizione transitoria del gene DEPDC5.

Analisi comportamentale e fisiologica in un modello di zebrafish di epilessia

Il presente protocollo descrive l'iniezione intracerebroventricolare (ICV) di zebrafish adulto con 6-idrossidopamina neurotossica (6-OHDA) al diencefalo ventrale (Dn) e la valutazione della compromissione e del successivo recupero del comportamento di nuoto postlesione utilizzando il test in vasca aperta, che è accompagnato da analisi utilizzando un software di tracciamento video.

Valutazione locomotoria del modello di malattia di Parkinson a base di zebrafish adulto indotto da 6-idrossidopamina

Questo protocollo dimostra la microiniezione di lipopolisaccaride nella regione ventricolare del cervello in un modello larvale di zebrafish per studiare la risposta neuroinfiammatoria risultante e la neurotossicità.

Microiniezioni ventricolari cerebrali di lipopolisaccaride in larve di zebrafish per valutare la neuroinfiammazione e la neurotossicità

Dimostriamo un metodo che sfrutta la microscopia confocale a scansione rapida per eseguire l'imaging dal vivo delle cellule della microglia nel tectum ottico del pesce zebra in via di sviluppo, consentendo l'analisi della dinamica di queste cellule in vivo.

Imaging dal vivo e caratterizzazione della dinamica della microglia nell'embrione di zebrafish

Le RASopatie sono sindromi genetiche multisistemiche causate dall'iperattivazione della via RAS-MAPK. Varianti potenzialmente patogene in attesa di convalida emergono continuamente, mentre le scarse evidenze precliniche limitano la terapia. Qui, descriviamo il nostro protocollo in vivo per testare e convalidare in modo incrociato i livelli di attivazione ERK associati alla RASopathy e la sua modulazione farmacologica durante l'embriogenesi mediante imaging FRET dal vivo in zebrafish...

Un protocollo efficiente per valutare la modulazione dell'attività di ERK nei primi modelli di sindrome di Noonan del pesce zebra tramite microscopia FRET dal vivo e immunofluorescenza

International Institute of Molecular Mechanisms and Machines, IMol, Polish Academy of Sciences.  Per modellare come i segnali infiammatori influenzino lo sviluppo neuronaturale in organismi geneticamente suscettibili, presentiamo un protocollo per la microiniezione di IL-6 nel dotto di Cuvier (vena cardinale comune) delle larve di pesce zebra, consentendo un'induzione controllata dell'infiammazione e la valutazione del suo impatto sullo sviluppo nel contesto del complesso di sclerosi tuberosa (TSC).

Microiniezione di interleucina-6 nel flusso sanguigno delle larve di pesce zebra TSC per studiare comportamenti simili a disturbi neuropsichiatrici

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