Name: Principi di Site-Specific ricombinasi (SSR) Tecnologia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-29T12:11:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Scopri la tecnologia delle ricombinasi site-specific (SSR) per l'ingegneria genomica avanzata usando il sistema Cre/lox. Questo metodo consente la mutagenesi condizionale con maggiore flessibilità rispetto alle strategie tradizionali.

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principi di site-specific ricombinasi (ssr) tecnologia

Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology

Site-specific ricombinasi (SSR), la tecnologia consente la manipolazione della struttura dei geni per esplorare la funzione del gene ed è diventato uno strumento integrante della biologia molecolare. Site-specific ricombinasi sono proteine ​​che si legano a sequenze diverse di DNA bersaglio. Il Cre / lox sistema è stato descritto nel batteriofagi durante il 1980. Cre ricombinasi è una topoisomerasi di tipo I che catalizza site-specific ricombinazione del DNA tra due loxP (locus di X-over P1) siti. Il Cre / lox sistema non richiede alcuna cofattori. Sequenze loxP contenere distinti siti di legame per ricombinasi Cre che circondano una sequenza direzionale centrale, in cui la ricombinazione e riassetto avviene. Quando le cellule contengono siti loxP ed esprimono la ricombinasi Cre, si verifica un evento di ricombinazione. DNA a doppia elica viene tagliata in entrambi i siti loxP dalla ricombinasi Cre, riordinati, e legato (&quot;forbici e colla&quot;). Prodotti della manifestazione ricombinazione dipendono dalla orientazione relativa delle sequenze asimmetriche. La tecnologia SSR è spesso utilizzata come uno strumento per esplorare la funzione del gene. Ecco il gene di interesse è fiancheggiata da Cre bersaglio siti loxP (&quot;floxed&quot;). Gli animali vengono poi incrociate con gli animali che esprimono la ricombinasi Cre sotto il controllo di un promotore tessuto-specifica. Nei tessuti che esprimono la ricombinasi Cre si lega a sequenze target e accise il gene floxed. Delezione del gene controllato permette l&#39;indagine della funzione del gene nei tessuti specifici e in momenti distinti. Analisi della funzione del gene che impiegano la tecnologia SSR --- mutagenesi condizionale - ha notevoli vantaggi rispetto ai tradizionali knock-out in cui delezione del gene è spesso letale.

L&#39;avvento di un determinato sito ricombinasi (SSR), la tecnologia e la Cre / lox sistema ha portato a numerosi progressi nel campo della biologia molecolare, ed ha dimostrato di essere un prezioso strumento per valutare la funzione dei geni negli animali transgenici. Questa intervista discute il meccanismo di ricombinazione site specific di ciclizzazione ricombinasi (Cre) e come l&#39;utilizzo di questo enzima ha portato allo sviluppo di mutagenesi condizionale, che ha vantaggi significativi rispetto bussare tradizionali strategie.

Principi di Site-Specific ricombinasi (SSR) Tecnologia

La tecnologia della ricombinasi sito-specifica (SSR) consente la manipolazione della struttura genica per esplorare la funzione dei geni ed è diventata uno strumento essenziale della biologia molecolare...

Ciao, mi chiamo Frank Buchholz. Sono un responsabile di gruppo presso l'istituto Max PL di biologia cellulare e genetica molecolare. E il nostro lavoro viene mantenuto.Il nostro lavoro comprende due aspetti. Uno riguarda lo screening dell'RNA I. L'altro riguarda lo sviluppo di ricombinasi specifiche per siti per l'ingegneria genomica avanzata.Il mio background è quello di un biologo, un biologo molecolare, e ho studiato specializzandomi in biologia. Successivamente ho conseguito un dottorato di ricerca presso i Laboratori Europei di Biologia Molecolare di Heidelberg, e poi ho svolto un postdottorato a San Francisco presso l'UCSF con Mike Bishop, lavorando su modelli animali per la leucemia. L'Istituto Max Puncture qui a Dresda cerca di combinare, per così dire, almeno due aspetti diversi, ovvero biologi dello sviluppo e biologi cellulari, nell'ambito di un tentativo fondamentale che, secondo me, potrebbe essere descritto come il tema principale di base: cercare di comprendere come le cellule formano i tessuti.Questo è sostanzialmente l'obiettivo generale dell'istituto qui a Ston. Lavoriamo quindi su due campi principali. Un campo riguarda lo svolgimento di schermate con RNAi, cerca

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Corrente di HIV-1 strategie agire per sopprimere il ciclo di vita virale, ma non in modo efficace sradicare l'infezione. In questo studio dimostriamo che una ricombinasi progettato può DNA in modo efficiente accise integrati di HIV-1 provirale dal genoma delle cellule infette.

Intervista: HIV-1 DNA provirale escissione Utilizzando un ricombinasi Evolved

Il lievito mitocondriale proteina nucleoide, Mgm101, è una proteina di ricombinazione RAD52-tipo che forma grandi anelli oligomeriche. Un protocollo è descritto da preparare Mgm101 solubile ricombinante utilizzando la proteina legante il maltosio (MBP)-tagging strategia accoppiato con scambio cationico e cromatografia ad esclusione dimensionale.

Preparazione del Mgm101 ricombinazione delle proteine ​​da Strategy Tagging MBP-based

Le metodologie di targeting genico possono essere utilizzate per generare topi transgenici con alleli knockout, knock-in e marcati.  Qui, descriviamo un metodo migliorato di ricombinazione in E. coli, che chiamiamo "subclonaggio più inserimento", che può essere utilizzato per generare rapidamente vettori di targeting genico personalizzati.

Subcloning più Insertion (SPI) - A Novel Metodo recombineering per la costruzione rapida di gene targeting Vettori

Il minivettore di DNA lineare covalentemente chiuso (LCC) è un vettore di consegna genica non virale che offre un'elevata efficienza di trasfezione ed è rilevante per qualsiasi applicazione di consegna del DNA. Il sistema di produzione è semplice, rapido e scalabile in vivo. Il seguente protocollo fornisce istruzioni visive passo dopo passo per la produzione di somministrazioni di DNA.

La produzione di DNA a doppia elica Ministrings

Qui riportiamo un metodo di modifica genetica rapida ed efficiente in base RMCE nel locus AAVS1 di umani cellule staminali pluripotenti (hPSCs) che migliora i sistemi precedentemente descritti. Usando questa tecnica, linee isogeniche possono essere rapidamente e affidabile generati per adeguati studi comparativi, facilitando la ricerca transgenesi mediata con hPSCs.

Generazione rapida ed efficace delle ricombinante cellule staminali umane pluripotenti da ricombinasi mediata scambio Cassette in<em&gt; AAVS1</em&gt; Locus

Qui, presentiamo un protocollo dettagliato per identificare gli eventi di ricombinazione omologa che si è verificato nelle cellule staminali embrionali del mouse usando macchiare del sud e/o PCR. Questo metodo è esemplificato dalla generazione di modelli di non muscolare miosina II sostituzione genetica del mouse utilizzando tradizionale embrionale basati su cellule staminali omologa ricombinazione mediata tecnologia di targeting.

Identificazione di eventi di ricombinazione omologa in cellule staminali embrionali del Mouse mediante Southern Blotting e reazione a catena della polimerasi

Le endonucleasi di restrizione con nuova specificità della sequenza possono essere sviluppate da enzimi che riconoscono una sequenza parzialmente degenerata. Qui forniamo un protocollo dettagliato che abbiamo usato con successo per alterare la specificità della sequenza dell'enzima NlaIV. Gli ingredienti chiave del protocollo sono la compartimentazione in vitro della reazione di trascrizione/traduzione e la selezione di varianti con nuove specificità di sequenza.

In Vitro Diretto Evoluzione di una restrizione Endonucleato con più stringente specificità

La Biotinilazione potenziata per illuminazione limitata a posizione specifica AviTag (ALIBi) è un nuovo metodo optogeneticamente attivato sviluppato per il marcatore e la purificazione di affinità delle popolazioni subcellulari di ribosomi per sequenziamento a valle e analisi proteomiche.

Isolamento delle sottopopolazioni subcellulari di ribosomi basato su biotinilazione potenziata da illuminazione limitata da tag peptidico ricombinante specifico per peptidi

Qui riportiamo la generazione di Tre ricombinasi attraverso la regia, l'evoluzione molecolare. Tre ricombinasi riconosce un pre-definito sequenza bersaglio all'interno della sequenza LTR di HIV-1 provirus, con la conseguente escissione e l'eradicazione del provirus infette da cellule umane. Mentre ancora nella sua infanzia, per la regia evoluzione molecolare consentirà la creazione di enzimi personalizzati che fungeranno da strumenti di chirurgia molecolare e medicina molecolare.

Evoluzione molecolare del ricombinasi Tre

Prima di tentare l'intervento chirurgico, un chirurgo nuovo dovrebbe avere una formazione in tecniche chirurgiche di base e concetti. Questo articolo presenta le considerazioni chirurgiche di base con particolare attenzione alla roditori.

Principi di Chirurgia roditori per il chirurgo nuovo

Scopri la tecnologia delle ricombinasi site-specific (SSR) per l'ingegneria genomica avanzata usando il sistema Cre/lox. Questo metodo consente la mutagenesi condizionale con maggiore flessibilità rispetto alle strategie tradizionali.

Principi di Site-Specific ricombinasi (SSR) Tecnologia

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