Name: Un metodo definito a base di idrogel per generare organoidi mammari umani tridimensionali che riproducono la morfogenesi mammaria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Impara a generare organoidi mammari umani tridimensionali con un idrogel definito per studiare la morfogenesi mammaria. Questo metodo riproduce l'architettura tissutale e supporta la ricerca sullo sviluppo del seno e la carcinogenesi precoce.

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<table><tbody><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>Tubi sterili per lavorazione dei tessuti e centrifugazione</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>Dispositivo di filtrazione per la preparazione di sospensioni di cellule singole</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer for low volumes</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>Dispositivo di filtrazione per la preparazione di sospensioni di cellule singole</td></tr><tr><td>Automated cell counter</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>Dispositivo utilizzato per contare le cellule e determinare la vitalità</td></tr><tr><td>Bovine pituitary extract</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>Supplemento per i media delle cellule epiteliali</td></tr><tr><td>Cell counting slides</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>Diapositive a doppia camera utilizzate per il conteggio delle cellule</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>La centrifuga/le centrifughe da banco devono avere una capacità di velocità di almeno 500 x g e la possibilità di accogliere tubi da 15 mL e 1,5 mL. </td></tr><tr><td>Collagen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>Proteina della matrice extracellulare utilizzata per la formazione dell'idrogel</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>Enzima utilizzato per la dissociazione dei tessuti</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>Fialette sterili per la conservazione criogenica dei campioni</td></tr><tr><td>Culture vessels (e.g., chamber slides, multiwell plates)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>Piastrelle per la deposizione dell'idrogel e la coltura degli organuli.</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>Crioprotettore utilizzato nel mezzo di congelamento</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>Enzima utilizzato per la dissociazione secondaria dei tessuti</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>Enzima utilizzato durante la dissociazione cellulare.</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>Supplemento di siero utilizzato nei mezzi di lavaggio e neutralizzazione</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>Componente della matrice extracellulare</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>Supplemento per i media delle cellule epiteliali</td></tr><tr><td>Human epidermal growth factor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Supplemento per i media delle cellule epiteliali</td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>Supplemento per i media delle cellule epiteliali</td></tr><tr><td>Hyaluronic acid</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>Componente della matrice extracellulare per la formulazione dell'idrogel</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Enzima utilizzato per la dissociazione dei tessuti</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>Dispositivo utilizzato per l'incubazione dei tessuti</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Supplemento per i media delle cellule epiteliali</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Componente della matrice extracellulare</td></tr><tr><td>Mammary epithelial basal medium</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>Mezzo di crescita per le cellule epiteliali</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>Tubi utilizzati per reazioni a piccolo volume</td></tr><tr><td>Orbital rotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>Rotatore utilizzato per la dispersione dei tessuti durante la dissociazione enzimatica</td></tr><tr><td>P1000 pipette</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>Dispositivo utilizzato per miscelare e trasferire volumi fino a 1.000 &mu;L</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>Supplemento antibiotico per i media delle cellule epiteliali</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>Soluzione tampone utilizzata per il lavaggio e il risciacquo</td></tr><tr><td>Precision balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>Bilancia utilizzata per il pesaggio dei tessuti</td></tr><tr><td>Serological pipette</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>Pipetta utilizzata per la raccolta delle cellule epiteliali non aderenti</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>Reattivo utilizzato per la neutralizzazione del collagene</td></tr><tr><td>Sterile scalpels</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>Strumenti utilizzati per il taglio meccanico dei tessuti</td></tr><tr><td>Trypan blue solution</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Colorante utilizzato per la valutazione della vitalità cellulare</td></tr><tr><td>Trypsin (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Reattivo enzimatico utilizzato per la dissociazione cellulare</td></tr><tr><td>Water bath (37 &deg;C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>Dispositivo utilizzato per il disgelo controllato dei campioni</td></tr></tbody></table>

un metodo definito a base di idrogel per generare organoidi mammari umani tridimensionali che riproducono la morfogenesi mammaria

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

Un metodo definito a base di idrogel per generare organoidi mammari umani tridimensionali che riproducono la morfogenesi mammaria

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

La nostra ricerca si concentra sullo sviluppo e sulla lattazione del seno umano, sull'organizzazione del tessuto, sulle esposizioni ambientali e sui fattori genetici che portano a cambiamenti biologici nel cancro. I modelli esistenti non rappresentano in modo accurato l'architettura del tessuto mammario umano, i tempi di sviluppo e il microambiente. Questo protocollo colma il divario tra modelli bidimensionali e modelli animali all'interno di un sistema umano.Prelevare tessuto mammario umano digerito criopreservato per almeno 24 ore. Immergere immediatamente il viallo criogenico fino al tappo in un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius e scongelare rapidamente per un minuto per minimizzare la morte cellulare. Una volta completamente scongelato, trasferire il contenuto del viallo criogenico in un tubo conico da 15 millilitri contenente 10 millilitri di mezzo di crescita per cellule epiteliali mammarie, o MEGM, e centrifugare a 250g per cinque minuti.Dopo aver eliminato il soprannatante, risospendere il pellet in 500 microlitri di soluzione enzimatica di dissociazione preriscaldata a 37 gradi Celsius contenente tripsina allo 0,25%. Trasferire la sospensione in una provetta microcentrifuga

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Biologia dello sviluppo

Descriviamo un modello di coltura 3D dell'epitelio mammario umano adatto per studiare l'azione ormonale.

Una cultura Modello 3D Ormone-sensibile della Human ghiandola mammaria Epithelium

Questo manoscritto descrive una tecnica di litografia morbida a base di ingegnerizzare matrici uniformi di tridimensionale (3D) tessuti epiteliali di geometria definita circondati da matrice extracellulare. Questo metodo è suscettibile di una grande varietà di tipi di cellule e contesti sperimentali e consente di high-throughput screening di replicati identici.

Tessuti epiteliali Ingegneria tridimensionali integrati all&#39;interno di matrice extracellulare

Gli organoidi sviluppati dalle ghiandole mammarie del topo sono stati irradiati e caratterizzati per valutare i tratti epiteliali e le interazioni con le cellule immunitarie. Gli organoidi irradiati possono essere utilizzati per valutare meglio le interazioni delle cellule cellulari che possono portare al reclutamento di cellule tumorali nel tessuto normale irradiato.

Crescita e caratterizzazione di organoidi irradiati da ghiandole mammarie

Viene presentato un protocollo per generare organoidi endometriali primari umani costituiti da cellule epiteliali e stromali e che conservano le caratteristiche del tessuto endometriale nativo. Questo protocollo descrive i metodi dall'acquisizione del tessuto uterino all'elaborazione istologica degli organoidi endometriali.

Generazione di organoidi endometriali primari umani multicellulari

La ghiandola mammaria è una struttura bistrato, che comprende cellule epiteliali mitraeliliali ed interne interne. Presentato è un protocollo per preparare gli organoidi utilizzando la prova differenziale. Questo metodo efficiente consente ai ricercatori di manipolare separatamente questi due tipi di cellule per esplorare le domande riguardanti i loro ruoli nella forma e nella funzione della ghiandola mammaria.

Generazione di organoidi mammari mosaici per provepsinizzazione differenziale

L'obiettivo di questo protocollo è quello di biostampare direttamente le cellule epiteliali del seno come sferoidi multicellulari su reti endoteliali pre-formate per creare rapidamente modelli di co-coltura endoteliale del seno 3D che possono essere utilizzati per studi di screening farmacologico.

Biostampa diretta di Sferoidi mammari multicellulari 3D su reti endoteliali

L'obiettivo di questo protocollo è spiegare e dimostrare lo sviluppo di un modello microfluidico tridimensionale (3D) di tessuto cardiaco umano altamente allineato, composto da cardiomiociti derivati da cellule staminali co-coltivati con fibroblasti cardiaci (FF) all'interno di un idrogel biomimetico a base di collagene, per applicazioni nell'ingegneria dei tessuti cardiaci, nello screening dei farmaci e nella modellazione delle malattie.

Sviluppo di tessuto cardiaco umano organizzato in 3D all'interno di una piattaforma microfluidico

Questo protocollo discute un approccio per generare organoidi epiteliali dal tessuto mammario primario normale e tumorale attraverso la centrifugazione differenziale. Inoltre, sono incluse istruzioni per la coltura tridimensionale e l'imaging immunofluorescente di organoidi incorporati.

Generazione e imaging di organoidi epiteliali di topo e umani da tessuto mammario normale e tumorale senza passaggio

Qui, descriviamo un protocollo per la formazione di organoidi di timo derivati da iPSC umane cresciuti in idrogel di fibrina 3D con l'obiettivo di supportare la maturazione delle cellule epiteliali timiche (TEC) e il mantenimento prolungato, nonché la timopoiesi in vitro.

Formazione di organoidi di timo umano in idrogel di fibrina tridimensionali

C'è un bisogno critico di modelli di cancro 3D che catturino il crosstalk eterocellulare per studiare le metastasi del cancro. Il nostro studio presenta la generazione di epiteliali stromali eteromulticellulari in un ambiente privo di scaffold e scaffold che può essere utilizzato per studiare l'invasione e le distribuzioni spaziali cellulari.

Cellule stromali eteromulticellulari in colture 3D prive di scaffold di cellule tumorali epiteliali per guidare l'invasione

Impara a generare organoidi mammari umani tridimensionali con un idrogel definito per studiare la morfogenesi mammaria. Questo metodo riproduce l'architettura tissutale e supporta la ricerca sullo sviluppo del seno e la carcinogenesi precoce.

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Un metodo definito a base di idrogel per generare organoidi mammari umani tridimensionali che riproducono la morfogenesi mammaria

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