Name: La metafase DNA-FISH si diffonde per distinguere il DNA extracromosomico dalle regioni di colorazione omogenea nelle linee cellulari tumorali umane (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-08-04T13:35:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Scopri il protocollo DNA-FISH su metafasi per distinguere DNA extracromosomico da regioni HSR nelle linee cellulari tumorali umane. Questo metodo consente la visualizzazione dell'amplificazione oncogenica a risoluzione di singola cellula.

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la metafase dna-fish si diffonde per distinguere il dna extracromosomico dalle regioni di colorazione omogenea nelle linee cellulari tumorali umane

DNA-FISH Metaphase Spreads to Distinguish Extrachromosomal DNA from Homogeneously Staining Regions in Human Cancer Cell Lines

La metafase DNA-FISH si diffonde per distinguere il DNA extracromosomico dalle regioni di colorazione omogenea nelle linee cellulari tumorali umane

Whole-genome sequencing identifies focal DNA amplifications with base-pair resolution but cannot determine whether amplified sequences reside on ...

La nostra ricerca si concentra sulla determinazione se gli oncogeni amplificati si trovino su DNA extracromosomico o all'interno di regioni omogeneamente colorate integrate in modo distinto nel cromosoma. Il sequenziamento non riesce a distinguere il DNA ec (ecDNA) dall'amplificazione delle regioni omogeneamente colorate (HSR), quindi il nostro protocollo risolve questa questione a risoluzione monocellulare.Per iniziare, diluire la soluzione stock di Colcemid in rapporto 1:1 con acqua ultrapura sterile. Per l'arresto in metafase, aggiungere 100 microlitri della soluzione di Colcemid diluita alle cellule COLO320DM mantenute in 10 millilitri di terreno in fase di crescita logaritmica con una confluenza compresa tra il 70% e il 90%, e collocarle in un incubatore per colture cellulari da 45 minuti fino a tutta la notte. Preparare un fissativo di Carnoy fresco utilizzando un rapporto 3:1 di metanolo rispetto all'acido acetico. Mantenere il fissativo di Carnoy sul ghiaccio per tutta la durata della procedura di fissazione. Preparare una soluzione fresca di cloruro di potassio 0,075 molare e riscaldare la soluzione in un bagno termocontrollo a 37 gradi Celsius. Dopo la centrifugazione e i

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