Name: Lapprendimento della Drosophila operante presso il misuratore di coppia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-16T23:19:00.000+00:00
Duration: 17 min 31 s
Description: Scopri il metodo per misurare il momento di imbardata in Drosophila utilizzando un misuratore di coppia. Questo protocollo controlla età e dieta per studiare i comportamenti di apprendimento nella neurobiologia.

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Il design originale del compensatore di coppia nasce con Karl Goetz. La configurazione particolare in questa presentazione è in gran parte in prestito ed è stato originariamente sviluppato da Martin Heisenberg e Reinhard Wolf. Sono particolarmente in debito con queste due persone per il loro continuo sostegno, incoraggiamento e competenza.

Vola media La composizione del cibo mosca è fondamentale per l&#39;apprendimento (Guo et al, 1996.) <ul><li> 1000 ml di acqua </li><li> Farina di mais 180 g </li><li> 10 g di semi di soia </li><li> 18,5 g di lievito </li><li> Agar 7,5 g </li><li> 40 g di melassa </li><li> Sciroppo (barbabietola da zucchero) 40 g </li><li> Nipagin 2,5 g </li></ul> Ogni flacone è fornito con una piccola quantità di fresco, pasta di lievito vivo e un pezzo di carta da filtro per fornire una superficie aggiuntiva per le mosche e le pupe. Vola l&#39;allevamento e la stadiazione La seguente procedura viene eseguita ogni giorno, portando a proprio messo in scena gli animali cresciuti alla densità appropriata. Tutte le mosche nuova ecclosed dopo l&#39;ultima procedura del giorno prima sono raccolti per l&#39;allevamento ed esperimenti. La più antica fiale senza pupe vivono rimanenti vengono scartati. Quattro mosche giorno di vita vengono aggiunti a una fiala fresca per la deposizione di uova durante la notte. La densità di mosche femmina dovrebbe essere di circa 20 per ogni fiala, corretto per la dimensione del flaconcino e il ceppo utilizzato. La densità ideale è quella che è abbastanza alto per il mezzo volano per liquefare durante gli stadi larvali e abbastanza basso in modo che tutte le larve hanno pupated prima della ecclose prime mosche. La deposizione delle uova d&#39;aria dal giorno precedente vengono rimossi ed eliminati. Vola preparazione Le mosche sono tenuti a standard di farina di mais / melassa media come descritto sopra a 25 ° C e 60% di umidità con un regime di 12 ore light/12hr buio. Dopo aver brevemente immobilizzare le mosche vecchio 24-48h dal freddo anestesia, le mosche sono incollato (colla UV vetro adesivo, 505127A, Pacer Tecnologia, Cucamonga, Ca., USA) con la testa e il torace di un triangolo a forma di gancio di rame (diametro 0,05 millimetri ) il giorno prima dell&#39;esperimento. Gli animali vengono poi tenuti individualmente durante la notte in piccole camere umido contenente alcuni chicchi di saccarosio. Apparato Il dispositivo centrale del set-up è il compensatore di coppia (torsiometro) (Götz, 1964). Esso misura il momento angolare di una mosca intorno al suo asse verticale del corpo, causata da manovre di volo previsto. La mosca, incollati al gancio come sopra descritto, è collegato al contatore di coppia tramite un morsetto per realizzare volo stazionario al centro di un panorama cilindrico (arena, diametro 58mm), che è omogeneamente illuminato da dietro. La sorgente luminosa è un 100W, 12V tungsteno-iodio bulbo. Per l&#39;illuminazione verde e blu dell&#39;arena, la luce viene fatta passare attraverso monocromatica a banda larga Kodak Wratten filtri gelatina (# 47 e # 99, rispettivamente). I filtri possono essere scambiati da un solenoide veloce all&#39;interno di 0.1s. In alternativa, l&#39;arena è illuminato con &quot;luce del giorno&quot;, passando attraverso un filtro blu-verde (Rosco &quot;surfblue&quot; No. 5433), nessun filtro o del tutto. Lo spettro di trasmissione del blu-verde filtro Rosco utilizzato in questo studio è equivalente a quella di un filtro BG18 (Schott, Mainz) e costituisce un intermedio tra il blu Kodak e filtri verdi (Brembs e Hempel de Ibarra, 2006; Liu et al ., 1999). L&#39;arena può essere ruotato attorno al volo usando un computer a controllo motore elettrico. In una tale situazione &quot;simulatore di volo&quot;, la velocità angolare del campo è proporzionale, ma contro una coppia di imbardata della mosca (accoppiamento fattore K =- 11 ° / s • 10-10Nm). Questo permette al volo per stabilizzare il panorama e per controllare il suo orientamento angolare. Questo virtuale &quot;direzione di volo&quot; (cioè, la posizione arena) è registrata in modo continuo tramite un potenziometro circolare (Novotechnik, A4102a306). Una scheda analogica a quella digitale (PCL812; Advantech Co.) alimenta la posizione arena e il segnale di coppia di imbardata in un computer che memorizza le tracce (frequenza di campionamento 20 Hz) per una successiva analisi. La punizione è ottenuta applicando calore da un laser a infrarossi regolabile (825 nm, 150 mW), diretto da dietro e soprattutto sulla testa della mosca e del torace. Il raggio laser è pulsato (circa 200ms a larghezza d&#39;impulso ~ 4 Hz) e la sua intensità ridotta per assicurare la sopravvivenza della mosca. Esperimenti Modello di apprendimento Per il tradizionale modello di apprendimento-esperimento (Dill e Heisenberg, 1995; Dill et al, 1993, 1995;. Liu et al, 2006;. Liu et al, 1998;. Liu et al, 1999;. Wolf e Heisenberg, 1991) , quattro nero, a forma di T modelli di orientamento alternato (cioè due in piedi e due capovolto) sono distribuiti uniformemente sulla parete arena (modello larghezza ψ = 40 °, altezza θ = 40 °, larghezza delle barre = 14 °, come si è visto dalla posizione della mosca). Un programma per elaboratore divide il 360 ° dell&#39;arena virtuale in 4 quadranti 90 °, i cui centri sono indicati con i modelli. Le mosche controllare la posizione angolare dei modelli con la sua coppia di imbardata (simulatore di volo situazione). Durante l&#39;addestramento, la punizione di calore è fatto contiguo con la comparsa di uno degli orientamenti modello nel campo visivo frontale. Rinforzo di ciascun modelloè sempre pareggiato all&#39;interno dei gruppi. Durante il test, il calore è sempre spento e la preferenza modello della mosca registrato. Colore di apprendimento Apprendimento del colore viene eseguita come descritto in precedenza (Brembs e Heisenberg, 2000; Brembs e Hempel de Ibarra, 2006; Brembs e Wiener, 2006; Wolf e Heisenberg, 1997). L&#39;arena è divisa in quattro quadranti virtuali 90 °, i cui centri sono indicati con quattro strisce verticali uguali (larghezza ψ = 14 °, altezza θ = 40 °). La mosca è il controllo della posizione angolare dei quattro strisce uguali con la sua coppia di imbardata, come descritto per il T-forma di modelli di cui sopra. Il colore di illuminazione del campo tutto è cambiato ogni volta che una delle frontiere quadrante virtuale passa un punto di fronte al volo. Durante l&#39;addestramento, la punizione di calore è subordinata su uno dei due colori. Durante il test, il calore è sempre spento e la preferenza del colore della mosca registrato. Naturalmente, i colori possono essere combinati con i modelli per il condizionamento composto (Brembs e Heisenberg, 2001). Yaw coppia di apprendimento Apprendimento della coppia di imbardata viene eseguita come descritto in precedenza (Brembs e Heisenberg, 2000; Heisenberg e Wolf, 1993). La mosca spontanea gamma di coppia di imbardata è diviso in una &quot;sinistra&quot; e del dominio &quot;destra&quot;, che corrisponde circa a uno gira a sinistra oa destra. Non ci sono modelli a parete arena. Durante l&#39;addestramento, il calore viene applicata ogni volta che una coppia di imbardata della mosca è in un dominio e spento quando la coppia passa nell&#39;altro. Nelle fasi di test, il calore è sempre spento e la scelta della mosca di imbardata domini coppia viene registrato. Apprendimento composito Apprendimento composito è un&#39;estensione di apprendimento della coppia di imbardata, come descritto in precedenza (Brembs e Heisenberg, 2000). Fondamentalmente, l&#39;apprendimento della coppia di imbardata e l&#39;apprendimento dei colori sono combinati in un esperimento con operante equivalente (coppia di imbardata) e classica (colori) predittori. Durante l&#39;addestramento, la mosca è riscaldato ogni volta che una coppia di imbardata della mosca passa nel dominio associato con la punizione. Ogni volta che il volo passa domini coppia di imbardata, non solo la temperatura ma anche colorazione arena è cambiato (da verde a blu o viceversa). Così, il dominio della coppia di imbardata e di colore servire come predittori equivalente di calore. Nelle fasi di test, il calore viene definitivamente spenta e solo la scelta della mosca di colori coppia di imbardata domini / viene registrato. Discussione Questa configurazione sperimentale abbina il controllo superbo su circostanze sperimentale con un organismo avanzato modello genetico. Utilizzando le procedure descritte in questa presentazione, le basi molecolari e neurobiologiche di una serie di tratti comportamentali possono essere indagati, tra cui, ma non limitati a, i meccanismi di generazione comportamento spontaneo, condizionamento operante e classica, pattern recognition, visione a colori o in corso di controllo .

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	<li>Guo, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+visual+flight+orientation+in+Drosophila;+Dependence+on+age,+practice+and+diet.">Conditioned visual flight orientation in Drosophila; Dependence on age, practice and diet.</a> Learn. Mem.. 3, 49-59 (1996).</li><li>Goetz, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optomotorische+Untersuchung+des+visuellen+Systems+einiger+Augenmutanten+der+Fruchtfliege+Drosophila.">Optomotorische Untersuchung des visuellen Systems einiger Augenmutanten der Fruchtfliege Drosophila.</a> Kybernetik. 2, 77-92 (1964).</li><li>Liu, L., Wolf, R., Ernst, R., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Context+generalization+in+Drosophila+visual+learning+requires+the+mushroom+bodies.">Context generalization in Drosophila visual learning requires the mushroom bodies.</a> Nature. 400, 753-756 (1999).</li><li>Brembs, B., Hempel de Ibarra, N. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+parameters+support+generalization+and+discrimination+learning+in+Drosophila+at+the+flight+simulator.">Different parameters support generalization and discrimination learning in Drosophila at the flight simulator.</a> Learn. Mem. 13, 629-637 (2006).</li><li>Liu, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+memory+traces+for+two+visual+features+in+the+Drosophila+brain.">Distinct memory traces for two visual features in the Drosophila brain.</a> Nature. 439, 551-556 (2006).</li><li>Wolf, R., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+organization+of+operant+behavior+as+revealed+in+Drosophila+flight+orientation.">Basic organization of operant behavior as revealed in Drosophila flight orientation.</a> J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol. 169, 699-705 (1991).</li><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+visual+flight+orientation+in+Drosophila+melanogaster+abolished+by+benzaldehyde.">Conditioned visual flight orientation in Drosophila melanogaster abolished by benzaldehyde.</a> Pharmacol Biochem Behav. 61, 349-355 (1998).</li><li>Dill, M., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+pattern+memory+without+shape+recognition.">Visual pattern memory without shape recognition.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 349, 143-152 (1995).</li><li>Dill, M., Wolf, R., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+pattern+recognition+in+Drosophila+involves+retinotopic+matching.">Visual pattern recognition in Drosophila involves retinotopic matching.</a> Nature. 365, 751-753 (1993).</li><li>Dill, M., Wolf, R., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+analysis+of+Drosophila+landmark+learning+in+the+flight+simulator.">Behavioral analysis of Drosophila landmark learning in the flight simulator.</a> Learn. Mem. 2, 152-160 (1995).</li><li>Wolf, R., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+Space+from+Visual+Motion:+Turn+Integration+in+Tethered+Flying+Drosophila.">Visual Space from Visual Motion: Turn Integration in Tethered Flying Drosophila.</a> Learn. Mem. 4, 318-327 (1997).</li><li>Brembs, B., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+operant+and+the+classical+in+conditioned+orientation+in+Drosophila+melanogaster+at+the+flight+simulator.">The operant and the classical in conditioned orientation in Drosophila melanogaster at the flight simulator.</a> Learn. Mem. 7, 104-115 (2000).</li><li>Brembs, B., Wiener, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Context+generalization+and+occasion+setting+in+Drosophila+visual+learning.">Context generalization and occasion setting in Drosophila visual learning.</a> Learn. Mem. 13, 618-628 (2006).</li><li>Brembs, B., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioning+with+compound+stimuli+in+Drosophila+melanogaster+in+the+flight+simulator.">Conditioning with compound stimuli in Drosophila melanogaster in the flight simulator.</a> J Exp Biol. 204, 2849-2859 (2001).</li><li>Heisenberg, M., Wolf, R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sensory-motor+link+in+motion-dependent+flight+control+of+flies.">The sensory-motor link in motion-dependent flight control of flies.</a> Rev. Oculomot. Res. 5, 265-283 (1993).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Questa configurazione sperimentale abbina il controllo superbo su circostanze sperimentale con un organismo avanzato modello genetico. Utilizzando le procedure descritte in questa presentazione, le basi molecolari e neurobiologiche di una serie di tratti comportamentali possono essere indagati, tra cui, ma non limitati a, i meccanismi di generazione comportamento spontaneo, condizionamento operante e classica, pattern recognition, visione a colori o in corso di controllo .

l&#39;apprendimento della drosophila operante presso il misuratore di coppia

Operant Learning of Drosophila at the Torque Meter

Per gli esperimenti al contatore di coppia, le mosche sono conservati su supporto standard di volare a 25 ° C e 60% di umidità con un regime di 12 ore light/12hr buio. Un regime di allevamento standard assicura adeguata densità larvale e di pari età coorti. Freddo anestetizzati mosche sono incollati con la testa e il torace di un triangolo a forma di gancio il giorno prima l&#39;esperimento. In allegato al metro coppia tramite un morsetto, manovre di volo destinato al volo sono misurati come il momento angolare attorno al suo asse verticale del corpo. La mosca è posto al centro di un panorama cilindrico per realizzare volo stazionario. Un convertitore analogico digitale a carta alimenta il segnale di coppia di imbardata in un computer che memorizza la traccia per un&#39;analisi successiva. Il computer controlla anche una varietà di stimoli che può essere tenuta sotto controllo della mosca chiudendo il circuito di feedback tra questi stimoli e la traccia della coppia di imbardata. La punizione è ottenuta applicando calore da un laser a infrarossi regolabile.

Misurazione della coppia di imbardata Drosophila legato con il misuratore di coppia consente il controllo squisito neuroscienziato della situazione stimolo degli animali sperimentali. Insieme con gli strumenti genetico unico disponibile nel moscerino della frutta, questo paradigma è utilizzato per una vasta gamma di ricerca neurobiologica.

L&#39;apprendimento della Drosophila operante presso il misuratore di coppia

Per gli esperimenti al torsiometro, le mosche vengono mantenute su terreno di coltura standard per Drosophila a 25°C e 60% di umidità, con un regime di luce/buio di 12h/12h. Un...

Ciao, mi chiamo Bian Brims. Sono un neurobiologo e lavoro presso la Libera Università di Berlino in Germania. Oggi vi mostrerò come prepariamo i moscerini della frutta drosophila per imparare a imparare i colori o i motivi o il proprio comportamento o qualsiasi combinazione dei tre moscerini della frutta potrebbe essere in grado di imparare, ma probabilmente non sono intelligenti come altri animali, quindi dobbiamo essere davvero gentili con loro e trattarli bene.Due dei fattori più importanti per quanto riguarda l'apprendimento del moscerino della frutta sono la loro età e la loro dieta. Ora vi mostrerò il nostro regime speciale di riproduzione delle mosche. Quindi, per mettere in scena le mosche, dobbiamo mettere nuove mosche sul cibo, su nuovo cibo ogni singolo giorno.Quindi quelli sono qui ora 10 giorni di mosche con le mosche più giovani che vengono appena depositate come uova sulla prima nella prima fiala e le mosche più vecchie appena nate nell'ultima fiala. La prima cosa che fai è rimuovere tutte le mosche che si sono schiuse dalle fiale in questo modo. Non ci sono più mosche in questo, in questo set di fiale, e domani ogni nuova mosca che avrete lì dentro avrà esattamente tra le zero e le 24 ore.Quindi è così che controlliamo l'età delle nostre mosche. Ora dobbiamo controllare la densità della mosca in modo che ogni mosca riceva una scorta sufficiente di cibo. Per fare ciò, per prima cosa scartiamo le mosche che hanno deposto le uova durante la notte e prepariamo una nuova fiala con mosche di quattro giorni che contengono circa 20 mosche femmine.Questa è la densità alla quale questo particolare ceppo produce almeno abbastanza ma non troppa prole in modo che non ci sia troppa competizione per il cibo nella fiala e la progenie di queste mosche imparerà bene. Innanzitutto, abbiamo bisogno di un modo per attaccare le mosche al nostro dispositivo di misurazione, il torsiometro. Per questo, incolliamo le mosche a piccoli ganci triangolari di rame e poi usiamo un morsetto per afferrare quei ganci che mettiamo nel torsiometro.Ed è così che realizziamo questi ganci. Avvolgiamo semplicemente un filo di rame, un filo di rame attorno a un piccolo strumento triangolare, e poi tagliamo un lato del filo e ciò che cadrà alla fine sono piccoli ganci di rame, come potete vedere. Ora, prendiamo uno di quei ganci e poi lo mettiamo in un morsetto, che è attaccato a micro manipolatori.Mettiamo un po' di colla proprio qui sulla punta dell'amo, e poi posizioniamo l'amo nel morsetto proprio sotto lo stereomicroscopio. Quindi cerchiamo di isolare il minor numero possibile di mosche femmine. Usiamo le mosche femmine perché sono più grandi delle mosche maschi, non a causa di un pregiudizio sessuale.I moscerini maschi imparano altrettanto bene delle mosche femmine, e anche noi li anestetizziamo a freddo il più brevemente possibile, in modo che il più leggero possibile, il più leggero, l'anestesia possibile, e per il minor tempo possibile, posizioniamo una mosca femmina sotto l'amo e scartiamo le mosche rimanenti in modo che la mosca rimanga ferma. E con il lato dorsale rivolto verso l'alto, appesantiamo leggermente la mosca fino a quando non è perfettamente allineata, e poi posizioniamo l'amo utilizzando i micro manipolatori esattamente sopra la mosca, proprio tra la testa e il torace. Ora abbassiamo il gancio fino a quando la goccia di colla non entra in contatto con la mosca, quindi polimerizziamo rapidamente la colla usando la lampada UV e per ridurre al minimo il tempo in anestesia fredda, la solleviamo immediatamente dal pipistrello freddo.Ancora qualche secondo di stagionatura e la mosca dovrebbe svegliarsi. E se ora soffiamo la mosca, vedremo che sta volando molto bene. Quindi prendiamo la mosca e la mettiamo in un piccolo contenitore contenente carta da filtro e saccarosio.Pochi granelli di saccarosio affinché le mosche siano in grado di sopravvivere alla notte per pro, dobbiamo fornire loro acqua. E per questo copriamo la fiala, la posizioniamo al centro, il volano, e la apriamo solo un po'. E ora hanno carta da filtro umida e saccarosio, quindi hanno cibo e acqua per la notte in modo che noi, loro siano pronti per l'esperimento di domani.Dietro di me si vede la configurazione che usiamo per i nostri esperimenti. Il pezzo centrale è il compensatore di coppia che potete vedere qui, l'oggetto cilindrico, e metteremo la mosca più tardi proprio qui sotto il compensatore. Vedete cosa usiamo per generare un ambiente per la mosca.È composta da questa scatola nera con un'arena al suo interno, e la scatola nera è circondata da guide luminose, che trasmettono la luce dalla fonte di luce qui per illuminare l'arena da dietro. I dati che acquisiamo con il compensatore di coppia passano attraverso alcuni componenti elettronici nel computer in cui sono memorizzati. Ma oltre a memorizzare i dati dal comportamento della mosca, il computer controlla una varietà di altri strumenti.Uno di questi è, ad esempio qui, un insieme di filtri con cui possiamo morire, l'ambiente della mosca, verde o blu, per esempio. Un altro dispositivo è un motore elettrico, che fa girare l'arena come potete vedere qui, in modo che la mosca abbia l'impressione che stia effettivamente volando in una sorta di situazione di simulatore di volo. Puoi farlo, ad esempio, con diversi modelli visivi come questi t verticali e invertiti.Un terzo dispositivo è un laser che si trova qui. Si tratta di un laser a infrarossi abbastanza debole, che possiamo usare per riscaldare la mosca, che è uno stimolo ververso avverso. Ok, quindi ecco le mosche.Ora scegliamone uno, prendiamolo per il gancio e poi prendiamo il morsetto. Posiziona la mosca il più simmetricamente possibile nel morsetto in modo che sia centrale e che l'angolo del corpo della mosca sia di circa 30-40 gradi. Assicurati solo che tutto funzioni correttamente.Certo, di solito le luci saranno spente in questa stanza e sarà buio in modo che non ci siano stimoli distraenti per la mosca. Ma per questa dimostrazione, lo lasceremo da parte in modo che tu possa vedere i dettagli dell'esperimento. Ora abbassiamo la mosca nell'ambiente, nell'arena, apriamo il chiavistello di sicurezza.Quindi ora quello che dobbiamo fare è regolare l'yar della mosca. È impossibile posizionarlo esattamente al centro del dispositivo di misurazione, in modo che il volo diretto per la mosca sia anche il volo diretto nel nostro dispositivo di misurazione. Al fine di compensare questo probabile problema, gireremo l'arena intorno alla mosca a una certa velocità per suscitare un movimento di rotazione, una risposta automobilistica, e faremo in modo che questa massima risposta automobilistica a sinistra e a destra, ruotando a zero simmetrici, in modo che esattamente il centro tra queste due massime risposte automobilistiche corrisponda al volo dritto.Quindi l'ultimo compito che ci rimane prima di poter iniziare il nostro esperimento è quello di regolare la punizione, il laser che usiamo per riscaldare le mosche. Per questo, uso un piccolo pezzo di filtro a infrarossi che filtra il calore quanto basta in modo che la mosca non ne senta molto, ma posso ancora vederlo sul mio monitor qui. Quindi ho una piccola macchina fotografica, una telecamera a infrarossi che monitora la mosca e che posso usare per regolare il laser fino a quando non è focalizzato sulla testa della mosca.E poi, poiché abbiamo un cilindro a strisce per la risposta automobilistica, lo sostituiamo con la nostra arena preferita. In questo caso, un'arena vuota che conduce solo a un ambiente completamente bianco per il volo. Puoi vedere che l'ambiente per la mosca è completamente bianco.Non ci sono altri stimoli. C'è fondamentalmente, poiché è molto chiuso, non c'è stimolazione olfattiva. C'è pochissima altra stimolazione che la mosca potrebbe percepire.Sta volando fermo. Nulla sta realmente cambiando nell'ambiente della mosca, ma sta ancora producendo un comportamento molto variabile che va dalla virata a sinistra a quella a destra, alla virata e alla variabilità all'interno di questi due domini. Ok, e ora ti mostrerò la versatilità di questa configurazione e come puoi usarla per addestrare le mosche.Una volta che sono nel simulatore, una delle cose che puoi fare è semplicemente ora che le mosche hanno questa arena bianca vuota, ora puoi dire, ok, ogni volta che giri a destra, ti riscalderemo. Questo è qualcosa che possiamo impostare molto facilmente. Come hai visto, parlare in giardino in modo positivo significa calore in un discorso in giardino negativo, ad esempio, significa calore spento.Inoltre, quello che possiamo fare, possiamo aiutare le mosche mostrando loro cosa è giusto e cosa è rimasto colorando l'arena di verde o blu quando girano a destra o a sinistra. Quindi questo è ciò che stiamo facendo qui ora. Quindi ora la mosca sta producendo a destra girando il tuo tork.Come avete visto il colore è cambiato da verde a blu, ma ora sta tornando indietro. Quindi ora vedete che la mosca sta producendo un tork di cortile nel dominio di virata a destra impunito, e non appena si immerge nel dominio punitivo, il calore si accende e la mosca si allontana molto rapidamente dal calore. Come puoi vedere, modula il suo tork da giardino molto rapidamente per uscire dal calore.Non appena se ne accorge sta diventando caldo. Allo stesso tempo, cercherà comunque di produrre un comportamento nell'intera gamma di movimento, che preveniamo riscaldando la mosca. Quindi questo è più o meno il modo in cui puoi insegnare alle mosche a imparare i colori o il loro comportamento che sono a sinistra, a destra, giranti o entrambi insieme.Più tradizionalmente, però, questa configurazione è stata utilizzata per circa 15, 20 anni per insegnare alle mosche a distinguere tra diversi modelli visivi. Possiamo farlo molto facilmente. Togliamo semplicemente il filtro colore, fermiamo questo programma e sostituiamo l'arena che prima era vuota.Ora con questa arena con T verticali e invertite, e poi dobbiamo cambiare il programma e iniziare il programma per questo apprendimento del modello. Quello che potete vedere ora è che la mosca, che è la traccia qui al centro, sta controllando. Questa è la seconda traccia, è il controllo della posizione dell'arena.In questi istogrammi che vedete qui, vedete la quantità di tempo che la mosca sta trascorrendo volando verso i quattro diversi modelli. Quindi in verde si vedono gli schemi che verranno successivamente riscaldati e in giallo gli schemi che non vengono puniti. Quindi, in questa fase, ora, abbiamo attivato la punizione, e ogni volta che questa traccia qui, ora che è verde, è nella parte superiore e inferiore o nella zona centrale, la mosca si riscalda.Quindi quello che vedete è che la mosca, non appena entra in quelle aree, si allontana da esse. Quindi cambia la direzione del volo lontano dal calore. Puoi anche vederlo di nuovo negli istogrammi dove ora i tee puniti sono mostrati qui, e che non appena il volo entra qui, viene punito e si allontana rapidamente dal calore che cerca di tanto in tanto di spostarsi verso l'altro modello, ma si sposta molto rapidamente verso il modello non riscaldato.Questo è il modo tradizionale in cui negli anni '90 le persone hanno iniziato a condizionare le mosche, e questa è la tradizione in cui mi trovo. L'intera configurazione non è stata sviluppata da me, in parte da me, ma la maggior parte di questo progetto ha avuto origine negli anni '60 a Guten con Carl Guts, poi si è trasferito a Burg nel laboratorio di Martin Heisenberg e Reinhard Wolf. Quelle due persone in particolare sono state quelle dietro lo sviluppo dell'apprendimento dei modelli in questa situazione del simulatore di volo che avete appena visto, ho fatto il mio dottorato di ricerca con Martin Heisenberg inwards book, e lui è stato così gentile da prestarmi questa configurazione per i miei esperimenti qui a Berlino.

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Questo video descrive il sistema di monitoraggio dell'attività di Drosophila (DAM) utilizzato per monitorare l'attività locomotoria. I ricercatori utilizzano i dati sull'attività raccolti dal DAM per studiare i ritmi circadiani nei moscerini della frutta. La clip del protocollo in primo piano mostra come caricare le mosche nel dispositivo e registrare i dati di attività per gli esperimenti circadiani.

drosofila Activity Monitor (DAM): un metodo per misurare l'attività locomotoria nelle mosche

Questo rapporto descrive un metodo per misurare l'attività larvale di Drosophila utilizzando il TriKinetics Drosophila Activity Monitor. Il dispositivo utilizza raggi infrarossi per rilevare i movimenti di un massimo di 16 singoli animali. I dati possono essere analizzati per rappresentare i parametri di movimento, tra cui i tassi e le posizioni degli animali all'interno delle camere di saggio.

Misura della larvali attività nel<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Descriviamo qui un metodo di configurazione comportamentale e di analisi dei dati per analizzare le risposte olfattive di un massimo di 100 mosche dell'aceto (Drosophila melanogaster). Questo sistema può essere utilizzato con stimoli olfattivi singoli o multipli e può essere adattato per l'attivazione optogenetica o il silenziamento di sottogruppi neuronali.

Comportamenti olfattive analizzati da Computer di monitoraggio di<em&gt; Drosophila</em&gt; In un Olfattometro quattro quadranti

La rotazione esercitare quantificazione sistema (Rich) può indurre esercizio in Drosophila melanogaster attraverso rotazione misurando contemporaneamente la quantità di attività svolta dagli animali. Qui, presentiamo un protocollo punto-per-punto dettagliare come misurare i livelli di attività degli animali vivendo rotazionale esercizio trattamenti utilizzando il...

Misurazione dei livelli di esercizio in Drosophila melanogaster utilizzando il sistema di quantificazione esercizio rotanti (Rich)

Il TreadWheel utilizza il movimento rotatorio per indurre delicatamente esercizio in adulto Drosophila melanogaster sfruttando geotassi negativa, innata dei mosche. Per l'analisi delle interazioni tra fattori, come il genotipo, il sesso e dieta e loro effetto sui dosaggi fisiologici e molecolari ed esercizio permette di valutare la salute metabolica.

Il TreadWheel: Protocollo di allenamento intervallo per delicatamente indotto da esercizio in Drosophila melanogaster

Il presente protocollo valuta l'attività locomotoria di Drosophila tracciando e analizzando il movimento delle mosche in un'arena fatta a mano utilizzando il software open source Fiji, compatibile con plugin per segmentare i pixel di ogni fotogramma in base alla registrazione video ad alta definizione per calcolare i parametri di velocità, distanza, ecc.

Una semplice tecnica per analizzare l'attività locomotoria nella Drosophila

L'obiettivo di questo protocollo è quello di fornire esercizio di volo per il moscerino della frutta Drosophila. Risultati rappresentativi mostrano che l'allenamento con esercizi di volo si traduce in un aumento della capacità aerobica e della resistenza a una dieta ricca di grassi.

FLEX: Protocollo di allenamento al volo per il moscerino della frutta Drosophila

Scopri il metodo per misurare il momento di imbardata in Drosophila utilizzando un misuratore di coppia. Questo protocollo controlla età e dieta per studiare i comportamenti di apprendimento nella neurobiologia.

L'apprendimento della Drosophila operante presso il misuratore di coppia

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