Name: Separazione elettroforetica delle proteine (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Impara la separazione elettroforetica delle proteine tramite PAGE per analisi proteomica. Questo metodo consente di separare proteine da miscugli complessi in base a carica e dimensione molecolare.

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Il protocollo testo completo di questo approccio sperimentale è disponibile in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471142720/cp/cpmb/article/mb1002a/current/abstract" target="_blank">protocolli di corrente in Biologia Molecolare</a> .

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

separazione elettroforetica delle proteine

Electrophoretic Separation of Proteins

Elettroforesi viene utilizzata per separare miscele complesse di proteine ​​(per esempio, dalle cellule, frazioni subcellulari, frazioni colonna o immunoprecipitati), per indagare composizioni subunità, e per verificare l&#39;omogeneità dei campioni di proteine. Può anche servire a purificare le proteine ​​per l&#39;uso in altre applicazioni. Elettroforesi in gel di poliacrilamide, proteine ​​migrano in risposta ad un campo elettrico attraverso i pori in una matrice di gel di poliacrilammide; dimensione dei pori diminuisce con l&#39;aumentare la concentrazione di acrilamide. La combinazione di dimensione dei pori e la carica di proteine, le dimensioni e la forma determina il tasso di migrazione della proteina. In questa unità, il metodo standard Laemmli è descritto per elettroforesi su gel discontinuo in condizioni di denaturazione, cioè, in presenza di sodio dodecil solfato (SDS).

In questo video, si dimostra un metodo per la separazione elettroforetica di proteine ​​mediante poli-acrylimide elettroforesi su gel (PAG).

Separazione elettroforetica delle proteine

L'elettroforesi viene utilizzata per separare miscele complesse di proteine (ad esempio, provenienti da cellule, frazioni subcellulari, frazioni di colonna o immunoprecipitati), per...

La separazione di proteine individuali da miscele proteiche complesse può essere ottenuta mediante elettroforesi su gel di poliacrilamide, nota anche come PAGE. Le proteine migrano in risposta a un campo elettrico attraverso i pori della matrice del gel. La combinazione delle dimensioni dei pori del gel e della carica, delle dimensioni e della forma della proteina determina la velocità di migrazione della proteina. In questo video, illustreremo un metodo per la separazione elettroforetica delle proteine.Ciao, sono il dottor Bobul Chakravarti del Centro di Proteomica dell'Istituto Graduate Keck delle Scienze della Vita Applicate. Oggi vi mostrerò un procedimento per eseguire l'elettroforesi su gel 1D. Cominciamo dunque.Per iniziare, assemblare il sandwich di lastre di vetro dell'apparato di elettroforesi seguendo le istruzioni del produttore, utilizzando due lastre di vetro pulite e due distanziali da 1,5 millimetri. Ora fissare il sandwich di lastre di vetro al supporto per la colatura. Successivamente, preparare la soluzione del gel di separazione descritta nei protocolli correnti.Aggiungere la quantità specificata di perossodisolfato di ammonio al 10% e versare nella soluzione, q

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Questo video mostra una tecnica di separazione denaturante basata su poliacrilammide per proteine. Questa tecnica aiuta nell'identificazione preliminare delle proteine in base al loro peso molecolare.

Elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecil solfato per l'analisi delle proteine: una tecnica per separare e visualizzare le proteine in base al peso molecolare

Questo video descrive la PAGINA multimerica per la separazione di complessi proteici nativi da omogeneizzati tissutali. La tecnica è un ibrido tra le tecniche blue native-PAGE e SDS-PAGE. I complessi separati possono essere caratterizzati e studiati per il loro ruolo nel funzionamento cellulare.

Multimer-PAGE per la separazione di complessi proteici nativi: una tecnica di separazione ibrida costituita da Blue Native-PAGE e SDS-PAGE per separare le proteine multimeriche intatte dal lisato tissutale

In questo video, dimostriamo un metodo di elettroforesi su gel bidimensionale che separa singole proteine da una complessa miscela proteica ottenuta da tessuti tumorali di adenoma ipofisario umano non funzionale (NFPA). Le proteine vengono separate in base alla loro carica elettrica nella prima dimensione e ulteriormente separate in base ai pesi molecolari nella seconda dimensione.

Elettroforesi su gel di poliacrilammide bidimensionale: una tecnica di separazione per l'analisi delle proteine in una miscela proteica complessa basata sulla carica e sul peso molecolare

Questo protocollo descrive come preparare ed eseguire l'elettroforesi di intrappolamento della frazione liquida eluita in gel nativo chiaro (CN-GELFrEE), una tecnica di separazione nativa per assemblaggi biomolecolari non covalenti e proteine da campioni eterogenei compatibile con varie tecniche di analisi delle proteine a valle.

CN-GELFrEE - Clear nativo Gel-eluito Frazione Liquid Entrapment elettroforesi

Dopo la separazione con metodi elettroforetica, le proteine ​​in un gel può essere rilevato da diversi metodi di colorazione. La colorazione delle proteine ​​con Coomassie Blue, colorazione Silver, SYPRO Orange, SYPRO Ruby sono dimostrate in questo video.

Colorazione proteine ​​in gel

Stampa microcontact viene utilizzato estensivamente alle proteine ​​modello e altre molecole sulle superfici dei materiali. Dimostriamo i passaggi fondamentali di questo processo, stampaggio modelli di fibronectina su vetro.

Stampa microcontatto di proteine ​​per Cell Biology

L'accoppiamento e separazione tetrade sono necessari per l'analisi genetica...

Accoppiamento e di separazione Tetrade Chlamydomonas reinhardtii Per l&#39;analisi genetica

Ratto MSC sono stati isolati da femori e delle tibie e poi arricchita da cell sorting magnetico. Cellule ordinati sono stati confermati per l'espressione di marcatori di superficie mediante citometria a flusso. Queste cellule sono state coltivate a densità clonale a formare singole colonie e poi queste colonie erano separate da cilindri di clonazione.

L&#39;isolamento e l&#39;arricchimento delle cellule staminali mesenchimali di ratto (MSC) e la separazione dei Single-colonia di cellule staminali mesenchimali derivate

I protocolli di descrivere le fasi essenziali per ottenere cristalli di diffrazione qualità di una proteina di membrana a partire dalla ricostituzione della proteina in una fase lipidica cubi (LCP), trovando condizioni iniziali con LCP-FRAP pre-cristallizzazione analisi, la creazione di processi di cristallizzazione LCP e cristalli di raccolta .

Cristallizzazione delle proteine ​​di membrana lipidica in Mesophases

Calmodulina (CaM) pull-down saggio è un modo efficace per studiare l'interazione del CAM con varie proteine. Questo metodo utilizza CaM-sefarosio perle per l'analisi efficiente e specifica di CaM proteine ​​leganti. Questo fornisce un importante strumento per esplorare segnalazione CaM in funzione cellulare.

Pull-down di Calmodulina proteine ​​leganti

Impara la separazione elettroforetica delle proteine tramite PAGE per analisi proteomica. Questo metodo consente di separare proteine da miscugli complessi in base a carica e dimensione molecolare.

Separazione elettroforetica delle proteine

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