Name: Etichettatura in vitro di cellule staminali embrionali umane per la Risonanza Magnetica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-03T14:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 41 s
Description: Scopri l'etichettatura di cellule staminali embrionali umane con cloruro di manganese per la risonanza magnetica. Questo metodo offre un segnale MRI positivo e traccia solo le cellule vitali attraverso i canali del calcio.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Etichettatura di manganese di cellule staminali embrionali umane <ol><li> Trypsinize i gambi embrionali umane che sono state coltivate in alimentazione priva di condizioni per 5 minuti. Neutralizzare la tripsina aggiungendo terreni di coltura. </li><li> Spin giù le cellule per centrifugazione a 800 rpm per 5 minuti a 20 ° Celsius. Dopo aver ri-sospendere il pellet di cellule, contare il numero di celle trypan colorazione blu. Sulla base della conta delle cellule ottenute, dividere le cellule in quattro aliquote di 3 milioni di cellule in provette coniche. Agglomerare le cellule di nuovo per centrifugazione. </li><li> Appena prima di iniziare l&#39;etichettatura manganese, sciogliere fresco con una soluzione di cloruro di manganese, sodio cloruro 0,9% per ottenere una soluzione di cloruro di manganese 0,1 mm. </li><li> Al fine di osservare l&#39;attività dei canali del calcio, quattro campioni sono stati preparati. Il primo esempio è il nostro controllo che contiene le cellule incubate nello 0,9% di cloruro di sodio da solo. Il secondo campione contiene cellule incubate in 0,1 mM MnCl 2. Esempio 3 e 4 contengono cellule incubate in mM MnCl 0,1 2 sia con 5 micron di Ca 2 + canali agonista, (s )-(-)- Bay K8644, o 250 mM di Ca 2 + canali antagonista, verapamil. Incubare i quattro campioni a 37 ° C con 5% di CO 2 per 30 minuti. </li><li> Dopo 30 minuti, centrifugare le cellule a 800 rpm per 5 minuti a 20 ° Celsius. Poi aspirare il surnatante e lavare le cellule marcate due volte con PBS. Dopo il lavaggio, risospendere ogni pellet con 200 l di PBS e trasferimento in provette PCR. Questi granuli sono generalmente bianchi. </li></ol> Etichettatura di ferro di cellule staminali embrionali umane <ol><li> Mix clinico-grade solfato di protamina con acqua distillata per ottenere un 1 mg / ml soluzione madre. </li><li> In una provetta contenente staminali embrionali umane terreni di coltura di cellule, aggiungere ferumoxides a 100 mg / ml seguito da aggiunta di 12 mg / ml di solfato di protamina. Miscelare la soluzione vigorosamente per cinque minuti. </li><li> Aggiungi soluzione mista alla quantità uguale di terreni di coltura della cellula di raggiungere una concentrazione finale di 50 mg / ml di ferumoxides e 6 mg / mL di solfato di protamina alle cellule etichetta. Incubare le cellule in questa soluzione per 12 ore. </li><li> Lavare le cellule due volte con PBS, con l&#39;ultimo lavaggio contenenti eparina 10U/ml di sciogliere la extracellulare ferumoxides-protamina solfato complesso. Dopo il lavaggio, trypsinize cellule per ottenere una sospensione singola cellula. </li><li> Contare le celle e aliquota nel numero di campioni. Dopo il lavaggio, risospendere ogni pellet con 200 l di PBS e trasferimento in provette PCR. Questi pellet dovrebbe essere arancione scuro di colore marrone. </li></ol> Esecuzione di Cellular risonanza magnetica <ol><li> Fai un fantasma al fine di stabilizzare i tubi contenenti il ​​pellet cellulare e anche per evitare artefatti da l&#39;aria circostante durante la scansione. Per farlo, mescolare 0,8% di agar e l&#39;1% di solfato di rame in acqua distillata e portare ad ebollizione per microonde per 5-7 minuti. Raffreddare il composto per almeno 1 ora prima della scansione per ottenere un gel. </li><li> I tubi contenenti i pellet cella etichettata vengono inseriti nella fantasma per la scansione. In vitro cellulare risonanza magnetica viene eseguita a 3T MRI Signa HDx (GE Medical Systems) utilizzando bobina clinico del ginocchio. </li><li> Scansione le cellule manganese etichettati per ciascuno dei tre campioni utilizzando una sequenza spin echo: TR, tempo di ripetizione = 800 msec. TE; tempo Echo = minimo, FOV, campo di vista = 12 x 12 cm; matrice = 256x256, NEX 1. </li><li> Scansione le cellule ferro etichettati utilizzando un gradiente-echo. Noi utilizzare i seguenti parametri per questo l&#39;imaging: TR = 100 msec; = 30 ° angolo di vibrazione;; FOV = 12 x 12 cm; matrice = 256 x 256, NEX 1 TE = 10 msec, FA. </li></ol> Analisi dei risultati MRI <ol><li> Analizzare le immagini di risonanza magnetica da 4 diversi campioni di cellule manganese marcato: <ul><li> Esempio # 1 è il nostro controllo che contiene cellule incubate nello 0,9% di cloruro di sodio da solo. </li><li> Esempio # 2 contiene cellule incubate in 0,1 mM MnCl 2. </li><li> Esempio # 3 contiene cellule incubate in mM MnCl 0,1 2 con 5 mM di Ca 2 + canali agonista, (s )-(-)- Bay K8644. </li><li> Esempio # 4 contiene cellule incubate in mM MnCl 0,1 2 con 250 mM di Ca 2 + canali antagonista, verapamil. </li></ul></li><li> Come previsto, le differenze di intensità di segnale da manganese cellule marcate sono visibili. Rispetto alle cellule etichettate esclusivamente con manganese, l&#39;intensità del segnale aumenta chiaramente in presenza di agonisti dei canali del calcio e diminuisce in presenza di antagonista dei canali del calcio. L&#39;area in cui l&#39;intensità del segnale è aumentata per il manganese cellule marcate sono misurati utilizzando immagini J (NIH, Bethesda, MD, USA). Lo stesso software viene utilizzato per analizzare la zona di buio fuori risonanza segnale dal ferro cellule marcate. La dimensione del segnale scuro dal ferro marcato le cellule dipende dal numero di cellule o il numero di particelle di ferro contenuta da parte delle cellule. In questo caso, Un milione di cellule mostra un&#39;area più piccola di segnale scuro rispetto al segnale dai tre milioni di celle. </li></ol>

<ol><li>Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manganese-calcium+interactions+with+contrast+media+for+cardiac+magnetic+resonance+imaging%3A+a+study+of+manganese+chloride+supplemented+with+calcium+gluconate+in+isolated+Guinea+pig+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Radiol%22%5BJournal%5D)">Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts.</a> Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).</li>
<li>Aoki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+labeling+for+magnetic+resonance+imaging+with+the+T1+agent+manganese+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride.</a> NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).</li>
<li>Arbab, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+magnetic+cell+labeling+with+protamine+sulfate+complexed+to+ferumoxides+for+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI.</a> Blood. 104, 1217-1223 (2004).</li>
<li>Arbab, A. S., Frank, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+MRI+and+its+role+in+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular MRI and its role in stem cell therapy.</a> Regen Med. 3, 199-215 (2008).</li>
</ol>

Questi risultati indicano che il manganese si entra attraverso il voltaggio-dipendente dei canali del calcio, manganese e può essere usato come agente di contrasto per risonanza magnetica, che può anche mostrare la vitalità cellulare. Pertanto, si consiglia di manganese-guidata risonanza magnetica può essere utile per monitorare la vitalità cellulare dopo il trapianto di cellule staminali embrionali umane nel miocardio.

<table><tbody><tr><td>Cloruro di manganese tetraidrato</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8054</td><td></td></tr><tr><td>(S)-(-)-Bay K8644 </td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B133</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato di verapamil (+), titolazione minima 99,0% </td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4629</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio 0,85-0,90% p/v</td><td>Reagente</td><td>VWR international</td><td>VW 3257-1</td><td></td></tr><tr><td>Feridex I.V. </td><td>Reagente</td><td>Berlex Laboratories</td><td>NDC 59338-7035-5</td><td>solutio iniettabile di ferumoxidi 11,2 mg di ferro/mL</td></tr><tr><td>Solfato di protamina</td><td>Reagente</td><td>American Pharmaceutical Partners</td><td>NDC 63323-229-05</td><td>50 mg (10 mg/mL)</td></tr><tr><td>Knockout SR (sostituto del siero per cellule ES)</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10828</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 (1:1)</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11330</td><td></td></tr><tr><td>2-mercapto&amp;#8211;etanolo 98+%</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M 3148</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutammina 200 mM 100x</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina 10.000 unità/ml</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione MEM di aminoacidi non essenziali 100x</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11140</td><td></td></tr><tr><td>Signa HDx 3T MRI</td><td>Strumento</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bobina clinica per ginocchio</td><td>Strumento</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190</td><td></td></tr></tbody></table>

etichettatura in vitro di cellule staminali embrionali umane per la risonanza magnetica

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

Cellule staminali embrionali umane (hESC) hanno dimostrato la capacità di ripristinare i feriti miocardio. Risonanza magnetica (MRI) è emerso come una delle modalità di imaging predominante per valutare il restauro dei feriti miocardio. Inoltre, ex-vivo agenti etichettatura, come ad esempio nanoparticelle di ossido di ferro, sono stati impiegati per tracciare e localizzare le cellule staminali trapiantate. Tuttavia, questo metodo non controlla una proprietà fondamentale della biologia cellulare per quanto riguarda la vitalità delle cellule trapiantate. È noto che il cloruro di manganese (MnCl 2) entra nelle cellule attraverso voltaggio-dipendenti del calcio (Ca 2 +) canali quando le cellule sono biologicamente attivi e si accumula nelle cellule per generare T 1 effetto accorciamento. Pertanto, si consiglia di manganese-guidata risonanza magnetica può essere utile per monitorare la vitalità cellulare dopo il trapianto di hESC nel miocardio. In questo video, ci mostrerà come etichetta hESC con MnCl 2 e come queste cellule può essere vista chiaramente utilizzando la risonanza magnetica in vitro. Allo stesso tempo, l&#39;attività biologica di Ca 2 +-canali saranno modulati utilizzando sia Ca 2 + canali agonista e antagonista per valutare le variazioni del segnale concomitanti.

In questo video, ci mostra come etichetta cellule staminali embrionali umane (hESC) con cloruro di manganese (MnCl<sub&gt; 2</sub&gt;), Che possono entrare nelle cellule attraverso i canali voltaggio-dipendenti del calcio quando le cellule sono biologicamente attivi. Inoltre, ci mostrano l&#39;uso di MnCl<sub&gt; 2</sub&gt; Cellulare come agente di contrasto per risonanza magnetica per determinare la fattibilità in vitro di hESC.

Etichettatura in vitro di cellule staminali embrionali umane per la Risonanza Magnetica

Le cellule staminali embrionali umane (hESC) hanno dimostrato la capacità di ripristinare il miocardio danneggiato. La risonanza magnetica (MRI) è emersa come una delle...

La risonanza magnetica o MRI si è affermata come metodica di imaging predominante per localizzare le cellule staminali trapiantate e per comprendere meglio il meccanismo di rigenerazione. Questi studi di risonanza magnetica utilizzano tipicamente nanoparticelle di ossido di ferro come agente di contrasto per l’imaging. Tuttavia, le particelle di ferro possono permanere nel tessuto dopo la morte delle cellule staminali ed essere fagocitate dai macrofagi, creando condizioni subottimali per il tracciamento delle cellule trapiantate vitali.In questo video verrà dimostrato che il cloruro di manganese è un'alternativa efficace. L'etichettatura con agenti di contrasto mediante cloruro di manganese offre diversi vantaggi rispetto all'etichettatura con ossido di ferro. Ad esempio, il manganese produce un segnale positivo, mentre le particelle di ferro generano un segnale negativo.Inoltre, si sa che l'ione manganese entra nelle cellule attraverso canali del calcio sensibili al voltaggio. Pertanto, la sua comparsa nella risonanza magnetica indica la presenza di cellule vitali e biologicamente attive. Salve, sono Uni Mother del laboratorio di Philip Yang della divisione di medicina cardiovascolare presso la Stanford University.Oggi vi mostrerò come etichettare cellule staminali embrionali umane con manganese per l'immagine mediante risonanza magnetica. Questa procedura comprende i seguenti passaggi: etichettare cellule staminali embrionali umane con agenti di contrasto, eseguire l'immagine cellulare mediante risonanza magnetica in vitro e analizzare i risultati della risonanza magnetica. Cominciamo dunque.Il primo passo nella procedura di etichettatura consiste nel preparare cellule staminali embrionali umane, coltivate in condizioni libere da siero fetale. Per fare ciò, trattare le cellule con tripsina per cinque minuti, quindi neutralizzare la tripsina aggiungendo il terreno di coltura. Successivamente, centrifugare le cellule a 800 RRP M per cinque minuti a 20 gradi Celsius.Dopo aver sospeso la popolazione cellulare in PBS, conta il numero di cellule mediante triplice colorazione con blu di tripano; in base al conteggio ottenuto, suddividi le cellule nel numero richiesto di aliquote in provette coniche. In questo caso, sto suddividendo le cellule in quattro aliquote da 3 milioni di cellule ciascuna. Centrifuga nuovamente la popolazione cellulare immediatamente prima di iniziare l'etichettatura con manganese; sciogli cloruro di manganese fresco in cloruro di sodio 0,9% per ottenere una soluzione di cloruro di manganese 0,1 millimolare.Per osservare l'attività dei canali del calcio, abbiamo preparato dei campioni. Il primo campione è il nostro controllo, che contiene cellule incubate nel cloruro di sodio 0,9% soltanto. Il secondo campione contiene cellule incubate nel cloruro di manganese 0,1 millimolare; i campioni tre e quattro contengono cellule incubate nel cloruro di manganese 0,1 millimolare con rispettivamente cinque micromolar del agonista del canale del calcio AK 8 6 44 o 250 micromolar del antagonista del canale del calcio.Il pericolo successivo è incubare i quattro campioni a 37 gradi Celsius con 5%CO2 per 30 minuti. Dopo 30 minuti, centrifugare le cellule a 800 giri/min per cinque minuti a 20 gradi Celsius. Quindi aspirare il sopranatante e lavare le cellule marcate due volte con PBS. Dopo il lavaggio, sospendere ogni pellet con 200 microlitri di PBS e trasferirlo in provette PCR.Queste piastrelle sono solitamente bianche. Bene, abbiamo terminato la preparazione delle cellule marcate con manganese a scopo comparativo. Prepareremo inoltre cellule utilizzando i metodi di marcatura con ferro più tradizionali, per iniziare la marcatura con ferro.Aggiungere solfato di protamina di grado clinico in acqua distillata per ottenere una soluzione madre da un milligrammo per millilitro. Successivamente, nel tubo contenente il mezzo di coltura per cellule staminali embrionali umane, aggiungere l'ossido di film a cento microgrammi per millilitro in combinazione con il solfato di protamina a 12 microgrammi per millilitro. Quindi mescolare la soluzione per cinque minuti.Dopo aver mescolato la soluzione, aggiungerla alle cellule utilizzando un volume uguale di soluzione mista e mezzo di coltura cellulare per ottenere una concentrazione finale di 50 microgrammi per millilitro di ossido e 6 microgrammi per millilitro di solfato di protamina. Incubare le cellule per 12 ore; trascorse 12 ore, lavare le cellule due volte con PBS, l'ultimo lavaggio contenente 10 unità per millilitro di eparina per sciogliere il complesso extracellulare di solfato di proteina e ossido. Dopo il lavaggio, trattare le cellule con tripsina per ottenere una sospensione monocellulare, quindi contare le cellule e suddividerle nel numero richiesto di campioni.In questo caso, sto preparando un campione con 1 milione di cellule e l'altro con 3 milioni di cellule. Successivamente, riguardo alle cellule P, queste pellet dovrebbero essere di colore arancione, marrone. Infine, risospendiamo ciascun pellet con 200 µL di PBS e trasferiamo nei tubi PCL.Bene, abbiamo terminato l'etichettatura delle cellule. Procediamo ora con l'immagine MR cellulare. Per iniziare l'acquisizione, creiamo innanzitutto un fantoccio al fine di stabilizzare le provette contenenti le cellule e anche per evitare artefatti derivanti dall'aria circostante durante la scansione.A tal fine, mescolare 1% di solfato di rame e 0,8% di agar in acqua distillata e portare a ebollizione al microonde per cinque o sette minuti. La miscela viene quindi raffreddata per almeno un'ora fino a formare un gel. Successivamente, i tubi contenenti i pellet di cellule marcate vengono posizionati nel fantoccio per la scansione.La risonanza magnetica cellulare in vitro viene eseguita con uno scanner da 3,0 T utilizzando una bobina clinica per il ginocchio. Utilizziamo lo strumento Signa prodotto da GE Medical Systems per scansionare le cellule marcate con manganese per ciascuno dei quattro campioni, impiegando una sequenza spin-eco. I parametri della sequenza sono stati determinati sulla base della mappatura T precedentemente studiata per le cellule marcate.Utilizziamo un tempo di eco al minimo e un tempo di ripetizione di 800 millisecondi, un campo visivo di 12 per 12 centimetri e una matrice di 256 per 256. Successivamente, si scansionano le cellule marcate con ferro utilizzando una sequenza gradient echo.Utilizziamo i seguenti parametri per questa acquisizione: tempo d'eco di 10 millisecondi, tempo di ripetizione di cento millisecondi, angolo di inversione di 30 gradi, campo visivo di 12 per 12 centimetri, matrice 256 per 256 e successivo.Bene, abbiamo terminato con l'imaging. Ora diamo un'occhiata ai risultati. Ecco i risultati della scansione MRI di quattro campioni diversi di cellule marcate con manganese.Il campione numero uno è il nostro controllo, che contiene cellule incubate in cloruro di sodio allo 0,9% soltanto. Il campione numero due contiene cellule incubate in cloruro di manganese 0,1 millimolare. Il campione numero tre contiene cellule incubate in cloruro di manganese 0,1 millimolare con cinque micro del agonista del canale del calcio vacay 8 6 4 4.Il campione numero quattro contiene cellule incubate in 0,1 milioni di MO di cloruro di manganese con 250 micro molar di l'antagonista del canale del calcio veil. Rispetto alle cellule marcate con manganese da solo, l'intensità del segnale aumenta in presenza dell'agonista del canale del calcio e diminuisce in presenza dell'antagonista del canale del calcio. L'area di aumento del segnale per le cellule marcate con manganese viene misurata utilizzando Image J. Questi risultati indicano che il manganese entra attraverso il canale del calcio sensibile al potenziale.Ora confrontiamo questi risultati con quelli ottenuti dalle cellule marcate con ferro. Osservare la differenza tra il segnale positivo luminoso delle cellule marcate con manganese e il segnale negativo scuro delle cellule marcate con ferro. Abbiamo appena illustrato come eseguire l'etichettatura con manganese di cellule staminali embrionali umane per l'immagine di risonanza magnetica cellulare in vitro.Questa procedura rappresenta un metodo efficace per tracciare le cellule staminali perché: uno, un singolo ione manganese può essere facilmente introdotto nelle cellule mediante un'incubazione semplice della durata di 30 minuti; due, le cellule marcate con manganese forniscono immagini chiare con un segnale positivo; e tre, il manganese entra nelle cellule attraverso il canale del calcio sensibile al voltaggio, come dimostrato dall'uso di agonisti e antagonisti dei canali del calcio, e pertanto entra soltanto nelle cellule vitali. Per questi motivi, riteniamo che l'etichettatura con manganese delle cellule staminali embrionali umane abbia un notevole potenziale per la risonanza magnetica cellulare in vivo, al fine di monitorare l'effetto delle cellule staminali embrionali umane trapiantate in aree danneggiate da ischemia.Ecco fatto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

in-vitro-labeling-human-embryonic-stem-cells-for-magnetic-resonance

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Per la valutazione delle terapie con cellule staminali nuovo, è importante non invasiva traccia le cellule iniettate in vivo. Questo video vi mostrerà come etichetta cellule staminali mesenchimali ed embrionali con il ferro mezzi di contrasto a base di ossidi in vivo per la successiva RM in vivo.

Etichettatura hESC e hMSCs con nanoparticelle di ossido di ferro per i non-invasiva in vivo inseguimento con la RM

Questo video mostra le tecniche per l'etichettatura delle cellule staminali embrionali umane e cellule staminali mesenchimali con coloranti fluorescenti. Questa tecnica può essere utilizzata per un monitoraggio in vivo di cellule staminali trapiantate con imaging ottico e per le correlazioni istopatologiche con microscopia a fluorescenza.

Etichettatura Cellule staminali con le tinture fluorescenti per la rilevazione non invasiva con Optical Imaging

Con il crescente interesse per le terapie con cellule staminali, le tecniche di imaging molecolare sono ideali per il monitoraggio del comportamento delle cellule staminali dopo il trapianto. Geni reporter luciferasi hanno permesso non invasiva, la valutazione ripetitivo della sopravvivenza cellulare, la posizione e la proliferazione in vivo. Questo video dimostra come monitorare la proliferazione hESC in un topo vivo.

In vitro e in Imaging bioluminescenza gene reporter in vivo di cellule staminali embrionali umane

Obiettivo della presentazione è quello di dimostrare un metodo altamente riproducibile per generare matrice associata impianti di cellule staminali a difetti della cartilagine, che può essere visualizzato con la RM. Le cellule staminali sono etichettati con FDA ha approvato Ferumoxides, mescolato con agarosio, impiantati in difetti della cartilagine e ripreso con uno scanner 7T MR.

L&#39;impianto di Ferumoxides etichetta cellule staminali mesenchimali in difetti della cartilagine

Abbiamo descritto una tecnica per l'etichettatura e tracciabilità delle cellule staminali con la FDA ha approvato, superparamagnetiche ossido di ferro (SPIO), ferumoxytol (Feraheme). Questa tecnica di imaging cellulare che utilizza la risonanza magnetica (RM) per la visualizzazione, è facilmente accessibile per monitoraggio a lungo termine e la diagnosi di engraftments staminali successo o insuccesso delle cellule nei pazienti.

Etichettatura cellule staminali con Ferumoxytol, un approvati dalla FDA nanoparticelle di ossido di ferro

Questo articolo descrive una sequenza ottimizzata di eventi per l'imaging multimodale di innesti cellulari nel cervello di roditori utilizzando: (i) in bioluminescenza vivo e la risonanza magnetica, e (ii) post mortem l'analisi istologica. La combinazione di queste modalità di imaging su un singolo animale consente la valutazione del trapianto cellulare ad alta risoluzione, sensibilità e specificità.

Imaging multimodale impianto di cellule staminali nel sistema nervoso centrale di topi

Monitoraggio delle cellule utilizzando la risonanza magnetica ha guadagnato notevole attenzione negli ultimi anni. Questo protocollo descrive l'etichettatura delle cellule dendritiche con fluoro...

Monitoraggio migrazione delle cellule dendritiche usando<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Magnetic Resonance Imaging

Descriviamo un protocollo generale per il monitoraggio in vivo cella utilizzando la risonanza magnetica in un modello di topo con cellule ex vivo etichettati. Un tipico protocollo di marcatura delle cellule, elaborazione acquisizione delle immagini e la quantificazione è inclusa.

In vivo 19 F MRI per il tracciamento cellulare

Descriviamo una serie di metodi per iniettare coloranti, vettori di DNA, virus e cellule per monitorare sia destino cellulare e fenotipo di cellule endogene e innestate derivate da cellule embrionali o pluripotenti entro embrioni di topo al giorno embrionale (E) 9.5 e fasi successive di sviluppo.

Etichettatura cellulare e iniezione nello sviluppo embrionali Cuori mouse

Condrogenesi da cellule staminali richiede la messa a punto delle condizioni di coltura. Qui vi presentiamo un approccio magnetico per condensare le cellule, un passo essenziale per iniziare condrogenesi. Inoltre, mostriamo che la maturazione dinamico in un bioreattore applica stimolazione meccanica ai costrutti cellulari e aumenta la produzione di matrice extracellulare cartilaginea.

3D Stem magnetica cellulare Aggregazione e bioreattore maturazione per la cartilagine Regeneration

Presentato qui è un protocollo per la consegna e il monitoraggio di cellule staminali mesenchymale non invasive (MSC) in un modello murino di lesioni cerebrali traumatiche. Le nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetiche sono impiegate come sonda di risonanza magnetica (MRI) per l'etichettatura MSC e il tracciamento in vivo non invasivo dopo la consegna intranasale mediante risonanza magnetica in tempo reale.

Monitoraggio delle cellule staminali mesenchymale con etichetta chimica dell'ossido di ferro superparamagnetico utilizzando la risonanza magnetica dopo la consegna intranasale in un modello murino traumatico da lesioni cerebrali

Scopri l'etichettatura di cellule staminali embrionali umane con cloruro di manganese per la risonanza magnetica. Questo metodo offre un segnale MRI positivo e traccia solo le cellule vitali attraverso i canali del calcio.

Etichettatura in vitro di cellule staminali embrionali umane per la Risonanza Magnetica

Esplora altri video