Name: Il metodo MODS per la diagnosi di tubercolosi e di tubercolosi multiresistente (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 6 s
Description: Scopri il metodo MODS per la diagnosi rapida ed economica di tubercolosi e tubercolosi multiresistente. Questa tecnica a basso costo rileva Mycobacterium tuberculosis in colture liquide con sicurezza biologica garantita.

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Vorremmo riconoscere Sean Fitzwater e Carmen Giannina Luna Colombo per il segmento video di tubercolosi crescita time-lapse. Ringraziamo Marty Roper per lei un feedback accurato ed eccellente durante il montaggio e co-autore del Manuale d&#39;uso, da cui è tratto l&#39;attuale protocollo per lo più alla lettera. La produzione di questo video è stato finanziato dal NIH / Fogarty International Center <a href="http://www.fic.nih.gov/">http://www.fic.nih.gov/</a> David AJ Moore ha contribuito come Research Fellow Wellcome Trust clinica in Medicina Tropicale e Reader in Malattie Infettive presso l&#39;Imperial College di Londra (Fellowship Premio numero 078067/Z/05). Mark F. Brady ha contribuito come NIH / Research Fellow Fogarty International Center.

<ol><li> Preparare soluzioni di <ol><li> Tampone fosfato magazzino <ol><li> Mescolare 950ml di soluzione di sodio bibasico (9.47g di fosfato di sodio dibasico sciolto in 1000 ml di acqua distillata) con 950ml di soluzione di potassio fosfato monobasico (9.07g di fosfato monobasico di potassio disciolti in 1000 ml di acqua distillata) e mescolare; trattenere 50ml di ciascuna soluzione per regolare pH, se necessario, </li><li> Regolare il pH a 6,8 ± 0,2: aggiungere soluzione di fosfato di sodio bibasico per aumentare il pH, aggiungere la soluzione di potassio fosfato monobasico per abbassare il pH </li><li> Autoclave a 121-124 ° C per 15 minuti per sterilizzare </li><li> Piastra un&#39;aliquota 100μl della soluzione tampone fosfato su agar nutriente in piastre di Petri e incubare a 37 ° C per 48 ore per confermare la sterilità </li><li> Conservare in frigorifero a 2-8 ° C fino a un mese Nota: ogni campione di espettorato richiede 10 ml di tampone fosfato </li></ol></li><li> Decontaminazione magazzino <ol><li> Combina volumi uguali di soluzione di idrossido di sodio (8.0g di idrossido di sodio sciolto in 200 ml di acqua distillata sterile) e citrato di sodio (5,8 g di sodio citrato in 200ml di acqua distillata sterile distillata) </li><li> Mescolare e autoclave a 121-124 ° C per 15 minuti </li><li> Conservare in frigorifero a 2-8 ° C fino a un mese Nota: ogni campione di espettorato richiede 2 ml di brodo di decontaminazione </li></ol></li><li> Cultura dei media magazzino <ol><li> In 900 ml di acqua distillata sterile aggiungere 3.1ml di glicerolo e 1.25g di casitone e di 5.9g di polvere medio 7H9; mescolare con agitazione costante fino a completo scioglimento </li><li> Autoclave a 121-124 ° C per 15 minuti </li><li> Raffreddare e dividere il medium sterile in aliquote a 4,5 ml sterili 16x tubi di 100 mm di vetro per la preparazione dei campioni, e 10.8ml aliquote per la preparazione di soluzioni di antibiotici e controlli interni </li><li> Incubare a 37 ° C per 48 ore per verificare la sterilità (mancanza di torbidità) </li><li> Conservare a 2-8 ° C con tappo ben chiuso per un massimo di un mese Nota: ogni campione di espettorato richiede una provetta contenente 4,5 ml di medium 7H9 </li></ol></li><li> Soluzioni stock antibiotico <ol><li> A. isoniazide magazzino (8 mg / ml) <ol><li> Sciogliere 20 mg di isoniazide completamente in 2,5 ml di acqua distillata sterile </li><li> Filtrare con filtro per siringa 0.2μm solvente acquoso </li><li> Conservare in aliquote 20μl in sterili micro tubi di centrifugazione a -20 ° C fino a 6 mesi Nota: ogni aliquota memorizzata 20μl è sufficiente per un massimo di 100 campioni (tra cui gli sprechi) </li></ol></li><li> B. Rifampicina magazzino (8 mg / ml) </li></ol><ol><li> Sciogliere rifampicina 20mg completamente in 1.25ml DMSO </li><li> Aggiungi 1.25ml acqua sterile distillata e mescolare </li><li> Filtrare con filtro siringa 0.2μm per solventi organici </li><li> Conservare in aliquote 20μl in microprovette sterili a -20 ° C fino a 6 mesi Nota: ogni aliquota memorizzata 20μl è sufficiente per un massimo di 100 campioni (tra cui gli sprechi) </li></ol></li></ol></li><li> Preparare le soluzioni di lavoro <ol><li> Decontaminazione soluzione di lavoro <ol><li> Sciogliere 0,1 g di cristalli NALC in ogni 20ml di soluzione di decontaminazione richiesto Nota: Ogni campione deve 2 ml di soluzione di decontaminazione Nota: Eliminare le NaOH-NALC soluzione di decontaminazione che rimane inutilizzato dopo 24 ore come NALC perde la sua attività mucolitica nel tempo </li></ol></li><li> Soluzione cultura mediatica di lavoro <ol><li> Di cui: <ol><li> 1 tubo di media 7H9 per ogni campione di espettorato per essere trasformata, maggiorato di 1 tubo aggiuntivo per ogni piatto (per la colonna di controllo negativo) </li><li> 2 tubi di medio 7H9 per i controlli positivi (3 se ceppi monoresistant sono utilizzati) </li><li> 1-2 tubi con 7H9 10.8ml per la preparazione di una soluzione antibiotica </li></ol></li><li> Aggiungere 0,5 ml OADC al 4,5 ml di 7H9 in ogni provetta </li><li> Aggiungi OADC 1,2 ml di tubi con 10.8ml 7H9 </li><li> Mettere da parte 2 tubi con 5ml 7H9-OADC per i controlli positivi, e tubo (s) con 12ml 7H9-OADC da utilizzare per la preparazione di una soluzione antibiotica (questi programmi non richiedono PANTA) </li><li> Ricostituire PANTA e aggiungere 0,1 ml per ogni provetta e per i tubi di controllo negativo (7H9-OADC-PANTA: volume = 5.1ml) Nota: media Completo di PANTA (7H9-OADC-PANTA) viene utilizzato per campioni di espettorato e controlli negativi; uso 7H9-OADC senza PANTA per i controlli positivi e per la preparazione di una soluzione antibiotica </li></ol></li><li> Antibiotico soluzioni di lavoro <ol><li> 1. Vedere la Figura 1 per la procedura per rendere la soluzione antibiotica che lavorano in un inutilizzato 24-pozzetti Nota: Per ottenere risultati accurati suscettibilità, le concentrazioni finali antibiotico sono critici. La seguente procedura è adatto per laboratories dotato di micropipette. Se non sono disponibili micropipette, siringhe tubercolina può essere utilizzato con una diversa serie di diluizioni descritto nel Manuale dell&#39;utente Appendice 3 a modsperu.org Nota: non ri-congelare o riutilizzo di lavoro antibiotico o soluzioni stock dell&#39;attività del farmaco può essere perso Eliminare tutte le soluzioni non utilizzate antibiotici alla fine del trattamento in giornata, figura 1.. Rendere le soluzioni antibiotiche di lavoro (da Guida dell&#39;utente al modsperu.org) </li></ol></li></ol></li><li> L&#39;espettorato del campione e la piastra di preparazione <ol><li> Decontaminazione <ol><li> 2ml luogo di campione di espettorato in un tubo da centrifuga 15 ml (se meno, portare a 2 ml con tampone fosfato, se più, utilizzare solo 2 ml) </li><li> Aggiungere 2 ml di NaOH-NALC soluzione </li><li> Tappo e tubo vortex per 20 secondi; invertire tubo per assicurare NaOH-NALC contatti soluzione l&#39;intera superficie interna del tubo e coperchio </li><li> Lasciate riposare per un minimo di 15 minuti - può prolungare di qualche minuto, se il campione è particolarmente viscoso. Per evitare un eccesso di trattamento, non dovrebbe superare i 20 minuti </li><li> Riempire il tubo 14 ml con tampone fosfato (pH 6,8) per neutralizzare alcali e terminare il processo di decontaminazione, e mescolare bene invertendo il tubo di 4 volte </li><li> Centrifugare a 3000 g per 15 minuti (vedi appendice 2 nella Guida al modsperu.org per l&#39;equazione di rotazioni al minuto necessario per raggiungere 3000 g) </li><li> Versare cautamente fuori surnatante in un contenitore di rifiuti liquidi con ipoclorito di sodio al 10% o altro disinfettante appropriato e conservare il pellet </li></ol></li><li> Preparazione della sospensione campione finale e di backup <ol><li> Utilizzando 7H9-OADC-PANTA (dal tubo contenente 5.1ml), risospendere il campione di pellet in un volume totale di 2 ml in provetta con una pipetta Pasteur, mescolare bene </li><li> Togliere 1 ml di sospensione dei campioni e conservare in una provetta a 2-8 ° C come backup </li><li> Aggiungere il 1ml seconda sospensione del campione per il tubo con il restante 7H9-OADC-PANTA, mescolare bene. Questa è la soluzione campione finale pronto per la placcatura </li></ol></li><li> Posizionamento sospensioni campione nel 24-pozzetti <ol><li> 900μl luogo della sospensione campione finale in ciascuno dei 4 pozzetti di una colonna del 24-pozzetti </li><li> Ripetere con campioni supplementari fino a quando tutte le colonne del piatto, ad eccezione di Colonna 3, sono piene (o fino a quando tutti i campioni sono placcati) </li><li> 900μl Luogo di 7H9-OADC mezzo senza il campione in 4 pozzi di colonna 3 di ogni piatto del campione (negativo dei controlli interni) </li></ol></li><li> L&#39;aggiunta di antibiotici ai campioni <ol><li> Utilizzando una pipetta multicanale, con attenzione riempire 4 punte con 100μl dai pozzi con le soluzioni di lavoro 7H9-OADC e antibiotico (colonna 2 nella diluizione antibiotico piastra-vedi Figura 1) </li><li> Aggiungere le aliquote 100μl al 1 pozzi colonna con soluzioni campione 900μl senza toccare piastra o campione </li><li> Ripetere fino a quando tutte le colonne hanno ricevuto il 100μl aggiuntivo di media (drug-free pozzi) o soluzioni antibiotiche (compresa colonna di controllo negativo 3) </li><li> Chiudere la piastra con il coperchio e mettere in un sigillabile politene (Ziplock) sacchetto e guarnizione (borsa non si apre di nuovo da questo punto in poi) </li><li> Incubare a 37 ° C (CO 2 arricchimento non è necessario) </li></ol></li></ol></li><li> Controllo qualità <ol><li> Controlli negativi sono eseguiti su ogni piatto. La presenza di una crescita in uno dei pozzi nella colonna di controllo negativo indica la contaminazione crociata, quindi l&#39;intera piastra deve essere scartata ed i campioni ri-plated. </li><li> I controlli positivi sono eseguiti su un piatto a parte alla fine della giornata. Un pieno di droga sensibili ceppo viene eseguito in una colonna e un ceppo resistente a INH e RIF viene eseguito in un&#39;altra colonna. Se vi è preoccupazione per l&#39;esecuzione un ceppo MDR, sia un ceppo INH monoresistant e un ceppo RIF monoresistant può essere eseguito al posto dei ceppi sensibili e MDR. Tutti i controlli positivi dovrebbero avere una crescita nel drug-free pozzi per dimostrare che la crescita dei supporti. Per dimostrare che le concentrazioni di farmaco siano corrette, il ceppo sensibili non dovrebbero crescere in INH o RIF pozzi, ma il ceppo MDR dovrebbe crescere anche crescere nella INH e RIF pozzi. </li></ol></li><li> Piastra di lettura <ol><li> Con il giorno della placcatura come &quot;giorno 0&quot;, lettura targhe inizia il 5 ° giorno, e se negativo al giorno 5 lettura avviene ogni giorno (o giorni alterni a seconda del carico di lavoro) fino al giorno 14 e poi ogni 2-3 giorni dal giorno 15 -21. Le piastre sono esaminati in unainvertito microscopio ottico con l&#39;obiettivo 10x </li><li> Una cultura positiva è quella in cui ci sono due o più unità formanti colonia (&gt; 2 CFU) in entrambi i farmaci senza pozzi. All&#39;inizio la crescita dei micobatteri sembra piccolo virgole curve o spirali (giorni 5-9). Formazione di colonie di solito progredisce a &quot;corde&quot; o &quot;grovigli&quot; (vedi libreria di immagini su modsperu.org) </li><li> Il giorno una cultura positiva nei 2 drug-free pozzi, il farmaco contenente i pozzi devono essere lette. Qualsiasi crescita in presenza di un farmaco indica che la resistenza al farmaco. Nota: Se la lettura del farmaco contenente pozzi viene fatto&gt; 1 settimana dopo una cultura positiva è notato nel drug-free pozzi, questo non può rappresentare la resistenza di rottura attraverso la crescita è occasionalmente </li><li> I campioni che non sono positivi dopo 21 giorni sono considerati colture negative </li><li> Nuvolosità dei pozzi è il risultato della crescita eccessiva contaminazione, mentre la crescita dei micobatteri non determina nuvolosità </li><li> Al termine di 21 giorni culture può essere scartata. Culture rimanere nel loro sacchetti sigillati e sono disposti in sacchetti autoclave e sterilizzati in autoclave a 121-124 ° C per 45-60 minuti </li></ol></li></ol>

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<li>Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+in+drug+susceptibility+testing+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).</li>
<li>Shiferaw, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+for+detection+of+multidrug-resistant+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).</li>
<li>Tovar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+diagnosis+of+pleural+tuberculosis+using+the+microscopic-+observation+drug-susceptibility+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique.</a> Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).</li>
<li>Vargas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+sputum-scarce+HIV-associated+pulmonary+tuberculosis+in+Lima%2C+Peru%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru.</a> Lancet. 365, 150-150 (2005).</li>
</ol>

Il saggio MODS è rivolto a risorse limitate. Per la prima volta, MODS porta la capacità per una rapida individuazione coltura liquida di tubercolosi e di tubercolosi multiresistente a risorse limitate a poco meno di $ 3 per prova. MODS è un non-proprietarie, iterativo metodologia, e la comunità MODS è sempre interessata a miglioramenti che altri laboratori sono riusciti a fare. Una preoccupazione ricorrente è la biosicurezza di liquido cultura mediatica di tubercolosi, perché i liquidi possono essere versato o aerosol. Crediamo che ...

<table><tbody><tr><td>Frigorifero/congelatore</td><td>Attrezzature</td><td></td><td></td><td>per conservare i preparati di brodo e le scorte di antibiotici già pronti</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Attrezzature</td><td></td><td></td><td>per facilitare la decontaminazione dell'espettorato</td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Attrezzatura</td><td></td><td></td><td>per la concentrazione dell'espettorato; in grado di raggiungere 3000 g; d&amp;#8211;non deve essere refrigerato, ma DEVE essere a prova di biocontaminazione (i contenitori possono essere sigillati)</td></tr><tr><td>Incubatrice (37 gradi C)</td><td>Attrezzatura</td><td></td><td></td><td>per coltura; non richiede un'atmosfera arricchita di CO2</td></tr><tr><td>Microscopio ottico invertito</td><td>Microscopio</td><td></td><td></td><td>leggere le piastre MODS</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Attrezzatura</td><td></td><td></td><td>per sterilizzare i terreni di coltura, il PBS e le piastre usate</td></tr><tr><td>Bilancia</td><td>Attrezzature</td><td></td><td></td><td>pesare isoniazide, rifampicina e NALC</td></tr><tr><td>Brodo Middlebrook 7H9 (Difco)</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0713-17-9</td><td>500 g/bottiglia; base per terreni di coltura</td></tr><tr><td>Casitone (caseina digerita pancreaticamente)</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0259&amp;#8208;17&amp;#8208;9</td><td>500 g/bottiglia; base per terreni di coltura</td></tr><tr><td>Glicerolo (glicerina) liofilizzato</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G&amp;#8208;33&amp;#8208;500</td><td>500 ml/bottiglia; base per terreni di coltura</td></tr><tr><td>PANTA (miscela di antibiotici liofilizzata BD) </td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>B4345114</td><td>6 bottiglie/confezione; supplemento antibiotico per terreni di coltura</td></tr><tr><td>OADC (arricchimento Middlebrook OADC BD)</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11886</td><td>10 x 20 ml/confezione; supplemento per terreni nutrizionali</td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido (Hibri-Max)</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-2650</td><td>100 ml/ bottiglia; per preparare la soluzione madre di rifampicina</td></tr><tr><td>Antibiotici di riserva: isoniazide</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-3377</td><td>50 g/bottiglia; test diretto di suscettibilità</td></tr><tr><td>Antibiotici di riserva: rifampicina</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-3501</td><td>1 g/flacone; test diretto di suscettibilità</td></tr><tr><td>Idrossido di sodio (perle)</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato</td></tr><tr><td>Citratо di sodio (sale di trisodio diidrato)</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-4641</td><td>500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato</td></tr><tr><td>N-acetil-L-cisteina</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-7250</td><td>50 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato</td></tr><tr><td>Cristallo di fosfato monopotassico. KH2PO4</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato</td></tr><tr><td>Fosfato disodico, anidro. Na2HPO4</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato</td></tr><tr><td>Ipoclorito di sodio</td><td>Reagente</td><td>candeggina comune</td><td></td><td>smaltire i rifiuti contaminati</td></tr><tr><td>Tubi da centrifuga da 15 ml (polipropilene 15 ml Falcon 35&amp;#8208;2096)</td><td>Materiale di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>14&amp;#8208;959&amp;#8208;49B</td><td>500ea/caso; per la decontaminazione e concentrazione dell'espettorato</td></tr><tr><td>Piastra a 24 pozzetti (Piastra in tessuto, 24 pozzetti, BD Falcon 35&amp;#8208;3047)</td><td>Materiale di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1</td><td>50 piastre/contenitore; per coltura e lettura</td></tr><tr><td>Sacchetti di polietilene sigillabili 6 X 6 &amp;#8220; (ziplock)</td><td>Materiale di consumo</td><td></td><td></td><td>per la biosicurezza, contenere una piastra a 24 pozzetti</td></tr><tr><td>Tubi di vetro con coperchio (16 x 100 mm e 18 x 145 mm)</td><td>Materiali di consumo</td><td>VWR international</td><td>47729-583</td><td>500 tubi/scatola; per conservare aliquote di brodo preparato</td></tr><tr><td>Tubi microcentrifuga con tappo a vite (1,5 ml)</td><td>Materiale di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>05&amp;#8208;669&amp;#8208;22</td><td>1000 ua/caso; per conservare aliquote di soluzioni stock di antibiotici</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;filtri m (solventi acquosi) filtro per siringa Millex blu</td><td>Materiale di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGL 025 OS</td><td>50 unità/caso; per filtrare le soluzioni antibiotiche</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;filtri m (solventi organici) filtro per siringa Millex giallo</td><td>Materiale di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGV 033 RS</td><td>50 unità/contenitore; per filtrare le soluzioni stock di antibiotici</td></tr><tr><td>Pipette Pasteur monouso in vetro borosilicato 9&amp;#8243;</td><td>Materiale di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>13&amp;#8208;678&amp;#8208;20 °C</td><td>720ea/caso; per mescolare PANTA con il terreno di coltura</td></tr><tr><td>Punte con barriera contro gli aerosol 1000&amp;#8208;1300&amp;mu;l</td><td>Materiali di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>02&amp;#8208;707&amp;#8208;51</td><td>1000ea/pk; per distribuire il mezzo in piastra</td></tr><tr><td>Punte USA Scientific One 1&amp;#8208;200&amp;mu;punte gialle</td><td>Materiale di consumo</td><td>Fisher Scientific</td><td>1111&amp;#8208;0006</td><td>1000 punture/busta; per diluire le soluzioni stock di antibiotici</td></tr></tbody></table>

il metodo mods per la diagnosi di tubercolosi e di tubercolosi multiresistente

The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis

I pazienti con tubercolosi polmonare attiva (TB) infettare altre 10-15 persone l&#39;anno, rendendo la diagnosi di TBC attiva essenziale sia per curare il paziente e prevenire nuove infezioni. Inoltre, la comparsa di tubercolosi multiresistente (MDRTB) significa che il rilevamento della resistenza ai farmaci è necessario per fermare la diffusione di ceppi resistenti ai farmaci. L&#39;osservazione microscopica-droga suscettibilità (MODS) è un test a basso costo, low-tech strumento ad alte prestazioni di rilevamento della tubercolosi e MDRTB. Il saggio MODS si basa su tre principi: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) cresce più velocemente in mezzi liquidi che su terreni solidi 2) la crescita MTB microscopici possono essere rilevati in precedenza in mezzi liquidi che aspettare l&#39;aspetto macroscopico delle colonie su terreni solidi, e che la crescita è caratteristica della MTB, che permette di distinguerlo da micobatteri atipici contaminazioni batteriche o fungine o 3) i farmaci isoniazide e rifampicina può essere incorporato nel saggio MODS per consentire la simultanea rilevazione diretta di MDRTB, ovviando alla necessità di una sottocultura di effettuare indiretta farmaco test di sensibilità. Concorrenti diagnostica attuali sono ostacolati da una bassa sensibilità con striscio dell&#39;espettorato, ritardo prolungato fino diagnosi con una solida cultura dei media, dei costi proibitivi con gli attuali metodi di liquido cultura dei media, e la necessità di fare sottocultura per i test indiretti sensibilità ai farmaci per rilevare MDRTB. Al contrario, il non proprietario metodo MODS ha una sensibilità elevata per la tubercolosi e MDRTB, è un metodo di cultura relativamente rapido, fornisce contemporaneamente test di sensibilità farmaco per MDRTB, ed è accessibile a risorse limitate a poco meno di 3 dollari per i test per la TBC e MDRTB.

L&#39;osservazione microscopica-droga suscettibilità (MODS) è un test a basso costo, low-tech strumento di alte prestazioni di rilevamento della tubercolosi (TB) e la tubercolosi multi-resistente (MDRTB). Questo video descrive il liquido MODS mezzi metodo cultura.

Il metodo MODS per la diagnosi di tubercolosi e di tubercolosi multiresistente

I pazienti con tubercolosi (TB) polmonare attiva infettano dalle 10 alle 15 persone all'anno, rendendo la diagnosi di TB attiva essenziale sia per la cura del paziente che per...

Per ogni tre persone nel mondo, una è infetta da tubercolosi. La diagnosi della tubercolosi attiva previene nuove infezioni perché i pazienti con tubercolosi attiva possono infettare tra 10 e 15 altre persone all'anno, fino al momento in cui vengono trattati o muoiono. MODS è un acronimo che utilizziamo per evitare di dover dire "osservazione microscopica, saggio di suscettibilità ai farmaci", e il motivo per cui è chiamato così diverrà chiaro man mano che verrà spiegata la metodologia.Nel breve video, illustreremo la metodologia MODS per la diagnosi rapida ed economica della tubercolosi e della tubercolosi multiresistente. Il video presenterà la metodologia passo dopo passo. Discuteremo le implicazioni di biosicurezza legate al lavoro con colture liquide e spiegheremo anche alcune importanti questioni relative al controllo di qualità necessarie per l'utilizzo di questa metodologia.Il saggio mods è stato sviluppato alla Kayana University di Lima, in Perù, nel laboratorio di Bob Gilman. In seguito a osservazioni inizialmente effettuate da loose cavi, LOOSE stava cercando di identificare metodi rapidi per rilevare il Mycobacterium tuberculosis in colture, utilizzando indicatori color

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Test di suscettibilità antimicrobica di Mycobacterium tuberculosis è impegnativo, ma fondamentale per la cura del paziente. Questo formato micropiastra offre test di 12 farmaci antimicobatterici e fornisce minima concentrazione inibente (MIC) valori, che sarà di aiuto nel trattamento appropriato.

Test di suscettibilità antimicrobica del complesso Mycobacterium tuberculosis delle droghe prima e seconda linea per diluizione brodo in un formato micropiastra

La MTB / RIF Xpert prova integra la decontaminazione del campione, a mani libere, a bordo di elaborazione del campione e ultra-sensibili emi-nested PCR per il rilevamento simultaneo...

Diagnosticare la tubercolosi polmonare con la MTB / RIF test Xpert

Un microarray amplificazione combina asimmetrica amplificazione PCR e ibridazione microarray in una sola camera, che semplifica significativamente workflow microarray per l'utente finale. La semplificazione del flusso di lavoro microarray è un primo passo necessario per la creazione di sistemi diagnostici basati su microarray, che possono essere utilizzati di routine in ambienti inferiore di risorse.

Dimostrazione di un multi-resistente ai farmaci<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Amplificazione Microarray

Abbiamo sviluppato un sistema di screening ad alto rendimento modulare per scoprire nuovi composti contro Mycobacterium tuberculosis, il targeting intracellulare e in brodo coltura di batteri e citotossicità contro la cellula ospite di mammifero.

Sistema per l&#39;efficacia e la citotossicità Proiezione di inibitori di targeting intracellulare<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

Presentiamo un metodo ottimizzato per l'estrazione del DNA dall'espettorato decontaminato utilizzando un metodo di estrazione basato su matrice combinato con una purificazione a microsfere magnetiche per il sequenziamento mirato a valle di nuova generazione del Mycobacterium tuberculosis.

Estrazione del DNA basata su matrice per il sequenziamento mirato di nuova generazione su campioni di espettorato decontaminato

Qui presentiamo un protocollo per identificare potenziali candidati farmaci antitubercolosi tramite screening fenotipico, comprendendo la sintesi chimica di un composto di 4-aminochinolina, la determinazione della sua concentrazione inibitoria minima contro Mycobacterium tuberculosis e la valutazione della sua citotossicità nelle linee cellulari di mammiferi.

Identificazione dei potenziali candidati anti-TB: una guida passo dopo passo alla sintesi, alla determinazione della CIM e alla valutazione della citotossicità nelle cellule di mammiferi

Zanzare anofele stephensi sono vettori per la malaria che abitano l'India e tutta l'Asia. Questo video mostra la tecnica per l'esecuzione di microiniezioni di questa specie con transgeni che conferiscono resistenza alla malaria alla zanzara. Gran parte della metodologia ha dimostrato in questo video è applicabile alle tecniche di microiniezione di altre specie di zanzare.

Iniezione di An. Gli embrioni stephensi per generare la malaria resistenti zanzare

In questo protocollo dimostriamo l'espressione, solubilizzazione e la purificazione di una proteina di membrana ricombinanti espresse, MexB, come un complesso proteina solubile detergente. MexB è un trasportatore di membrana multifarmaco resistenza da parte degli agenti patogeni opportunistici batterici Pseudomonas aeruginosa.

Espressione, solubilizzazione detergente, e purificazione di un trasportatore di membrana, la proteina multiresistente MexB Resistenza

Tutta la tecnica di coltura degli embrioni del mouse ci permette di cultura e di embrioni di...

Il metodo di coltura degli embrioni roditori intero utilizzando il Rotator tipo di sistema cultura Bottiglia

Forniamo un protocollo conveniente e rapido genotipizzazione molecolare che impiega varietà-specifici primer PCR che bersaglio differenze di sequenza del DNA all'interno della regione cloroplasto trnL-F distanziatore per differenziare varietà...

A PCR-based metodo di genotipizzazione di distinguere tra le varietà selvatiche di tipo ornamentale e di Imperata cylindrica</em

Scopri il metodo MODS per la diagnosi rapida ed economica di tubercolosi e tubercolosi multiresistente. Questa tecnica a basso costo rileva Mycobacterium tuberculosis in colture liquide con sicurezza biologica garantita.

Il metodo MODS per la diagnosi di tubercolosi e di tubercolosi multiresistente

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