Name: Ottenere uova da Xenopus laevis Femmine (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: Impara a ottenere uova da Xenopus laevis per studi di biologia cellulare e sviluppo. Questo protocollo dimostra l'induzione della deposizione, la raccolta e la selezione di uova di alta qualità per esperimenti riproducibili.

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Il protocollo testo completo di questo approccio sperimentale è disponibile in <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">protocolli di corrente in Biologia Cellulare</a> .

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

ottenere uova da xenopus laevis femmine

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Le uova di Xenopus laevis intatto, lisate, e / o frazionato sono utili per una vasta gamma di esperimenti. Questo protocollo mostra come indurre deposizione delle uova, raccogliere e dejelly le uova, e ordinare le uova per rimuovere tutte le uova danneggiate.

Ottenere uova da Xenopus laevis Femmine

Le uova di Xenopus laevis intatte, lisate e/o frazionate sono utili per un'ampia varietà di esperimenti. Questo protocollo mostra come indurre la deposizione delle uova, ...

Gli estratti di uova di Xip Labis sono utili come fonte di materiale citoplasmatico e organellare per la ricostruzione in vitro di eventi cellulari come l'assemblaggio del nucleo e l'importazione di proteine nucleari. Ovviamente, prima di poter utilizzare gli estratti di uova, è necessario ottenere le uova da rane femmine. Ciao, mi chiamo Marie Cross e sono una studentessa laureata nel laboratorio della dottoressa Maureen Power presso il Dipartimento di Biologia Cellulare dell'Università di Emory a Atlanta, in Georgia.Oggi vi mostreremo come ottenere uova di gelatina D da femmine mature di opus lavis. Questa procedura comprende i seguenti passaggi: preparazione delle rane per la deposizione delle uova con siero di gonadotropina gravida, induzione della deposizione delle uova con gonadotropina corionica umana e selezione delle uova difettose o dei citi. Cominciamo dunque.Per produrre uova, le femmine mature di rana vengono prima sottoposte a priming con gonadotropina di siero di puledra gravida. Per iniziare la procedura di priming, preparare un serbatoio contenente cloruro di sodio cento millimolare per ospitare le rane. Dopo l'iniezione, le rane sottoposte a priming devono essere mantenute a una densità di circa una rana per litro.La produzione ottimale di uova viene mantenuta allevando le rane a 18 gradi Celsius. Utilizzando un ago da 27 gauge collegato a una siringa da un mil, iniettare 0,5 mil di siero di giumenta gravida gonadotropina a 200 unità per mil nel sacco linfatico dorsale della rana per via sottocutanea.Reintrodurre le rane in forma ottimale nel serbatoio contenente cloruro di sodio a cento millimolari. Dopo due o tre giorni, indurre la deposizione delle uova iniettando nelle rane 0,5 mil di cento unità per mil di gonadotropina corionica umana, iniettando nuovamente per via sottocutanea nel sacco linfatico dorsale.Dopo l'iniezione, posizionare ogni rana in cinque litri di cloruro di sodio cento millimolare. È preferibile mettere ogni rana in un contenitore separato, poiché la qualità delle uova varia da rana a rana. Circa 16-22 ore dopo l'iniezione di gonadotropina corionica umana, rimuovere la rana da un serbatoio di acqua pulita e versare le uova in un becher.È consigliabile osservare le rane per uno o due giorni alla ricerca di segni di infezione nel sito di iniezione. A questo stadio, un rivestimento gelatinoso trasparente circonda ogni uovo, impedendo loro di toccarsi. Per rimuovere la gelatina dagli uova, sciacquare gli uova una volta con soluzione di cisteina al 2% a pH 8, quindi continuare l'incubazione in cento provette contenenti soluzione di cisteina al 2% per rana per circa cinque minuti. A temperatura ambiente, agitare delicatamente gli uova periodicamente dopo cinque minuti.Versare la soluzione di cisteina dagli ovocisti deje e lavarli tre volte con una soluzione di ringer modificata 0,25 x. Per rimuovere i detriti, versare le uova in una capsula di Petri di vetro da cento millimetri, operando al microscopio stereoscopico. Rimuovere le uova danneggiate dalla capsula di Petri con una pipetta Pasteur.Le uova mature di xip presentano una metà superiore fortemente pigmentata e una metà inferiore chiara. Al centro dell'emisfero fortemente pigmentato dell'uovo maturo dovrebbe essere visibile una piccola macchia bianca, indicativa della maturazione dell'ovocita. Un buon uovo è quello con una pigmentazione uniforme e ben modellata.Tutto ciò che non presenta questa macchia bianca è un oocita e deve essere rimosso. Tutte le uova che sono ingrandite, bianche o non uniformemente pigmentate devono essere eliminate. Un uovo particolarmente difettoso apparirà come una pallina bianca e gonfia con il confine tra gli emisferi completamente oscurato. Lavare e selezionare le uova da due a tre volte versando su di esse il buffer di lisi per le uova, quindi versare con attenzione il buffer, riducendo al minimo il numero di uova che vengono versate accidentalmente.Ora le uova possono essere lisate e possono essere preparati gli estratti. Vi abbiamo appena mostrato come ottenere e rimuovere la gelatina dalle uova di femmine mature di Xenopus laevis. Assicuratevi di vedere i nostri altri due video che vi mostrano come preparare estratti grezzi di uovo e come reconstituire in vitro l'assemblaggio nucleare utilizzando estratti di uovo frazionati.Ecco fatto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Fertilizzazione Ovociti di Xenopus Utilizzando il metodo di trasferimento Host

Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.

Live-cell imaging e analisi quantitativa della embrionali in cellule epiteliali Xenopus laevis</em

Xenopus uovo estratto è un sistema modello utile per studiare il punto di controllo danno al DNA. Questo protocollo è per la preparazione di estratti di uova di Xenopus e danno del DNA reagenti inducenti checkpoint. Queste tecniche sono adattabili ad una varietà di approcci di danneggiamento del DNA nello studio del DNA segnalazione checkpoint danni.

Studio del danno al DNA con Checkpoint<em&gt; Xenopus</em&gt; Uovo Estratti

Produzione di<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Uovo Estratti per identificare RNA associata ai microtubuli

Un metodo è descritto per l'analisi degradazione delle proteine ​​usando radioattivo e proteine ​​luciferasi-fusione in estratto uovo Xenopus e il suo adattamento per lo screening high-throughput per piccoli modulatori molecola di degradazione delle proteine.

Ricostituzione della β-catenina degradazione nel<em&gt; Xenopus</em&gt; Estrai Egg

Descriviamo i metodi di manipolazione degli ovociti immaturi di Xenopus laevis, la maturazione in vitro degli ovociti in ovuli e l'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi. Questo protocollo consente la degradazione di alcune proteine materne e la sovraespressione di geni di interesse alla fecondazione, e quindi è prezioso per studiare il ruolo di fattori specifici nello sviluppo embrionale precoce.

Manipolazione e<em&gt; In Vitro</em&gt; Maturazione di<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; ovociti, seguito da Iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi, per studiare lo sviluppo embrionale

Il controllo della sintesi proteica avviene principalmente nella fase di inizio della traduzione, le cui carenze sono legate a diversi disturbi. Per comprendere meglio la loro eziologia, abbiamo descritto qui un protocollo che utilizza ovociti di Xenopus laevis per valutare la traduzione del trascritto di mos in presenza di un mutante del fattore di inizio della traduzione eIF4G1.

Xenopus laevis come un modello per individuare Traduzione Impairment

I meccanismi di ridimensionamento cellulare e intracellulare rimangono sfuggenti. L'uso di estratti di embrioni di Xenopus è diventato sempre più comune per chiarire i meccanismi di regolazione delle dimensioni degli organelli. Questo metodo descrive la preparazione dell'estratto embrionale e un nuovo saggio di scala nucleare attraverso il quale è possibile identificare i meccanismi di regolazione delle dimensioni nucleari.

Un test cellulare gratuitamente utilizzando<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; Embryo Estrae per studiare i meccanismi del regolamento Size nucleare

Questo protocollo dimostra un metodo basato su fluorescenza per visualizzare la vascolarizzazione e per quantificare la sua complessità in Xenopus tropicalis . I vasi sanguigni possono essere immagazzinati minuti dopo l'iniezione di un colorante fluorescente nel cuore battente di un embrione dopo manipolazioni genetiche e / o farmacologiche per studiare lo sviluppo cardiovascolare in vivo .

Visualizzazione e analisi quantitativa di angiogenesi embrionale in<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Descriviamo un metodo per la preparazione e l'imaging dal vivo di estratti citoplasmatici non diluiti da uova di Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparazione dell'estratto di uova e metodi di imaging dal vivo per la visualizzazione dell'organizzazione citoplasmatica dinamica

Quando le proteine precursori della famiglia Transforming Growth Factor ß sono espresse ectopicamente negli embrioni di Xenopus laevis, si dimerizzano, si scindono e vengono secrete nel blastocoele, che inizia nella blastula tardiva fino allo stadio iniziale di gastrula. Descriviamo un metodo per aspirare i prodotti di scissione dalla cavità del blastocoele per l'analisi immunoblot.

Analisi dei prodotti di scissione della famiglia Transforming Growth Factor ß secreti nel blastocoelo di embrioni di Xenopus laevis

Impara a ottenere uova da Xenopus laevis per studi di biologia cellulare e sviluppo. Questo protocollo dimostra l'induzione della deposizione, la raccolta e la selezione di uova di alta qualità per esperimenti riproducibili.

Ottenere uova da Xenopus laevis Femmine

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