Name: Preparazione e frazionamento di Xenopus laevis Egg Estratti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-27T12:38:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Impara la preparazione di estratti di uova di Xenopus laevis per la ricostituzione di processi cellulari in vitro. Questo metodo consente di ottenere frazioni citoplasmatiche e di membrane leggere per studi biochimici.

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Il protocollo testo completo di questo approccio sperimentale è disponibile in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract ]">protocolli di corrente in Biologia Cellulare</a> .

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

preparazione e frazionamento di xenopus laevis egg estratti

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Greggio e frazionato estratti di uova di Xenopus può essere utilizzato per fornire ingredienti per la ricostituzione di processi cellulari per l&#39;analisi morfologiche e biochimiche. Lisi uovo e centrifugazione differenziale vengono utilizzati per preparare l&#39;estratto grezzo che a sua volta in utilizzato per preparare estratti frazionato e preparati membrana luce.

Preparazione e frazionamento di Xenopus laevis Egg Estratti

Gli estratti grezzi e frazionati di uova di Xenopus possono essere utilizzati per fornire i componenti necessari alla ricostituzione di processi cellulari per scopi morfologici e biochimici...

In un video precedente, abbiamo dimostrato come ottenere e deframmare le uova da femmine mature di XUS labis. Gli estratti grezzi provenienti da queste uova rappresentano una fonte utile di materiale citoplasmatico e organellare per la ricostituzione in vitro di eventi cellulari come l'assemblaggio del nucleo, l'importazione di proteine nucleari e la replicazione del DNA. Ciao, mi chiamo Marie Cross e sono una studentessa laureata nel laboratorio della dottoressa Maureen Power presso il Dipartimento di Biologia Cellulare dell'Università di Emory ad Atlanta, in Georgia.Oggi vi mostreremo come frazionare un estratto di uovo in frazioni citoplasmatica solubile e di membrane leggere. Questa procedura comprende i seguenti passaggi: lisi delle uova, raccolta degli estratti grezzi, frazionamento degli estratti grezzi di uovo, raccolta dell'estratto citoplasmatico e raccolta della frazione di membrane leggere dell'estratto di uovo. Cominciamo dunque.Iniziamo lisando le uova e raccogliendo estratti grezzi prima della lisi delle uova. Una pipetta di trasferimento deve essere realizzata rompendo una pipetta Pasteur e quindi inserendo con attenzione l'estremità rotta in una coppetta per pipett

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Le uova di Xenopus laevis intatto, lisate, e / o frazionato sono utili per una vasta gamma di esperimenti. Questo protocollo mostra come indurre deposizione delle uova, raccogliere e dejelly le uova, e ordinare le uova per rimuovere tutte le uova danneggiate.

Ottenere uova da Xenopus laevis Femmine

Assemblaggio membrana nucleare è un passo essenziale nel ciclo di divisione cellulare, questo processo può essere replicato in provetta, combinando cromatina spermatica Xenopus, citosol, e le frazioni di membrana di luce. Nuclei completi sono formati, tra cui le membrane nucleari con i complessi pori, e questi nuclei ricostituiti sono in grado di normali processi nucleari.

In Assemblea in vitro Nucleari Utilizzando frazionato Estratti Egg Xenopus

Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.

Live-cell imaging e analisi quantitativa della embrionali in cellule epiteliali Xenopus laevis</em

Questo protocollo video illustra un metodo per la generazione di...

Produzione di transgenici Xenopus laevis Integrazione mediata da enzima di restrizione e trapianto nucleare

Xenopus uovo estratto è un sistema modello utile per studiare il punto di controllo danno al DNA. Questo protocollo è per la preparazione di estratti di uova di Xenopus e danno del DNA reagenti inducenti checkpoint. Queste tecniche sono adattabili ad una varietà di approcci di danneggiamento del DNA nello studio del DNA segnalazione checkpoint danni.

Studio del danno al DNA con Checkpoint<em&gt; Xenopus</em&gt; Uovo Estratti

Produzione di<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Uovo Estratti per identificare RNA associata ai microtubuli

Un metodo è descritto per l'analisi degradazione delle proteine ​​usando radioattivo e proteine ​​luciferasi-fusione in estratto uovo Xenopus e il suo adattamento per lo screening high-throughput per piccoli modulatori molecola di degradazione delle proteine.

Ricostituzione della β-catenina degradazione nel<em&gt; Xenopus</em&gt; Estrai Egg

I meccanismi molecolari della decondensazione della cromatina mitotica altamente compattata sono mal definiti. Presentiamo un test cell-free basato su cluster di cromatina mitotica isolati da cellule HeLa ed estratto di uova di Xenopus laevis che ricostituisce fedelmente il processo di decondensazione in vitro.

Un Free Cell Assay per studiare cromatina decondensazione alla fine del mitosi

I meccanismi di ridimensionamento cellulare e intracellulare rimangono sfuggenti. L'uso di estratti di embrioni di Xenopus è diventato sempre più comune per chiarire i meccanismi di regolazione delle dimensioni degli organelli. Questo metodo descrive la preparazione dell'estratto embrionale e un nuovo saggio di scala nucleare attraverso il quale è possibile identificare i meccanismi di regolazione delle dimensioni nucleari.

Un test cellulare gratuitamente utilizzando<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; Embryo Estrae per studiare i meccanismi del regolamento Size nucleare

Presentiamo un metodo per la generazione di in vitro autosostenuto mitotica oscillazioni a livello di singola cellula incapsulando gli estratti di uovo di Xenopus laevis in microemulsioni di acqua in olio.

La ricostituzione delle oscillazioni del ciclo cellulare in microemulsioni di uovo senza cellula Xenopus estrae

Descriviamo un metodo per la preparazione e l'imaging dal vivo di estratti citoplasmatici non diluiti da uova di Xenopus laevis .

Xenopus laevis Preparazione dell'estratto di uova e metodi di imaging dal vivo per la visualizzazione dell'organizzazione citoplasmatica dinamica

Impara la preparazione di estratti di uova di Xenopus laevis per la ricostituzione di processi cellulari in vitro. Questo metodo consente di ottenere frazioni citoplasmatiche e di membrane leggere per studi biochimici.

Preparazione e frazionamento di Xenopus laevis Egg Estratti

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