Name: Sigma non specifiche attività di analisi della proteasi - caseina come substrato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-17T09:14:00.000+00:00
Duration: 11 min 37 s
Description: Impara a misurare l'attività delle proteasi usando il saggio universale con caseina come substrato. Questo metodo colorimetrico quantifica il rilascio di tirosina per garantire il controllo qualità in laboratorio.

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Prima di iniziare il test, dobbiamo fare in modo che i seguenti reagenti sono correttamente preparati: <ol><li> A 50 mM tampone fosfato di potassio, pH 7,5. Preparare con 11,4 mg / ml di fosfato di potassio bibasico, triidrato in acqua purificata e la regolazione del pH con HCl 1M. Questa soluzione è posizionato a 37 ° C prima dell&#39;uso. </li><li> Un 0,65% peso / volume soluzione di caseina, preparato miscelando 6,5 mg / ml di caseina nel buffer 50 mM fosfato di potassio. Gradualmente aumentato la temperatura della soluzione con delicata agitazione a 80-85 ° C per circa 10 minuti fino a una dispersione omogenea è raggiunto. E &#39;molto importante non far bollire la soluzione. Il pH è quindi regolata, se necessario, con NaOH e HCl. </li><li> A 110 mM soluzione di acido tricloroacetico, preparata diluendo un magazzino 1:55 6.1N con acqua purificata. L&#39;acido tricloroacetico è un acido forte e deve essere maneggiato con cura. </li><li> 0.5 mM Folin &amp; Ciolcaltea, o reagente fenolo Folin, che è la soluzione che reagisce con tirosina per generare un cambiamento misurabile colore che saranno direttamente collegati con l&#39;attività delle proteasi. Reagente Folin fenolo è un acido e deve essere maneggiato con cura. </li><li> A mm 500 carbonato di sodio soluzione, preparata con 53 mg / ml di carbonato di sodio anyhydrous in acqua purificata. Una soluzione diluente enzima, che è composto da 10 mM tampone di acetato di sodio con calcio acetato 5mm, pH 7,5, a 37 ° C. Questa soluzione è quello che usiamo per sciogliere i campioni della proteasi solidi o soluzioni diluite enzima. </li><li> 1,1 mm L-tirosina soluzione madre standard. Preparati con 0,2 mg / ml L-tirosina in acqua depurata e riscaldata dolcemente fino alla tirosina si dissolve. Come con la caseina, non bollire questa soluzione. Lasciare che la L-tirosina standard per raffreddare a temperatura ambiente. Questa soluzione sarà diluita ulteriormente per rendere la nostra curva standard. </li><li> Proteasi soluzione. Immediatamente prima dell&#39;uso, sciogliere proteasi in soluzione diluente enzimatica preparata al punto 6. </li></ol> Se necessario, utilizzare un campione solido proteasi di attività predeterminate, che viene disciolto utilizzando un diluente enzima di 0,1-0,2 unità / ml. Questa soluzione serve come controllo positivo per il test di controllo qualità e la convalida per i calcoli che si esibiranno per determinare l&#39;attività enzimatica. Impostazione del saggio della proteasi e Curve standard <ol><li> Per iniziare questo saggio, trovano fiale adatto che conterrà circa 15 ml. Per ogni enzima che sarà testato, 4 flaconcini sono necessari. Un flaconcino sarà usato come un vuoto, e tre altri saranno utilizzati per attività di analisi di tre diluizioni della proteasi. Tre diluizioni sono utili per la verifica dei calcoli finale contro l&#39;altro. <ol><li> Per ogni serie di quattro fiale, aggiungere 5mls della nostra soluzione di caseina 0,65%. Lasciate che equilibrano in un bagno d&#39;acqua a 37 ° C per circa 5 minuti. </li><li> Aggiungi variando volumi di soluzione enzimatica che sarà testato per tre fiale campione del test, ma non il vuoto. Mescolare agitando e incubare per 37 ° C per dieci minuti esatti. L&#39;attività della proteasi e liberazione consequenziali di tirosina durante questo periodo di incubazione è quello che sarà misurato e confrontato tra i campioni di prova. </li></ol></li><li> Dopo questa incubazione di 10 minuti, aggiungere i 5 ml di reagente TCA a ciascuna provetta per arrestare la reazione. Quindi, aggiungere un volume adeguato di soluzione enzimatica a ciascuna provetta, anche il vuoto, in modo che il volume finale della soluzione enzimatica in ogni tubo è di 1 ml. Questo viene fatto per conto del valore di assorbanza dello stesso enzima e per garantire che il volume finale di ogni tubo è uguale. Incubare le soluzioni a 37 ° C per 30 minuti. Durante questa incubazione di 30 minuti, si consiglia di impostare il diluizioni tirosina standard. Usa 6 flaconi dram (fiale DRAM possono essere sostituiti con tubi in polipropilene) che può facilmente contenere 8 ml. Per i sei fiale, aggiungere il 1,1 mm soluzioni tirosina magazzino di serie con i seguenti volumi in ml: 0,05, 0,10, 0,20, 0,40, 0,50. Non aggiungere alcun tipo di tirosina al vuoto. Abbassare gli standard possono essere necessari per campioni impuri che darà piccolo cambiamento di colore. Una volta che la soluzione di tirosina standard è stato aggiunto, aggiungere un volume adeguato di acqua depurata a ciascuno degli standard per portare il volume a 2 ml. </li><li> Dopo l&#39;incubazione di 30 minuti, filtrare ciascuna delle soluzioni di test e il vuoto usando una siringa da 0,45 um polietersulfone filtro. La filtrazione è necessario per rimuovere eventuale insoluto dai campioni. <ol><li> Aggiungere la filtrazione 2 mls dei campioni di prova e nel bianco filtrato a 4 flaconcini DRAM che può contenere almeno 8 ml. Lo stesso tipo di fiala in cui sono stati preparati gli standard può essere utilizzato. </li><li> Per tutti i flaconi contenenti gli standard e vuoto standard, aggiungere 5mls di carbonato di sodio. Per ottenere i migliori risultati, aggiungere 1 ml di reattivo di Folin immediatamente dopo. </li><li> Aggiungi carbonato di sodio per regolare ogni goccia di pH creato con l&#39;aggiunta di reagente di Folin ha. </li><li> Aggiungi carbonato di sodio per i campioni di prova e test vuoto. Queste soluzioni diventa opaco dopo l&#39;aggiunta di carbonato di sodio. Aggiungere il reagente di Folin, che reagiscono soprattutto con tirosina libero. </li><li> Mescolare le fiale dram agitando e incubare a 37 ° C per 30 minuti. </li></ol> Dopo questa incubazione, si dovrebbe notare che le norme hanno una gradazione di colore correlazione con la quantità di tirosina aggiunta: la più alta concentrazione di tirosina che appaiono più scure. Si può notare anche modificare sensibilmente il colore nei nostri campioni di prova. 2mls di queste soluzioni sono filtrate con un 0,45 polietersulfone siringa filtro in cuvette adatto. Ora che il test viene eseguito, si può procedere allo spettrofotometro per registrare i nostri valori di assorbanza. </li></ol> Misurare l&#39;assorbanza e calcolo attività enzimatica <ol><li> L&#39;assorbanza dei campioni si misura con uno spettrofotometro utilizzando una lunghezza d&#39;onda di 660 nm. Il percorso della luce è impostato su 1 cm. Registrare i valori di estinzione di tali norme, vuoto standard, i campioni di prova diversi, e prova in bianco. Una volta che tutti i dati sono stati raccolti, la curva standard può essere creato. Al fine di generare la curva, la differenza di assorbanza tra il bianco standard e standard devono essere calcolati. Questo è il valore di assorbanza attribuibile alla quantità di tirosina nelle soluzioni standard. Dopo questo semplice calcolo, creare la curva standard utilizzando un programma grafico per tracciare la variazione di assorbanza dei nostri standard sull&#39;asse Y, contro l&#39;importo in micromoli per ciascuno dei nostri 5 standard sull&#39;asse X. <table style="width: 416px; height: 118px;" border="0"><tbody><tr><th style="text-align:center"> Volume standard di tirosina </th><th style="text-align:center"> uMoles Tirosina </th></tr><tr><td style="text-align:center"> 0,05 </td><td style="text-align:center"> 0,055 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0,10 </td><td style="text-align:center"> 0,111 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0,20 </td><td style="text-align:center"> 0,221 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0,40 </td><td style="text-align:center"> 0,442 </td></tr><tr><td style="text-align:center"> 0,50 </td><td style="text-align:center"> 0,553 </td></tr></tbody></table></li><li> Dopo i punti dati sono stati inseriti, generare una retta di regressione e l&#39;equazione pendenza corrispondente. Trovare la variazione di assorbanza nei campioni analizzati calcolando la differenza tra l&#39;assorbanza campione da analizzare e l&#39;assorbanza del bianco prova. Inserimento del valore di assorbanza per uno dei campioni di prova nell&#39;equazione pendenza e risolvere comporterà la micromoli di tirosina liberato durante questa reazione proteolitica particolare. Per ottenere l&#39;attività dell&#39;enzima in unità per / ml, eseguire il seguente calcolo: (Equivalenti tirosina umole rilasciato) x (11) Unità / ml = enzima __________________________________________ (1) x (10) x (2) 11 = il volume totale (in millilitri) di test 10 = Tempo di test (in minuti) secondo la definizione di unità 1 = Volume di enzimi (in millilitri) di enzima usato 2 = volume (in millilitri) utilizzati nella determinazione colorimetrica Prenda il numero di equivalenti micromoli tirosina rilasciato ottenuto dall&#39;equazione pendenza e moltiplicarlo per il volume totale del test in MLS, che nel nostro caso è 11mls. Dividere questo valore per tre quantità di altri: il tempo del test, che abbiamo corso per 10 minuti, il volume di enzima utilizzato nel test, che è stato variato (usiamo 1ml), il volume di millilitri utilizzati nel rilevamento colorimetrico, che può differiscono in base alla cuvetta. Abbiamo usato 2 ml. </li><li> Micromoli di tirosina divise da tempo nella misurazione minuto i rendimenti di attività della proteasi chiamata &quot;unità&quot;. Siamo in grado di annullare le unità di misura del volume nel numeratore e denominatore, lasciando un measurment di attività enzimatica in termini di unità / ml. Al fine di determinare l&#39;attività in un campione della proteasi solida diluito in diluente enzima, dividiamo la nostra attività in unità / ml per la concentrazione di solidi utilizzati in questo saggio originariamente in mg / ml., Lasciandoci con l&#39;attività in termini di unità / mg . Unità / ml di enzima Unità / mg solido = _____________________ mg solidi / ml di enzima </li></ol>

<ol><li>Anson, M. L. J. Gen. Physiol. 22, 79-89 (1938).</li>
<li>Folin, O., Ciocalteau, V. J. Biol. Chem. 73, 627- (1929).</li>
</ol>

Abbiamo appena mostrato come analizzare l&#39;attività della proteasi con Sigma universale saggio di attività della proteasi. Inoltre, questo test è utile per garantire che i nostri proteasi hanno determinato con precisione l&#39;attività prima di ricevere per i vostri esperimenti. Come avete visto, durante questa procedura, è di fondamentale importanza per ricordare al calore, sia la caseina e le soluzioni tirosina lentamente e non a bollire loro. Inoltre, è fondamentale per preparare diversi spazi sia per i vostri standard e per ogni campione che si ha.

<table><tbody><tr><td>Proteasi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4630</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio, bibasico, triidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5504</td><td></td></tr><tr><td>Caseina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7078</td><td></td></tr><tr><td>Acido tricloroacetico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0699</td><td></td></tr><tr><td>Reagente fenolico di Folin &amp;amp; Ciocalteu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9252</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato di sodio, anidro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2127</td><td></td></tr><tr><td>Acetato di sodio, triidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8625</td><td></td></tr><tr><td>Acetato di calcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1000</td><td></td></tr><tr><td>L-Tirosina, base libera</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3754</td><td></td></tr><tr><td>Protease Profiler Kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PP0500</td><td></td></tr><tr><td>Protease Fluorescent Detection Kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PF0100</td><td></td></tr></tbody></table>

sigma non specifiche attività di analisi della proteasi - caseina come substrato

Sigma's Non-specific Protease Activity Assay - Casein as a Substrate

Proteasi rompere i legami peptidici. Nel laboratorio, è spesso necessario misurare e / o confrontare l&#39;attività della proteasi. Sigma non-specifico saggio di attività della proteasi può essere utilizzato come una procedura standardizzata per determinare l&#39;attività della proteasi, che è quello che facciamo durante le procedure di qualità del nostro controllo. In questo saggio, la caseina agisce come substrato. Quando la proteasi stiamo testando digerisce caseina, la tirosina viene liberato insieme ad altri aminoacidi e frammenti peptidici. Reagente Folin e Ciocalteus fenolo, o Folin reagisce principalmente con tirosina liberi di produrre un cromoforo di colore blu, che è quantificabile e misurato come valore in assorbanza allo spettrofotometro. La tirosina più che viene rilasciato dalla caseina, più i cromofori sono generati e più forte è l&#39;attività della proteasi. Valori di assorbanza generata dalla attività della proteasi vengono confrontati con una curva standard, che viene generato dalla reazione quantità note di tirosina con il reagente FC di correlare i cambiamenti di assorbanza con la quantità di tirosina in micromoli. Dalla curva standard dell&#39;attività di campioni della proteasi possono essere determinati in termini di unità, che è la quantità in micromoli di equivalenti tirosina rilasciato da caseina al minuto. Per visualizzare questo articolo in cinese, <a href="http://jove.com/index/details.stp?ID=910">clicca qui</a>

Proteasi rompere i legami peptidici. Nel laboratorio, è spesso necessario misurare e / o confrontare l&#39;attività della proteasi. Sigma non-specifico saggio di attività della proteasi può essere utilizzato come una procedura standardizzata per determinare l&#39;attività della proteasi.

Sigma non specifiche attività di analisi della proteasi - caseina come substrato

Le proteasi scindono i legami peptidici. In laboratorio, è spesso necessario misurare e/o confrontare l'attività delle proteasi. La proteasi aspecifica di Sigma...

Le proteasi scindono i legami peptidici in laboratorio. È spesso necessario misurare e/o confrontare l'attività delle proteasi Sigma. Il saggio universale di attività delle proteasi può essere utilizzato come procedura standardizzata per determinare l'attività delle proteasi, come facciamo durante le nostre procedure di controllo qualità.In questo saggio, la casiana agisce come substrato quando la proteasi che stiamo testando digerisce la casiana. L'amminoacido tirosina viene liberato insieme ad altri amminoacidi e frammenti peptidici. La tirosina libera reagisce quindi con il reagente fenolo-folino o reagente di Folin-Ciocalteu per produrre un cromoforo di colore blu, quantificabile e misurato come valore di assorbanza sullo spettrofotometro.Più tirosina viene rilasciata dalla casiana, più vengono generati i cromofori e maggiore è l'attività della proteasi. I valori di assorbanza generati dall'attività della proteasi vengono confrontati con una curva standard ottenuta facendo reagire quantità note di tirosina con il reagente FC, al fine di correlare le variazioni di assorbanza. A partire dalla quantità di tirosina in micromoli ricavata dalla curva standard, l'attività dei campioni di proteasi può essere determinata in unità, definite come la quantità in micromoli di tirosina equivalente rilasciata dalla caina al minuto. Salve, mi chiamo Carrie Cup Vineyard e sono una scienziata presso la nostra struttura Sigma Aldridge DeKalb qui a St. Louis, Missouri.Oggi, vi mostrerò un metodo universalmente applicabile per testare l'attività della proteasi presso Sigma Aldridge. Utilizziamo principalmente questo saggio nel nostro settore di controllo qualità per assicurarci che la nostra proteasi abbia un'attività sufficiente prima di spedirla direttamente al vostro laboratorio. Prima di iniziare il saggio, dobbiamo verificare che i seguenti reagenti siano stati preparati correttamente.Un tampone di fosfato di potassio 50 millimolare, pH 7,5. La soluzione viene posta a 37 gradi Celsius prima dell'uso. Una soluzione di kasian allo 0,65% peso su volume viene preparata mescolando 6,5 milligrammi per millilitro in un litro. La temperatura della soluzione viene aumentata gradualmente, con leggera agitazione, a 80-85 gradi Celsius per circa 10 minuti, fino al raggiungimento di una dispersione omogenea.È molto importante non far bollire la soluzione. Successivamente, se necessario, il pH viene regolato con idrossido di sodio e acido cloridrico. Una soluzione di acido tricloroacetico 110 millimolare, preparata diluendo un reagente concentrato 6,1 normali in rapporto di uno a 55 con acqua purificata 0,5 millimolare, contiene sali di ferro o reagente fenolico di Folin, ovvero la soluzione che reagirà con la tirosina per generare un cambiamento di colore misurabile.Questo sarà direttamente correlato all'attività delle proteasi. Una soluzione di carbonato di sodio 500 millimolare preparata utilizzando 53 milligrammi per millilitro di carbonato di sodio anidro in acqua purificata, e una soluzione diluente per enzimi, costituita da un tampone di acetato di sodio 10 millimolare con 5 millimolare di calcio a pH 7,5 a 37 gradi Celsius. Questa soluzione è quella che utilizziamo per sciogliere campioni solidi di proteasi o per diluire soluzioni enzimatiche.La soluzione madre standard di L-tirosina, che deve avere una concentrazione iniziale di 1,1 millimolare, ovvero una soluzione di 0,2 milligrammi per millilitro di L-tirosina, viene preparata in acqua purificata e riscaldata delicatamente fino a completa dissoluzione della tirosina. Come per la casian, non far bollire questa soluzione. Lasciare raffreddare lo standard di L-tirosina a temperatura ambiente.Questa soluzione verrà ulteriormente diluita per ottenere la curva standard, se necessario, utilizzando un campione solido di proteasi con attività predeterminata, che viene disciolto nel diluente enzimatico a una concentrazione di 0,1-0,2 unità per millilitro. Questa soluzione funge da controllo positivo per il saggio di controllo qualità e da validazione per i calcoli che eseguiremo al fine di determinare l'attività enzimatica. Ora che abbiamo preparato i nostri reagenti e tutti sono alla temperatura corretta, inizieremo il nostro saggio della proteasi.Per iniziare questo saggio, procurarsi delle provette adatte che contengano circa 15 millilitri. Per ciascun enzima che si intende testare, saranno necessarie quattro provette. Una provetta verrà utilizzata come bianco, e altre tre verranno impiegate per saggare l'attività di tre campioni.La diluizione della proteasi in tre diluizioni è utile quando si verificano i calcoli finali confrontandoli tra loro, assegnando a ciascun set di quattro vialli cinque millilitri della nostra soluzione allo 0,65% di kasian e lasciandoli equilibrare in un bagno termico a 37 gradi Celsius per circa cinque minuti. Successivamente, aggiungere concentrazioni variabili della nostra soluzione enzimatica a tre dei vialli del campione in prova, ma non al bianco. Mescolare per agitazione rotatoria e incubare a 37 gradi Celsius per esattamente 10 minuti.L'attività della proteasi e il conseguente rilascio di tirosina durante questo periodo di incubazione saranno ciò che verrà misurato e confrontato tra i nostri campioni in esame. Dopo un'incubazione di 10 minuti, aggiungere cinque millilitri del reagente TCA in ogni provetta. Successivamente, un volume appropriato di soluzione enzimatica viene aggiunto a ciascuna provetta, incluso il bianco, in modo che il volume finale di soluzione enzimatica in ogni provetta sia di un millilitro.Questo viene fatto per tenere conto del valore di assorbanza dell'enzima stesso. Incubare ora le soluzioni a 30 gradi Celsius per 30 minuti. Durante questa incubazione di 30 minuti, si consiglia di preparare le diluizioni del campione standard di tirosina, che vengono effettuate utilizzando sei vial DR.Questo può contenere facilmente otto millilitri distribuiti nei sei vial. Alla soluzione standard di tirosina 1,1 millimolare vengono aggiunti i seguenti volumi in millilitri: 0,05, 0,1, 0,2, 0,4 e 0,5. Non aggiungere alcuno standard di tirosina al bianco.Potrebbero essere necessari standard più bassi per i campioni di prova dell'IPU che produrranno una lieve variazione di colore. Una volta aggiunta la soluzione standard di tirosina, aggiungere un volume appropriato di acqua purificata a ciascuno degli standard per portare il volume a due millilitri. Dopo l'incubazione, filtrare ciascuna delle soluzioni di prova e il bianco.Utilizzando un filtro per siringa da 0,45 micron, due millilitri dei campioni di prova e del filtrato bianco vengono aggiunti a quattro provette DR che possono contenere almeno otto millilitri. È possibile utilizzare lo stesso tipo di provetta in cui sono stati preparati gli standard; in tutte le provette contenenti gli standard e il bianco dello standard, si aggiungono cinque millilitri di carbonato di sodio e, per ottenere i migliori risultati, il reagente caduto viene aggiunto immediatamente dopo; quindi si aggiunge il carbonato di sodio ai campioni di prova e al bianco di prova. Si noterà che queste soluzioni diventano torbide dopo l'aggiunta del carbonato di sodio.Quindi si aggiunge il reagente caduto, che reagirà con la tirosina libera. I vial DRAM vengono quindi mescolati con movimenti rotatori e incubati a 37 gradi Celsius per 30 minuti; dopo questa incubazione, si dovrebbe osservare una gradazione di colore negli standard, correlata alla quantità di tirosina aggiunta, con le concentrazioni più elevate di tirosina che appaiono di colore più scuro.È inoltre possibile osservare un evidente cambiamento di colore nei nostri campioni di prova. Due millilitri di queste soluzioni vengono filtrati utilizzando un filtro a siringa da 0,45 micron e delle cuvette adatte. Ora che abbiamo terminato il nostro saggio, procediamo con lo spettrofotometro e registriamo i valori di assorbanza.L'assorbanza dei nostri campioni viene misurata mediante spettrofotometro utilizzando una lunghezza d'onda di 660 nanometri. Il cammino ottico è impostato a un centimetro; registrare i valori di assorbanza per lo standard bianco, i diversi campioni in prova e il bianco di prova. Una volta raccolti tutti i dati, siamo pronti a creare la nostra curva di calibrazione.Per generare la curva, è necessario calcolare la differenza di assorbanza tra lo standard e lo standard bianco. Questo valore di assorbanza corrisponde alla quantità di tirosina presente nelle soluzioni standard. Dopo un semplice calcolo, creiamo la curva standard riportando la variazione di assorbanza dei nostri standard sull'asse Y rispetto alla quantità in micromoli per ciascuno dei nostri cinque standard sull'asse X.Dopo aver inserito i nostri punti dati e generato una retta di regressione, determiniamo la variazione di assorbanza nei nostri campioni in esame calcolando la differenza tra l'assorbanza del campione in esame e quella del bianco di prova. Analizzando la nostra curva standard, identifichiamo sul lato Y il valore di assorbanza di uno dei nostri campioni in esame. Procedendo ora parallelamente all'asse X, tracciamo una linea fermandoci nel punto in cui intersechiamo la curva standard.Quindi, a partire dalla coordinata X rilevata in questo punto, otteniamo la quantità in micro moli di tirosina liberata durante questa particolare reazione proteolitica. Per calcolare l'attività dell'enzima in unità per millilitro, effettuare il seguente calcolo: prendere il numero di micro moli di equivalenti di tirosina rilasciati, ottenuto dalla curva standard, e moltiplicarlo per il volume totale del saggio in millilitri, che nel nostro caso è di 11 millilitri. Successivamente, dividere questo valore per altre tre quantità.Il tempo del saggio, che abbiamo eseguito per 10 minuti, il volume di enzima utilizzato nel saggio, che è stato variato. Utilizziamo un millilitro. Il volume di millilitri impiegato nel rilevamento clorimetrico, che può variare in base al vostro Q vet.Utilizziamo due millilitri. I micromoli di tirosina divisi per il tempo in minuti ci forniscono la nostra misura dell'attività della proteasi, che chiamiamo unità. Possiamo eliminare le unità di misura del volume al numeratore e al denominatore, ottenendo così una misura dell'attività enzimatica espressa in unità per millilitro.Per determinare l'attività in un campione solido di proteasi diluito nel diluente enzimatico, dividiamo la nostra attività espressa in unità per millilitro per la concentrazione del solido utilizzato inizialmente nel saggio, espressa in milligrammi per millilitro, ottenendo così l'attività in unità per milligrammo. Abbiamo appena illustrato come analizzare l'attività della proteasi utilizzando il saggio universale dell'attività della proteasi di Sigma. Come avete potuto osservare eseguendo questa procedura, è fondamentale ricordare di riscaldare lentamente sia la soluzione di caseina che quella di tirosina, senza portarle a ebollizione.Inoltre, è fondamentale preparare diversi bianchi sia per gli standard sia per ciascun campione in esame. È tutto. Grazie per averci seguito e buona fortuna con le vostre attività proteasiche.

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