Name: Raccolta di sangue dal Granchio Ferro di Cavallo Americano, Limulus Polifemo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-10-13T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Impara la raccolta del sangue da Limulus polyphemus per la ricerca biomedica. Questo metodo consente di ottenere emolinfa per saggi LAL e studi sul sistema immunitario invertebrato.

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Ricerca originale di cui sopra è stato sostenuto dalla NSF concedere 0344630.

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Ci sono quattro specie di granchio a ferro di cavallo, Polifemo Limulus dalla costa orientale del Nord America e tre le specie che spaziano dal Giappone al Golfo del Bengala. L&#39;animale è identificato come un &quot;fossile vivente&quot;, perché le forme anatomicamente simili sono stati trovati come fossili da 445 milioni di anni fa 27. Il granchio a ferro di cavallo rappresenta un longevo animale, che richiede 10 - 13 anni per raggiungere la maturità e la vita almeno 20 anni 28. Anche se è stato sottoposto ...

raccolta di sangue dal granchio ferro di cavallo americano, limulus polifemo

Blood Collection from the American Horseshoe Crab, Limulus Polyphemus

Il granchio a ferro di cavallo è il miglior sistema caratterizzato immune di lunga durata invertebrati. Lo studio di immunità in granchi a ferro di cavallo è stata agevolata dalla facilità nella raccolta di grandi volumi di sangue e dalla semplicità del sangue. Granchi a ferro di cavallo mostrano solo un unico tipo di cellule nella circolazione generale, il Amebocyte granulare. Il plasma è il contenuto di sale dell&#39;acqua di mare e solo tre proteine ​​abbondanti, hemocyanin, la proteina respiratoria, il C-reattiva proteine, che funzionano nella distruzione citolitica di cellule estranee, comprese le cellule batteriche, e α2-macroglobulina, che inibisce la proteasi di patogeni. Il sangue viene raccolto da diretto puntura cardiaca in condizioni che riducono al minimo la contaminazione da lipopolisaccaride (aka, endotossina, LPS), un prodotto di batteri Gram-negativi. Un animale di grandi dimensioni può produrre 200-400 ml di sangue. Per lo studio del plasma, le cellule del sangue vengono immediatamente eliminati dal plasma per centrifugazione e il plasma può essere frazionato nelle sue proteine ​​costituenti. Le cellule del sangue sono opportunamente studiate al microscopio attraverso la raccolta di piccoli volumi di sangue in LPS-free soluzione salina isotonica (0,5 M NaCl) in condizioni che consentono l&#39;esame microscopico diretto mettendo uno dei più LPS-free vetrini sulla superficie del piatto di cultura, poi quelli di montaggio vetrini nelle camere di semplice osservazione a seguito dell&#39;adesione cellulare. Una seconda preparazione per l&#39;osservazione diretta è quella di raccogliere 3 - 5 ml di sangue in una LPS-free piatto embrione e poi espianto frammenti di amebociti aggregati ad una camera che il tessuto sandwich tra una diapositiva e il coprioggetti. In questa preparazione, il amebociti mobili migrare sulla superficie coprioggetti, dove possono essere prontamente rilevate. Il sistema di coagulazione del sangue comporta l&#39;aggregazione di amebociti e la formazione di un coagulo extracellulare di una proteina, coagulin, che viene rilasciata dai granuli secretori delle cellule del sangue. Analisi biochimica delle cellule del sangue lavate richiede che l&#39;aggregazione e la degranulazione non si verifica, che può essere realizzato attraverso la raccolta di sangue in 0,1 volumi pari al 2% Tween-20, 0,5 M NaCl LPS-free, seguita da centrifugazione delle cellule e lavaggio con 0,5 M NaCl.

Il granchio americano a ferro di cavallo, Limulus polyphemus, è probabilmente la fonte più conveniente per grandi quantità di sangue di qualsiasi invertebrati. Il sangue è semplice nella composizione, con un solo tipo cellulare nella circolazione generale, il Amebocyte granulare, e solo tre proteine ​​abbondanti nel plasma, hemocyanin, il C-reattiva proteine, e α2-macroglobulina. Il sangue viene raccolto dal cuore e le cellule del sangue e del plasma sono separate per centrifugazione.

Raccolta di sangue dal Granchio Ferro di Cavallo Americano, Limulus Polifemo

Il granchio ferro ha il sistema immunitario meglio caratterizzato tra tutti gli invertebrati a lunga vita. Lo studio dell'immunità nei granchi ferro è stato facilitato...

Per prelevare il sangue dall'america del ferro di cavallo *Limulus polyphemus*, è necessario tenere il granchio in posizione flessa e inserire l'ago della siringa nella cerniera per perforarne il cuore. Una volta raggiunto il sistema circolatorio, un granchio adulto può essere svuotato quasi completamente del suo sangue. Perché effettuare il prelievo?Il granchio ferro di cavallo ha un sangue che contiene un tipo altamente mobile chiamato amebocita, che secerne fattori di coagulazione specializzati i quali reagiscono violentemente in presenza di batteri gram-negativi. Un fatto che ha portato alla adozione da parte della FDA del test denominato Limulus amebocyte lysate, o test per i gram-negativi. Ciao, sono Peter Armstrong del Dipartimento di Biologia Molecolare e Cellulare dell'Università della California, Davis.Oggi vi parlo dal Marine Biological Laboratory di Woods Hole, nel Massachusetts, dove svolgo la mia ricerca durante l'estate. Oggi vi mostreremo come prelevare sangue dall'aragosta ferrata americana. Limulus polyphemus è probabilmente la migliore fonte per ottenere grandi volumi di sangue da qualsiasi invertebrato.Iniziamo. I granchi ferro di cavallo possono essere mantenut

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Emociti insetti svolgere molte funzioni importanti, sia immunitarie e non immunitarie, durante tutte le fasi di sviluppo degli insetti. La nostra attuale conoscenza dei tipi di hemocyte e la funzione viene da studi su insetti modelli genetici. Qui vi presentiamo un metodo per l'estrazione, la quantificazione e la visualizzazione di emociti da bruchi selvatici.

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L'emolinfa di Drosophila funge sia da sangue che da liquido interstiziale, circolando in tutto il corpo durante gli stadi larvali e adulti. Questo video descrive un protocollo per raccogliere l'emolinfa larvale al fine di quantificare le cellule circolanti.

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Questo video dimostra il test di disturbo dell'emocita, valutando la riadesione degli emociti nelle tasche ematopoietiche delle larve di Drosophila. Il disturbo meccanico rilascia gli emociti residenti, aumentando la conta degli emociti circolanti. Dopo il recupero, la riaderenza degli emociti residenti è confermata, illustrando la reversibilità.

Un test di disturbo degli emociti per valutare la riadesione degli emociti alle tasche ematopoietiche

Cambiamenti della pesca indotti alla pesca di crostacei sfruttati, come l'aragosta pesca americano, potrebbero potenzialmente influenzare le loro dinamiche riproduttive, portando ad una riduzione nel successo di accoppiamento. L'obiettivo di questo studio era di sviluppare un metodo invasivo per accertare il successo dell'accoppiamento delle aragoste femmine che possono essere fisiologicamente o funzionalmente maturo.

Un metodo non invasivo per<em&gt; In situ</em&gt; Determinazione del successo di accoppiamento in americano femminile Aragoste (<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

I campioni di sangue sono utili per valutare i biomarcatori degli stati fisiologici o della malattia in vivo. Qui descriviamo la metodologia per campionare il sangue dalla vena laterale della coda nel ratto. Questo metodo fornisce campioni rapidi con dolore e invasività minimi.

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Descriviamo un metodo per raccogliere in modo efficiente l'emolinfa quantificabile da piccoli artropodi per analisi successive.

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Qui, presentiamo un protocollo per una tecnica di raccolta del sangue ottimizzata in soggetti murini attraverso la venipuntura venosa facciale utilizzando una lancetta. Utilizziamo questa tecnica insieme alla valutazione citofluorimetrica per caratterizzare i fenotipi cellulari di ceppi transgenici, congenici e reporter. È adatto anche per l'analisi delle citochine sieriche e gli studi sul diabete.

Vena facciale Venipuncture per la raccolta del sangue murino

Impara la raccolta del sangue da Limulus polyphemus per la ricerca biomedica. Questo metodo consente di ottenere emolinfa per saggi LAL e studi sul sistema immunitario invertebrato.

Raccolta di sangue dal Granchio Ferro di Cavallo Americano, Limulus Polifemo

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