微生物と真菌の多様性

コンセプト講師用準備学生用手順
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  1. 微生物コロニーの構造を調べる
    • まず、割り当てられた培養プレートを収集し、そのうちの1つからパラフィルムと蓋を取り外します。
    • 覆われていないプレートを解剖顕微鏡の下に置き、プレートの各象限内の個々のコミュニティを観察します。
    • コロニーが特定されたら、観察されたコロニープロパティを表の適切な列に記入してください。 ここをクリックして表1をダウンロードしてください
    • 次に、他の2つの細菌種それぞれについて観察を繰り返します。
    • 3つの細菌種のグラム染色を行うには、まず3つの顕微鏡スライドの端に各細菌種のイニシャル、自分のイニシャル、および日付をラベル付けします。仮説:この実験では、グラム染色を使用してさまざまな細菌種や形状を解明することが可能であり、グラム陽性菌はクリスタルバイオレットで紫色に染まるのに対し、グラム陰性菌はサフラニン対比染色のためにピンク色に見えるという実験仮説が立てられます。帰無仮説は、すべての細菌の種類が両方の染色を等しく保持し、染色はそれらの種や形状の解明に役立たないというものです。
    • 最初の染色を開始するには、取り扱いを容易にするためにスライドにクリップを取り付けます。各細菌塗抹標本については、必ず洗浄および炎滅菌された接種ループを使用することを忘れないでください。
    • スライドの中央に2つのループ状の滅菌蒸留水を置きます。
    • ループを再度滅菌した後、寒天の未接種部分に数回触れてループを冷却します。
    • 次に、分離されたコロニーから少量の培養物を取り出し、スライド上の水と混合します。
    • スライドを室温で乾燥させ、汚れをすばやく炎に通して熱固定します。
    • 乾いたら、スライドにクリスタルバイオレットを数滴ピペットで入れ、2〜3分間放置します。
    • スライドを蒸留水で慎重にすすぎ、直接の流れをスライドの上部に向けて、水が穏やかに流れ落ちるようにします。水の流れを直接塗抹標本に向けないでください。
    • 次に、スライドをグラムのヨウ素で覆い、再び2分間放置してから、蒸留水でやさしくすすいでください。
    • 汚れが洗い流されなくなるまで、スライドを95%エタノールで脱色します。
    • すぐに、スライドを蒸留水ですすいでください。これにより、過度の脱色が制限されます。
    • 次に、サフラニン対比染色を数滴加え、30秒間放置します。これにより、存在するグラム陰性細胞が染色されます。
    • スライドを蒸留水でやさしくすすぎ、吸収紙で吸い取ります。
    • 他の2枚のスライドを同様に染色した後(ステップ6〜17)、それぞれを顕微鏡で観察します。
    • 最初に低電力の対物レンズを使用して、大まかな調整を行います。理想的なセクションを見つけたら、より高い倍率に移動します。
    • さらにイメージングを行い、中度対物レンズで塗抹標本を調整した後、塗抹油を直接塗抹標本に加えます。注:オイルは、最高の顕微鏡写真を提供する高出力対物レンズに必要です。
    • 次に、色鉛筆を使用して観察された細菌を適切な倍率の円に描き、観察された特性を適切な列に記入します。細菌の形状と、濃い紫色の染色で識別されるグラム陽性か、ピンクの染色で識別されるグラム陰性かに注意してください。表2をダウンロードするにはここをクリックしてください
    • 最後に、他の2つの染色された細菌スライドの観察、描画、および特性評価を繰り返します。
  2. 真菌構造を調べる
    • インキュベーターからS. cerevisiaeプレートを取り出し、顕微鏡スライドに水滴を置きます。
    • 滅菌された接種ループを使用して、酵母のフィルムを水滴に塗り、スライドの上にカバースリップを置きます。
    • スライドを顕微鏡下に最低倍率で置き、倍率を油浸設定まで上げて個々の酵母細胞を確認します。
    • 酵母の一般的な形状と構造を観察し、出芽によって無性生殖を行っている細胞を特定します。
    • 次に、適切な倍率の円でセルを描きます。
    • 酵母の観察が終わったら、S. cerevisiaeスライドを準備した子嚢菌アポセシウムスライドに交換し、顕微鏡を最低倍率に設定してください。
    • 色鉛筆を使用して、asciとascosporesを含む低倍率と高倍率で構造を描きます。
    • 最後に、ボタンキノコ、Agaricus bisporusを解剖顕微鏡の下に置き、杭、キャップ、鰓、柄、茎などの特徴を描きます。
  3. 結果
    • 表に記録されている細菌の色を使用して、どの種がグラム陽性で、どの種がグラム陰性かを判断します。
    • 次に、表に記録された形状を見て、どの細菌種がバチルス、球菌、またはスピリルムであるかを判断します。
    • 次に、酵母細胞のイラストとバクテリア細胞のイラストを比較します。注:子嚢菌類門由来の酵母(S. cerevisiaeなど)は無性生殖が可能で、これは顕微鏡下での細胞の出芽を通して観察できます。
    • 酵母細胞の出芽の観察を記録します。 注:子嚢菌は、有糸分裂と一倍体胞子の形成を介して有性生殖もできます。
    • 観察した胞子またはアスキ形成の観察結果をテーブルに記録します。
    • 注:担子菌門からの真菌は、杭の下にはっきりと観察可能な鰓を示します。
    • pileusの下に鰓を示した菌類の種を記録します。

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