DNAの単離

DNAは、組換えDNA技術などの多くのアプリケーションにおいて、細胞から分離し、正確な位置で切断する必要があります。

細胞の種類によってDNA抽出方法が異なりますが、標準的なステップは細胞溶解、タンパク質除去、DNA回収の3つです。

真核細胞の内部では、DNAは核内に詰め込まれています。したがって、DNAを単離するには、細胞膜と核膜の両方を破裂させる必要があります。

このステップは、粉砕または超音波処理によって細胞を分解することによって機械的に、または細胞膜の一部を溶解するために界面活性剤および酵素を使用することによって化学的に行うことができる。

細胞内容物が放出されると、破片は遠心分離によって可溶性成分から分離されます。回収された上清には、核酸と水溶性タンパク質が含まれています。

タンパク質を除去するために、プロテイナーゼK、ペプチダーゼ、リゾチームなどの酵素を上清に添加してペプチド結合を切断します。

DNAは、アルコールと酢酸ナトリウムなどの塩を添加することにより、沈殿することにより上清から回収されます。

単離された沈殿物は、水または緩衝液に溶解されます。