15.2: DNA単離

DNA単離プロトコルは、さらなる処理に必要なDNAの種類と品質に応じて、迅速で簡単なものから複雑で時間がかかるものまであります。例えば、プラスミドDNAの抽出は、単離時にプラスミドDNAをgDNAから分離するための適切な溶解法が必要なため、ゲノムDNAの抽出よりも少し複雑です。しかし、長距離DNAシーケンシングなど、高品質なDNAサンプルを大量に得る必要がある特定のアプリケーションでは、ゲノムDNA抽出であっても特定のプロトコルに従う必要があります。

ゲノムDNA抽出法の種類

ゲノムDNA抽出法の主な目的は、タンパク質、RNA、およびその他の細胞内容物からgDNAを分離することです。これには、1.細胞構造を機械的に破壊するか、または化学物質を使用して細胞溶解物2を得る。処理中の劣化からのDNAの保護 3.細胞破片からの可溶性DNAの分離 4.精製されたDNAの溶出。

ほとんどのゲノムDNA単離プロトコールは、溶液ベースまたは固相抽出法のいずれかです。溶液ベースの分析法では、沈殿および遠心分離のステップを使用して他の細胞材料からDNAを分離し、その後、有機抽出または「ソルトアウト」して細胞タンパク質から可溶性DNAを分離します。最終的なDNA沈殿は、エタノールを使用して行われます。対照的に、固相抽出法では、シリカやセルロースマトリックスなどの固体支持体を使用してDNAを結合し、その後、固体支持体から洗浄してDNAを溶出します。これには、遠心分離、真空、または磁気法を使用して、結合したDNAを他の細胞成分から分離することが含まれます。

gDNA抽出方法の選択は、サンプルの種類、一度に処理するサンプルの数、およびDNAの下流への応用によって異なります。