FISH - 蛍光In-situハイブリダイゼーション

蛍光In situハイブリダイゼーションまたはFISHは、固定細胞内の染色体上の特定の遺伝子または遺伝子の一部の位置を検出するために使用される技術です。

この手法では、蛍光標識された一本鎖DNAをプローブとして使用して、標的と呼ばれる相補的なDNA配列を含む染色体の一部に結合します。

まず、細胞は間期または中期で停止します。停止した細胞を緩衝液に懸濁し、清潔なスライドガラス上に広げます。

次に、ターゲットDNAと標識プローブを熱または化学薬品で変性させます。このステップでは、二本鎖DNAを分離し、プローブとターゲットDNAの両方を塩基対形成が可能な一本鎖配列として残します。

次に、プローブとターゲットDNAを混合し、一晩インキュベートします。これにより、プローブは染色体上の相補的な配列にハイブリダイズすることができます。

ハイブリダイゼーションが完了すると、余分なプローブは洗い流されます。

プローブを蛍光色素で標識した場合、ハイブリダイズされたDNAの位置を蛍光顕微鏡で直接視覚化できます。

そうでない場合は、ハイブリダイズDNAを可視化する前に蛍光標識する必要があります。そのためには、プローブ配列に、蛍光抗体などの蛍光色素が結合できる低分子であるハプテンに結合した修飾ヌクレオチドが含まれている必要があります。

このような遺伝子の直接的な可視化は、細胞分裂中の染色体の喪失、獲得、または再配列から遺伝的異常を検出できる細胞ベースの診断アッセイに非常に有用です。