33.15
イムノゴールド電子顕微鏡では、金標識抗体を用いて標的分子を標識します。
金は電子散乱を増加させて、コントラストの高いダークスポットを与えます。これらのスポットは、他の非標識構造と区別でき、標的分子の局在化を可能にします。
直接免疫標識は、標的分子に直接結合する一次抗体に結合した金プローブを使用します。
間接標識では、非標識一次抗体に結合する金標識二次抗体を使用します。間接ラベリングは、感度が高いため、より頻繁に使用されます。
免疫標識は、ポストエンベッディング、プレエンベッド、またはホールマウントなど、いくつかの異なる手法を使用して実行できます。
ポストエンベッディング技術では、サンプルを樹脂に包埋し、極薄切片にスライスして、金標識抗体で処理します。
プレエンベッド法では、まずサンプルを金標識抗体とインキュベートし、次にレジンをエンベレントして断面化します。
ホールマウント技術は、樹脂の埋め込みを伴いません。抗体反応は、サンプルホルダーに置いたサンプル上で直接行われます。
免疫電子顕微鏡法では、内因性タンパク質を特異的抗体で免疫金標識して、細胞および組織内のこれらのタンパク質を検出および位置発見します。 この手順により、さまざまな刺激条件下でのタンパク質の分布と定量化に関する洞察が得られ、タンパク質の機能に関する手がかりが得られます。 電子密度の高い金粒子を一次抗体ま…
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