カラムクロマトグラフィーの種類

ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィーは、タンパク質懸濁液などの混合物から純粋な化合物を抽出するために使用される一般的なタイプのカラムクロマトグラフィーです。

ゲルろ過クロマトグラフィーは、高分子ゲルビーズの不活性マトリックスを使用して、特定の細孔サイズを作成します。

タンパク質懸濁液の場合、細孔サイズよりも大きいタンパク質が最初に溶出し、小さいタンパク質はゲルビーズに閉じ込められます。これらのトラップされたタンパク質は、その後、複数の溶媒洗浄で溶出できます。

対照的に、イオン交換カラムには、特定のpHで正味の正または負の電荷を与える弱酸または弱塩基でコーティングされたマトリックスビーズが充填されています。

これにより、反対に帯電したタンパク質とイオン結合を形成することにより、表面電荷に基づいてタンパク質を分離できます。

最後に、アフィニティークロマトグラフィーは、抗体などのリガンドでタグ付けされたマトリックスを使用して、特定の結合相互作用に基づいて混合物から標的タンパク質を引き出します。

アフィニティークロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーでは、pH、イオン強度、競合分子の導入などの条件の変化によりカラム-タンパク質相互作用を弱める溶出溶媒を添加することにより、最終的に標的タンパク質を溶出します。