の複雑な運動挙動の研究キイロショウジョウバエ与えられたハエの動きの変化を定量化する能力に依存しています。この記事では、高分解能のトラッキングシステムを使用してこれを行う方法を示します。
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この記事について
サマリー
要約
ハエは、この分野の研究者に利用可能な遺伝的なツールの過多に起因する複雑な挙動を研究するための重要なモデルを提供しています。における運動行動を研究して
プロトコル
パート1：ハエの餌と管理
- ハエは、酵母のない標準のメディアを含むボトルで増殖させてください。あなたは、ハエを大量に必要になりますので、十字架は、それに応じて設定する必要があります。 25℃で暗サイクル：ハエは、12時間の光で栽培する必要がある
- ハエはすぐに羽化（1-3日）後に収集する必要があります。ハエは、二酸化炭素のディフューザーを使用して、この段階で働いたことができ、オートクレーブまたは酵母培地を含む試験管にソートしておく必要があります。我々は、試験管にのみ、保存されている男性10を使用してください。
- 行動実験を実行する前に、二酸化炭素の使用後に少なくとも一日か二日を許可する。私たちは行動アッセイ3-5日以下の羽化にハエを実行する。
- アッセイは、常に概日リズムの問題を回避するために、毎日同じ2〜3時間の時間ウィンドウ内で実行する必要があります。
パート2：管理された環境での追跡システムのセットアップ
- 全ての実験は、70％の湿度と25℃の一定温度を維持する環境の部屋で行われます。
- （カメラが下向き）に記録される領域の上にデジタルビデオカメラを一時停止します。私たちのトラッキングソフトウェアは、コントラストをベースにしているので、我々は、ライトボックス上のカメラを一時停止する。カメラは、FireWire接続を介して直接のDellコンピュータにビデオを記録....
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ディスカッション
我々のセットアップでは、やや強い空気のパルスは、一時的にハエの動きを停止します。空気のパルスが終了すると、ハエは、図2に示すように、この定常状態と正常に動き回るから解放されています。この空気のパルスが効果的に人口の移動を同期化されるため、我々はまた勢い破りの刺激に続く運動の発症を学ぶことができるように試験を開始するために使用。開始後自発運動のパラメータが空気パルス（図2）の影響を受けないので、このアッセイは、しかし、空気のパルスなしで行うことができます。
ロコモーションの自動解析で見られるものが頻繁に発生する問題は、衝突の問題です。トラッキングプログラムには、衝突ハエを扱う時悪名高く悪いほとんどの部分です。これらのプログラムは、しばしば衝突時に瞬間的にオブジェクトの"視力"を失う、そしてそれは新しいオブジェクトとして、このオブジェクトのラベルを見つけた上で。結果は、実際にチャンバー内に存在するよりも、トレース、より多くのオブジェクトを持つ出力することができます。多くの人々は、単一のハエをトレースすることでこの問題を解決する。これに明らかな問題は、しかし、その単一.......
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謝辞
この作業は、LCグリフィスに授与健康グラントR01 GM54408の国立研究所によってサポートされていました。私たちは、正方形のチャンバーを設計し、当社のチャンバーを構築し、そして分析の問題に関する有益な会話のためのDanバレンテとティムLebestkyのためのブランダイス大学の機械工場弊社のアッセイ、フランクメロのセットアップのすべての彼の助けのためにフレッドウルフに感謝します。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント | |
|---|---|---|---|---|
| 正方形チャンバー | ツール | 工作ショップ | 該当なし | Wolf et al. 20021による設計 |
| デジタルカメラ | カメラ | シャープ | ViewcamZ VL-23 | |
| 流量計 | ツール | Cole-Parmer | SY-32003-12 | |
| ライトボックス | ツール | DNASTAR | Seq-Easy | |
| 活性炭フィルター | ツール | Fisher Scientific | 09-744-37 | |
| DIAS 3.2 | ソフトウェア | Soll technologies | 該当なし | www.solltechnologies.com |
参考文献
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. High-Resolution Analysis of Ethanol-Induced Locomotor Stimulation in Drosophila. J Neurosci. 22 (24), 11035-11044 (2002).
- Soll, D. R. The use of computers in understanding how animal cells crawl. International rev....
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再版と許可
