アクセス可能なシナプスの電気生理学のアプリケーションでは、シナプス変異体の分析に有用なシナプス活性の定量的な尺度を提供しています。この記事では、神経筋接合部（NMJ）のを公開するために使用される解剖の方法を説明します線虫Caenorhabditis elegans（線虫）と簡潔にこの製剤を適用することができる用途のいくつかについて説明します。
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この記事について
サマリー
要約
神経伝達は、神経細胞が急速な時間スケールで、彼らのポストシナプスのターゲットに化学信号を介して情報を転送するプロセスです。この複雑なプロセスがリサイクル、分泌小胞、カルシウムセンシング、小胞融合、シナプス後受容体の局在と機能し、最後の適切なシナプス接続、電気信号の伝導、標的とプライミングを確保するために多くの事前事後シナプスタンパク質の協調活動が必要ですメカニズム。神経科学者としては、これらの各ステップで機能するタンパク質の解明とその作用メカニズムを理解することが、当社の目標です。シナプスからの電気生理学的記録は、シナプス伝達中に発生する基本的な電気的事象から読み出さ定量化を提供しています。分子および遺伝学的ツールの強力な配列とCのシナプスタンパク質を操作するために利用可能なこの手法を組み合わせることにより、 elegansは 、我々はシナプス伝達の結果として得られる機能的な変化を分析することができます。
C.虫は、運動ニューロンと体壁の筋肉のコントロールの移動、これらのシナプス1のため、まとまりのない運動器官の表現型（UNCのとして知られている）を持つ変異体がしばしば乱すシナプス伝達の間に形成さNMJs。 UNCの変異体は、細菌の食物源の豊富な供給を維持しているので、彼らは食物を摂取するために、いくつかの咽頭のポンプ機能を維持する限り、実行可能なままです。この、一緒に事実とそのC.虫は雌雄同体として存在し、それらは精巧な交尾行動を必要とせずに変異子孫に渡すことができます。ワームから記録するために我々の最近の能力と相まって、これらの属性は、2,3,7はこの方法UNC変異体の影響の神経伝達を正確に対処するための優れたモデル生物行うNMJs。
解剖の方法は、NMJsを公開するワームの表皮に切開を行うために、シアノアクリル接着剤を使用して、成虫を固定化する伴います。 C.以来、 虫の大人は、解剖は解剖顕微鏡を使用して実行し、優れた手と目のコーディネーションを必要とされる長さはわずか1 mmである。 NMJの録音は全細胞の個々の体壁筋細胞と神経伝達物質の放出をクランプ電圧は、電気刺激、光活性化チャネルロドプシンを介する脱分極4となるすべてが高浸透圧生理食塩水、を含む刺激のさまざまなプロトコルを使用して誘発することができることによって作られています簡単に説明します。
プロトコル
解剖のために使用するツールのA.の準備。
- 解剖/録音室：私たちは通常、22 mmの直径の円形カバーガラスを十分に収容できる大きさであることを中心にドリルで丸穴で、1 / 16インチの磁性シートから私たちの記録室を構築する。チャンバーの外側の寸法は、レコーディングを行うために使用される顕微鏡のステージに依存します。磁性シートの裏面に、私たちはカバーの各隅に低い溶融Paraplax組織埋め込むワックスのペレットを配置することにより、チャンバーに付着する48 × 60 mmのカバースリップを、添付ガラスとチャンバーの間に挟まスリップ。それは連続的な層の接着チャンバーにカバースリップを形成するまでワックスは、その後、ガラス板を上に向けて、ホットプレート上で溶融する。ワックスはすぐに溶けて、このステップは放置しないでください。チャンバーは削除と同時にワックスが溶けているように冷却する必要があります。 22ミリメートルの円形空洞の内側の縁に沿ってseepedている過剰なワックスは、かみそりの刃のエッジを使用して削除できます。
- Sylgardコーティングされたカバースリップ：解剖が22ミリメートル、録音室の円形の空洞内に配置されているSylgardコーティングしたカバースリップ上で実行されている。 Sylgardのコートは、シアノアクリル接着剤がダウンしてもワームがそれが差し込まになったときに接着剤ピペットチップをバックブレークするクッションとして機能するときに接着スリップカバーに付....
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ディスカッション
遺伝的モデル生物C、elegansのは理想的にシナプスのタンパク質をコードする遺伝子の変異の機能解析を通じて、シナプス伝達の研究に適しています。ここではCをレンダリングする解剖手法を記載している虫は、電気生理学的解析のためにアクセスNMJs。付属のビデオは 、C言語の重要な手順を示していますelegansの解剖とシナプス活性を測定するために用いられる代表的な録音の設定。このテクニックを学ぶことに最大の課題を提起三つのステップとしては、1）ワームの接着のステップ、2）成功した切開を行う、と体壁の筋肉への3）パッチ。これらをマスターしたら、この準備は、電圧クランプや電流クランプモードでのポストシナプス筋の録音に適している。誘発刺激に対する応答は、容易に変異さまざまな経歴でこの解剖の準備を用いて測定することができます。野生型成体のワーム（長さは1 mm）をすでに分サイズを考えると、成人に達するか、または骨張った残っていないシナプスの変異体は、この解剖のアプローチに従順になる場合があります。いくつかのラボが正常にCから記録されているも.......
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謝辞
この記事は、JERにNIHの補助金によって賄われていた。私は録音のデモの1つで使用コリン作動性運動ニューロンにチャネルロドプシンを発現するトランスジェニックワームを提供するための博士アレックスゴットシャルクに感謝したいと思います。
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参考文献
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