非ヒト霊長類の脳の公平な立体学を：大切なのを知ること

サマリー

霊長類の脳の解剖学的組織は、ヒトの正常と病理学的状態に重要な洞察を提供することができます。公平な立体学が正確かつ効率的に所定の基準空間の合計ニューロンの数を（または他の細胞型）を推定するための方法です。 ¹。

要約

ヒト以外の霊長類はヒトの脳の正常機能と疾患のプロセスを理解する上で重要な並進種です。公平な立体学、組織切片における生物学的なオブジェクトの定量化のための最先端のように受け入れられる方法

プロトコル

パート1：組織の前処理が行われるのは、Burkeらによると行う必要があります。 ^{（2009）5。}

1. 簡単に言えば、組織はよくパラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、またはホルマリンで灌流してください。これは通常、他の臓器を収穫するために使用される標準transcardial灌流によって達成することができます。本研究では被験者は深く、（10 mg / kgを、IM）塩酸ケタミンで鎮静したペントバルビタールナトリウムの過剰投与（25 mg / kgを、IV）を使用して、安楽死させ、完全に放血するまで0.1MのPBSでtranscardially灌流。これは、5分（〜1リットル）のためのPBS中4％パラホルムアルデヒド溶液が続いている。組織はよくparaformaldeyhde、グルタルアルデヒド、またはホルマリンで灌流してください。脳が定位、ブロックされた頭蓋骨から削除すべきである、凍結保護、および⁵冷凍、、定める量を重量を量った。

第2部：組織の系統的サンプリング、Burkeらによると。 ^{（2009）6。}

1. この例では、ベルベットモンキーの脳の前頭葉に焦点を当てた。参照のスペースは中央の溝から左半球の前頭極への皮質組織を含むように定義されていました。我々の目的のためにシリーズは50μmので切片化、皮質全体の10分の1のセクションに設定した。つの完全なシリーズは、ク....

ディスカッション

霊長類の脳における公平な立体学は、他の生体試料のそれと似ています。しかし、霊長類の脳の大きさを考えると、慎重な処理計画が50μmの時にスライスするときにベルベットモンキーの単一の半球は、1200以上のセクションをもたらすので、推奨されます。まず、定位、ブロックおよびサブジェクト間のセクションの標準的な平面を提供するブロック間の部分的なセクションを最小限に抑え、かつ管理サイズのブロック^5を提供する1センチメートルブロック、に脳をブロックすることを推奨します。立体学のための重要なステップは6-10セクションを参照領域を介して取得されるような体系的なサンプリングである。霊長類の脳では、これは我々は長期的な研究計画の^6の保持抗原の組織をバンキング提案するそれぞれの脳から得られる潜在的なデータを最大限にするためにので、未処理材のかなりの量を残す。組織は、バンクされている場合、サルの脳内標的タンパク質を識別するための体系的免疫検出のアプローチは、立体学^9で調製することができる。このような皮質や葉などの大きな領域は、その前の計画は潜在的な関心の最小基準空間を介して少なくとも10のセクシ.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Stereologer	Stereology Resource Center (Chester, MD)	www.disector.com
Stereology Tool-Kit Stereologerシステム	BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)
StereoInvestigator	MBF Bioscience