HC11乳腺刺激分化はmammospheresと呼ばれるドーム型の構造体の形成によって特徴づけすることができます。構造は、乳腺刺激分化を定量化を支援するために、位相差顕微鏡で列挙することができます。
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この記事について
サマリー
要約
一般的にマウス乳腺上皮細胞培養における乳腺刺激分化の程度を決定するために使用される表現型の指標はmammospheresと呼ばれるドーム状のセル構造の形成である
プロトコル
- HC11細胞を10％ウシ胎児血清、5μg/mlインスリン、10mMのHEPES、能力を確立するために10ng/ml上皮成長因子（EGF）を添加したRPMI 1640培地で6日間コンフルエントまで増殖させた。
- 細胞をPBSで洗浄し、24時間EGFのない増殖培地中で維持した。
- 乳腺刺激分化細胞を分化培地中でインキュベートしたを誘導するために、デキサメタゾン（10 -6 M）、インスリン（5μg/ mlの）とプロラクチン（5μg/ ml）を持つ、すなわちRPMIはDIPと呼ばれる。
- 記載時間後のDIPのほかでは、mammospheresは、デジタルカメラ、オリンパスIX71顕微鏡を用いて位相差顕微鏡により撮影し、計数した。
代表的な結果：
正常乳腺上皮細胞単層と複数のmammospheresだけでなく、単一のmammosphereのハイパワーの倍率の低消費電力の倍率はそれぞれ、図1に示されています。 
図1。 Mammospheres。（）正常乳腺上皮細胞単層は、コンフルエント細胞の平らな層として表示されます。 （B）DIP刺激の3〜5日後に複数のmammospheresが表示されます。 5日に撮影された写真は、DIP加算を投稿する。 DIPさらに後5日間でmammospheresを含む単一のフィールドの（C）高倍率。
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ディスカッション
この手法を成功させると最高の品質のためにためには、上皮細胞は乳腺刺激ホルモンで誘導される前に合流する地点に維持する必要があります。定量化が困難に多数のmammospheresが、ある状況があるかもしれません。従って、定量的な目的のためにそれはmammospheresの数がカウントされることができるとき時点でmammospheresを撮影するのが最善です。
乳腺上皮細胞の乳腺刺激分化の程度を決定するために使用される様々な分子マーカーが存在しますが、二次元培養で増殖した細胞のために使用されるいくつかの形態学的マーカーがある。牛乳のタンパク質が蓄積することができる小型のドーム構造を形成する上皮細胞の単層の能力は、この発達過程中に発生した形態学的変化を監視できるようにするためのモードが用意されています。
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謝辞
議会監督医学研究基金助成金（DAMD17 - 01から0264）からMLカトラーとMLカトラーへの米軍癌研究所の資金は、作業を支持した。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| RPMI | Invitrogen | 21870076 | |
| ウシ胎児血清 | Atlanta Biologicals | S11550 | |
| L-グルタミン | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| PenStrep | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| Hepes | Quality Biological, Inc. | 118089060 | |
| EGF | Sigma-Aldrich | E9644 | |
| インスリン | GIBCO, by Life Technologies | 12585-014 | |
| デキサメタゾン | Sigma-Aldrich | D1756 | |
| 顕微鏡 | オリンパス株式会社 | IX71 | |
| デジタルカメラ | QImaging | Retiga 2000RV Fast 1394 |
参考文献
- Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells. Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).
- Wang, W. Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells. J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).
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再版と許可
