方法論記事

エラスターゼによるマウス実験的腹部大動脈瘤の作成

DOI：

10.3791/1280

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2009年7月23日

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1Department of Cardiovascular Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Vascular Surgery, Stanford University School of Medicine

この記事について

サマリー

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このビデオでは、腹部大動脈の大動脈セグメントにブタ膵臓エラスターゼの過渡腔内注入を介してマウスでは腹部大動脈瘤（AAA）を誘導する方法を示しています。モデルは、多数のトランスジェニックやノックアウトマウスの進展に伴い、AAAの病理に広範な洞察を追加する機能を持っています。

要約

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腹部大動脈の大動脈セグメントにブタ膵臓エラスターゼの過渡腔内注入は、最初にAnidjarらによってラットで説明されて以来、腹部大動脈瘤（AAA）の最も広く使用されている動物モデルである。その開発は1理論的根拠をベースにしたエラスチンの破砕性質にAAASで観察。このラットモデルは、マウスの大動脈大動脈領域でAAASを生成するように変更されています。2モデルは、多数のトランスジェニックやノックアウトマウスの進展に伴い、AAAの病理に広範な洞察を追加する機能を持っている。また、AAAのために潜在的な治療薬をテストするために実行可能なプラットフォームです。このビデオでは、我々は我々の研究室で使用されるエラスターゼ注入AAAの手順を示しています。

マウスは、イソフルラン2.5％を使用して麻酔し、そして開腹術を無菌条件下で行われる。腹部aortaisは営業実体顕微鏡（ライカ）の支援により単離した。近位と遠位大動脈周囲に一時的な合字を配置した後、大動脈切開は30ゲージの針の先端との分岐で作成されます。 PE - 10ポリエチレン管の熱テーパーセグメントは、大動脈切開を介して導入して保護されています。大動脈内腔は、その後、生理食塩水を含むI型ブタ膵臓エラスターゼ（;シグマケミカル社4.5 U / mL）を、100 mmHgで5-15分のために灌流される。灌流カテーテルを除去した後、大動脈切開は、内腔の狭窄なしに修復されます。

プロトコル

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  1. マウスは、吸入イソフルラン2.0〜3.0ミリリットル/ Lで麻酔
  2. 腹部を剃毛し、アルコールとbetadineでスクラブされています。
  3. マウスは、術野に仰臥位に配置されます。
  4. 滅菌手袋は、外科医が着用され、そして使用される機器は、ホットビーズ滅菌器で滅菌されています。
  5. 長い正中腹部切開が行われます。腹部の内容は、腹部大動脈を露出するために滅菌ガーゼと腹部の外に退避されています。
  6. 腹部大動脈は左腎静脈のレベルから分岐するために絶縁されています。
  7. 腹部大動脈の枝を露出し、10から0縫合糸で結紮されています。分岐の1.0センチメートル内のすべての大動脈の枝は結紮されています。
  8. 一時的に6.0絹の合字は、大動脈の近位および遠位部分の周囲に配置されています
  9. 大動脈切開は、30ゲージの針付き分岐で作成されます。
  10. 熱テーパーポリエチレンチューブ（PE - 10）は大動脈切開を介して導入し、タイで固定されています。
  11. 生理食塩水バッグを使用すると、100 mmHgにキャリブレーション〜136 cmの高さでハング、大動脈は4.5 U / mLのタイプIブタ膵臓エラスターゼを含む生理食塩水で満たされている。大動脈は、通常、5〜15分のエラスターゼ灌流時の元の直径の150から170パーセントに拡張させる。
  12. 潅流カテーテルを除去し、大動脈切開は収縮を避けるために、10から0縫合糸で閉じられます。
  13. 大動脈切開を閉じた後、遠合字は削除されます。
  14. 修理大動脈切開からほとんど、あるいは全く出血がある場合は、近位合字は削除されます。拡張された大動脈は即座に血液で満たされる。
  15. 腸を腹部に返され、傷は6から0ナイロン/ポ​​リプロピレン縫合糸で2層に閉じられます。
  16. 0.25パーセントBupivicaime滴（切開の大きさの各センチメートルためappx一滴が）傷に配置され、Caprofen（5mg/kg）のいずれかの用量を皮下投与される。
  17. マウスは暖かい地域に配置され、通常15分以内に回復される。

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図1。エラスターゼ誘導AAAの代表結果。

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ディスカッション

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これまでの研究では、さまざまな商業エラスターゼ製剤を3からAAAの開発における重要なロット間のばらつきを指摘している。従って、それはAAASを誘導する準備の能力を文書化するために、適切な対照群を持っているだけでなく、生産ロットを監視することが重要です。

興味深いことに、このモデルではAAAの開発に対する感受性は、3を使用したマウス系統に依存しています。現在のビデオで使用されているマウスは、概説のプロトコルを使用してAAAの一貫した開発を持っているC57BL / 6系統のものである。エラスターゼの濃度及び/または培養時間は、他の菌株に対応するために調整されることがあります。

マウスにおけるエラスターゼとAAAの創造の手法が技術的に困難ですが、それはAAAの形成と発展の基盤となる分子機構を研究するための重要なテクニックです。実践と技術的な変更は私たちのラボの90％以上の成功率をもたらしました。我々は、ビデオとそれに付随するテキストはこのテクニックを使用する実験室のための学習曲線を減らす助...

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開示事項

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著者らに開示すべき事項はありません。

謝辞

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国立衛生研究所から（P50 HL083800 - 03）：この作品はSCCOR助成金"のメカニズム、階層、および治療AAA病の"サポートされていました

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
タイプ I 豚膵臓エラスターゼ試薬Sigma-AldrichE1250
ポリエチレンチューブ (PE-10)BD Biosciences427400
CHANGE-A-TIPBovie Medical Corporation18010-00 (FST)電気メス
LEICA MZ6Leica Microsystems実体顕微鏡
LEICA DFC290HDLeica MicrosystemsUSBカメラ
Image Pro Express ver. 6.0Media Cybernetics Inc.ソフトウェア

参考文献

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  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).

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