この記事はのフローラルディップ法を示しています。アグロバクテリウムツメファシエンス媒介形質転換のシロイヌナズナ。細胞周期調節プロモーター - レポーターを導入することにより、 pTSO2：：β-グルクロニダーゼ（GUS）、へシロイヌナズナ、我々は1つがトランスジェニック実生におけるGUSレポーターの発現を検出する方法を示しています。
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この記事について
サマリー
要約
生物に外来遺伝子を導入する能力は、現代生物学とバイオテクノロジーの基盤となります。モデルの顕花植物の
プロトコル
I.フローラルディップシロイヌナズナの形質転換
- 変換の前に約1ヶ月、ポット当たり約10〜15工場で4〜8ポット（5インチ平方のポット）にシロイヌナズナの種子をまく。正常な受精能を持つ植物のために、プラスミド構築あたりの植物の4鉢で十分です。一低受精率と変異体シロイヌナズナを変換する必要がある場合、それに応じてポットの数を増やす。
- 植物は標準条件（16時間明、22℃で暗所8時間）で栽培されています。植物が短い日またはより低い温度下で栽培されている場合、それらは変換の準備をして花と長い時間がかかるようになります。良い植物の世話は、成功した変換のために不可欠な健全な植物を、保証されます。
- 植物は、単にボルトで固定し、花に始めているときに。彼らは今、変革のための準備が整いました。形質転換効率、変換前の3-4日を増やすために、可及的速やかに多くの二次シュート形成を促進するためにボルトで固定しているとして、主花序の枝を切り落とす。植物形質転換の前日に水。これは土が花、浸漬の間にあまり浸透メディアを吸収しないことが保証されます。
- アグロバクテリウムツメファシエンス菌株GV3101はpTSO2を運んで：（GUS、50μg/ mlのカナマイシン：pTSO2の場合）：2日前の変換に、適切な抗生物質を含む40ミリリットルLBに接種する<....
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ディスカッション
形質転換の効率は以下に説明されているさまざまな要素によって決定されます。
- 植物の健康と自分の年齢が最も重要です。多数の未熟な花芽を生産する約1ヵ月の古い植物は理想的です。変換する前に二次シュート形成3-4日奨励するために、主枝をオフにトリミング形質転換効率を向上します。古い植物は、形質転換することではなく、より低いレートで上昇を与える。
- 植物の生殖能力は重要です。一低受精率を有する変異体を変換する必要がある場合、多くの植物は、浸漬のために必要となります。
- 浸潤のバッファーに0.3％シルウェットL - 77界面活性剤が不可欠であると考えられる。
- 浸潤のメディアに時間を浸漬することは、少なくとも5分にしてください。
- 真菌汚染を減らすために、いくつかの注意が必要。最初に、人は植物/土壌浸透前日の水遣りで浸透メディアを浸すから土壌を避ける必要があります。水没浸潤のメディアで土壌をしないでください。第二に、湿気を減らすために浸透した後、24時間以内にプラスチック製のカバーと紙タオルを削除してください。第三に、水生植物は、浸透後の5日間まではしないでくだ.......
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開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
我々はpTSO2を構築するための純新王に感謝：：GUSと図1の写真、デトレフワイゲル有益なコメントをGUS -フールプルーフプロトコル、Paja Sijacic、とコートニーホランダーを共有するための。 Z. Lの研究室の研究は米国国立科学財団（IOB0616096とMCB0744752）によってサポートされています。 ZLは部分的にメリーランド州農業試験場の大学によってサポートされています。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 6-ベンジルアデニン | Sigma-Aldrich | 852430 | |
| Silwet-77 | Crompton Corp. | 毒性あり、手袋を着用すること | |
| Murashige and Skoog 基本培地 (MS) | Sigma-Aldrich | M5519 | |
| Gamborg’s ビタミン溶液 1000X | Sigma-Aldrich | G1019 | |
| X-Gluc (5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル β-D-グルクロニド シクロヘキサミン塩) | Biosynth International, Inc | B-7300 | 毒性あり、光感受性のため暗所に保管すること |
| Micropore 3M テープ | Fisher Scientific | 19027761 |
参考文献
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J....
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再版と許可
