昆虫の蛹の除去:蛹の調査方法

要約

出典:Fukutomi, Y., et al. ショウジョウバエの蛹期のステージングと翼の色素沈着の測定方法。J. Vis. Exp. (2018).

この記事では、昆虫の蛹を内部の蛹に無傷のまま残し、さらなる調査に適した方法で除去する技術について説明しています。プロトコルの例は、ショウジョウバエguttiferaの手順を示しています。ただし、この手法は他のショウジョウバエ種にも適用できます。

プロトコル

このプロトコルは、Fukutomi et al., Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018)からの抜粋です。

1. プパリウムの除去

NOTE ショウジョウバエの蛹は、蛹と呼ばれる構造で覆われています。Muscomorpha(ハエ)の昆虫は、蛹化時に幼虫のクチクラを脱ぎ捨てません。代わりに、アポリシス後にキューティクルを硬化させ、それを蛹、蛹の保護カバーとして使用します。蛹の内部に住む蛹は、非常に柔らかく壊れやすい真の蛹のクチクラを持っています。P4(ii)付近でアポリシスが起こる前に、上皮と蛹が一緒に付着しているため、損傷を受けずに蛹を切除することは非常に困難です。P5以降、蛹の除去は面倒ですが、形態学的観察と蛹の病期の定義には有用です。プロセスは次のように実行されます。

1. ペーパータオルに両面テープを貼ります。
両面
2. テープの腹側を上にして、蛹を置きます(図1A)。
3. 蛹の前面と内部の蛹の間のスペースを見つけます。鉗子を使用してこの隙間の周りの蛹をつかんで取り除き、蛹の頭の前面を露出させます。
4. 鉗子の先端を前後軸と平行に動かして挿入します。鉗子の先端を持ち上げて、蛹を局所的に壊します。破損が蛹の後部に達するまで、このアクションを繰り返します。蛹と蛹の脚の間にも隙間が形成されていることを確認し、蛹の腹側を壊して、内部の蛹への損傷を最小限に抑えます(図1B)。
5. 蛹をできるだけ壊した後、細い絵筆(#5 / 0)を使用して蛹を取り出します(図1C)。
6. ddH₂Oで湿らせたティッシュペーパーの上に蛹を置き、プラスチック製のペトリ皿(直径60 mm x 高さ15 mm)に入れます。露出した蛹は傷つきやすく、乾燥しやすいため、できるだけ早く写真を撮りましょう
    

結果

図 1.蛹の除去の図。(A)蛹の腹側を上にして、両面テープの上に置きます。蛹の前部を取り外します。(B)腹側から鉗子で蛹を壊します。(C)蛹を壊した後、絵筆を使って蛹を取り出します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ショウジョウバエguttifera	カリフォルニア大学サンディエゴ校のショウジョウバエ種ストックセンター	15130-1971.10	Drosophila guttifera、この記事で使用されているショウジョウバエの種
NICETACK両面テープ	ニチバン	NW-15SF	蛹の取り外しのための両面テープ
デュモン#5鉗子	ファインサイエンスツール	11252から20	鉗子、蛹を除去するための
ゴッホVISUALペイントブラシ	タレンスジャパン	GWVR-#5/0	ペイントブラシ、蛹除去用
実体顕微鏡	オリンポス	SZX16	実体顕微鏡、形態観察用
デジカメ	オリンポス	DSE-330-Aの	デジタル カメラ, 画像用
ファルコンスタンダードティッシュカルチャーディッシュ	コーニング	353002	プラスチックシャーレ(直径60mm×高さ15mm)

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