ショウジョウバエ求愛条件付け:ハエの学習と記憶をテストする方法

要約

出典:Koemans, T. S., et al. 学習と記憶の尺度としてのショウジョウバエの求愛条件付け。J. Vis. Exp.(2017年)。

このビデオでは、求愛条件付けと呼ばれるショウジョウバエの学習と記憶をテストする古典的な条件付けアッセイについて説明しています。このアッセイは、非受容的な事前結合された女性による拒絶を経験した後の男性の求愛の減少に基づいています。このプロトコル例は、短期記憶と長期記憶の評価に使用できる手順のセットアップを示しています。

プロトコル

このプロトコルは、Koemans et al., Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. (2017)からの抜粋です。

注:以下に概説するプロトコルでは、収集、トレーニング、およびテストの1つの複製が説明されています。結果の再現性をテストするには、これらのステップを並行して、複数の日に、別々のハエのグループで繰り返す必要があります(表1)。このプロトコルは、卵から成虫までの10日間のライフサイクルに基づいており、これは、25°C、湿度70%、および12時間の明暗サイクルの一定の条件下でハエを飼育する場合には正常です。このプロトコルのすべての側面は、アッセイ全体を通じて条件が一定に保たれていることを前提としています。インキュベーター内の照明が点灯する時間前(BLO)または照明が点灯した後(ALO)の時間は、研究者の好みの時間に応じて便利に設定できるため、時間として示されます。CO2ガスは、ナイーブなオスのハエの最初の収集と、事前に交配したメスの収集にのみ使用してください。この求愛条件付けのプロトコルは、次の手順で構成されています。

1. プレメイトされた女性のコレ....

結果

図1:求愛指数の決定と実験の概要。(A)メスのハエに対するステレオタイプのオスの求愛行動を示す画像。求愛行動のさまざまな段階が示されています:オリエンテーション(I)、フォロー(II)、翼の振動(伸展)とタッピング(III)、舐める(IV)、交尾の試み(V)。(B)インキュベーターの光サイクルに対するトレーニングおよびテスト時間の概略図(時間単位でマークされています)。トレーニング時間はバーで示され、STMとLTMの休息期間は破線で示され、テストの開始点は矢印で示されます。LTMのテスト時間はトレーニングの翌日であることに注意してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
P{KK101437}VIE-260B	VDRC	101437	60100背景のDhat-at-RNAi
P{KK108109}VIE-260B	-	-	60100 バックグラウンドの Control-RNAi (K. Keleman からの寄贈)
w+, UAS-dcr2/yhh;;elav-Gal4 (III)	-	-	汎ニューロンドライバーライン
植物組織培養用コンテナ	VWRの	960177	175 mLプラスチックバイアル
折り畳みフィルター	ワットマン	10311643	ハエが蛹になることができる領域を拡大するための濾紙
平底ブロック(96ウェル)	キアゲン	19579	ハウジングブロックに使用
MicroAmp透明粘着フィルム	応用バイオシステム	4306311	平底ブロックの蓋としてのPCR接着フィルム
カミソリの刃	-	-	どんな鋭利なものでもかまいません
ニードル	-	-	直径0.8mm
アスピレーター	-	-	1mLのピペットチップをハサミでカットして2個にします。ピペットチップの細い先端は、~80cmのフレキシブルホースにフライエントランスとして配置されています。ハエがホースに入るのを防ぐために、先端とホースの間に通常の綿または小さなメッシュの視線が配置されています。ピペットチップの残りの半分は、ホースの端のマウスピースとして使用できます。
求愛室	-	-	ファイルS1は、指定されたCADソフトウェアで開くことができます
ビデオカメラ	ソニー	-	カメラ仕様:>4Mピクセル、フルHD。
			手動定量化の場合、単純なビデオ録画デバイスであれば、求愛行動を正確に観察するのに十分な品質のビデオを生成できる可能性があります。自動定量化の場合、使用するソフトウェアによって要件が異なる可能性が高く、自動定量化が必要な場合は、これを徹底的に調査する必要があります。
>名前	会社	カタログ番号	コメント
パワーフード
寒天	シグマ	A7002
酵母	ブルッジュマン	-
酵母エキス	MPバイオメディカル	0210330391
ペプトン	シグマ	P6838
ショ糖	シグマ	S9378
グルコース	シグマ	G7021
MgSO4	シグマ	M2643
CaCl2	メルク	1023780500
メチルパラベン(注意)	シグマ	H5501-J
プロピオン酸(注意)	シグマ	P1386
脱塩水	-
イーストペースト	-		酵母の穀物と水の混合物を1:1の比率で
名前	会社	カタログ番号	コメント
普通の食べ物
寒天	MPバイオメディカル	215017890
酵母	ブルッジュマン	-
トウモロコシ粉	デ・モーレン	-
砂糖	デ・モーレン	-
メチルパラベン(注意)	シグマ	H5501-J
プロピオン酸(注意)	シグマ	P1386
脱塩水	-