フライクライミングアッセイ:Drosophila melanogasterの一般的な移動をテストする方法

要約

出典:Gevedon, O., et al. Drosophila melanogasterの新規神経保護遺伝子を特定するためのIn Vivo前方遺伝学的スクリーニング。J. Vis. Exp.(2019年)。

このビデオでは、ハエの移動を定量化する簡単な方法と、実施されたクライミングアッセイを示しています。フライクライミングアッセイは、ジオタクシスの負の反応に依存する運動機能の一般的なテストです。

プロトコル

このプロトコルは、Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. からの抜粋です。(2019年)。

1. クライミングアッセイ (Ali et al., J. Vis. Exp. から適応)(2011年))

1. クライミングアッセイを検証します。この研究では、Aliらが以前に説明した方法論に基づいて、Elav^C155>UAS-Tau^R406W(低いクライミングパス率を示す)とElav^C155>UAS-GFP(対照)およびElav^C155>UAS-mCherry(対照)ハエを使用して、クライミングアッセイをテストします。
2. ハエを一度に1ラインずつ試験室にひっくり返し(CO₂麻酔は使用しないでください)、5分間回復させます。試験が別々の日に行われる場合は、その日の同じ時間にアッセイを実施してください。この研究では、移動運動に対する概日的影響を制御するために、すべてのクライミングアッセイが午後に行われました.
   注 テスト時にはハエを直射日光にさらさないでください。これは彼らの登る能力を妨げます。
3. チャンバー(下向きにマークされている)を固体表面に置いたマウスパッドに3回強制的にタップして、すべてのハエが下部からアッセイを開始するようにします。10秒間にわたって飛行運動を観察します。
4. この時間内に5cmラインに到達または通過したハエの数と、テストしたハエの総数を記録します。各試行の間に 1 分間待って、プロトコルを繰り返し、1 行あたり少なくとも 3 回の試行反復を行います。
   注 本研究では、各バイアルには、初期スクリーニング用のハエ2匹から19匹(オスのハエ)と、交配したメス系統の突然変異欠損症分析用のハエ6匹から21匹が含まれていました。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
VWR®ショウジョウバエバイアル;狭い	VWR	75813-160
VWR®汎用ラボラベリングテープ	VWRの	89097から912
標準のマウスパッド
ステレオスコープ	動機		型番 SMZ-168
ショウジョウバエインキュベーター	VWRの	89510から750
Rソフトウェアパッケージ