Drosophila melanogasterの寿命プロトコル:ハエの寿命の違いを特定するための生存曲線の生成

要約

出典:Bovier, T. F., et al. Drosophila melanogasterの内分泌かく乱を試験する方法.J. Vis. Exp.(2019年)。

科学者は、ショウジョウバエの寿命プロトコルを使用して、さまざまな実験条件がハエの寿命にどのように影響するかを測定し、その過程で生存曲線を生成して実験結果を定量化します。このサンプルプロトコルは、17-α-エチニルエストラジオール(EE2)などのさまざまな濃度の内分泌かく乱化学物質(EDC)への曝露による寿命への影響を研究するために適用されるアッセイを特徴としています。

プロトコル

このプロトコルは、Bovier et al., Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019)からの抜粋です。

1. 食事の準備

1. ストックの維持と幼虫の成長のために、3%の粉末酵母、10%のスクロース、9%の調理済みコーンミール、0.4%の寒天を含むコーンミール培地を使用します。
   1. 水道水100mLに酵母30gを入れ、沸騰させて15分煮沸します。
   2. これとは別に、調理済みのコーンミール90g、砂糖100g、寒天4gを水道水900mLによく混ぜます。
   3. 溶液を沸騰させ、火を弱め、連続的に攪拌しながら5分間調理します。
   4. 5分後、ホットイースト溶液を加え、さらに15分間煮ます。
   5. 熱源をオフにし、溶液を約60°Cまで冷まします。
   6. エタノールに5mL / Lの10%メチル4-ヒドロキシ安息香酸を加え、十分に混合して10分間放置します><。 注:高濃度の殺菌剤が幼虫にとって致命的である可能性があるため、4-ヒドロキシ安息香酸メチルの量には注意してください。
   7. 培地をバイアル/ボトルに....

結果

図1:寿命曲線。左側には、実験期間全体を通じて、処理群(培地 + EDC [0.05 mM EE2])と対照群(培地 + 溶媒)の両方について、3日ごとに死んだハエの数が記録された代表的な表が報告されています。各グループの平均寿命は、MATRIX SUM を使用して計算されています。製品;治療群は対照群と比較して平均寿命が短縮されました。右側には、EE2(0.05 mM)を含む培地またはコントロール用のエタノールのみを供給したオスのハエの典型的な生存曲線が示されています。生存曲線は、対照群よりも治療されたハエの方が急速に減少し、転回点が早かった。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

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材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
17α-エチニルエストラジオール	シグマ	E4876-1Gの
ショウジョウバエ培地の寒天	バイオシグマ	789148
コーンミール	カ・ビアンカ
ショウジョウバエバイアル	バイオシグマ	789008	25 mm x 95 mm
ショウジョウバエバイアル	バイオシグマ	789009	29 mm x 95 mm
ショウジョウバエバイアル	カルテック	187	22 mm x 63 mm
エタノール	フルカ	2860
ガラス瓶			250 mL
ガラスバイアル	マイクロテック	STの10024	平底チューブ 100 x 24
インスタントサクセス酵母	エスカ		粉末酵母
メチル4-ヒドロキシ安息香酸	シグマ	H5501-J
LEDライト付き実体顕微鏡	ライカ		S4Eの
蔗糖	ハイメディア	MB025
ハンドブレンダーピミー	アリエテ		フードプロセッサー

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