摂食試験:ショウジョウバエの摂食嗜好の評価

要約

出典:Bovier, T. F., et al. Drosophila melanogasterの内分泌かく乱を試験する方法.J. Vis. Exp.(2019年)。

このビデオでは、ショウジョウバエの給餌アッセイについて、着色食品を使用して摂食を監視し、添加された化合物が摂食活動に及ぼす影響について説明しています。この例のプロトコルは、いくつかの内分泌かく乱化学物質(EDC)の影響をテストします。

プロトコル

このプロトコルは、Bovier et al., Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019)からの抜粋です。

1. フィーディングアッセイ

注:このアッセイは、培地中の選択されたEDCの存在がハエの摂食に影響を与える可能性があるかどうかをテストするために推奨されます。

1. 選択したEDCと着色食品の異なる濃度を補給したコーンミール培地(CM)を含むバイアルに15匹の若いハエを入れます。ハエがメディアを1日間食べるのを許します.
   注:例えば、赤色色素No.40(1 mg/mL)を使用します。
2. 15匹の若いハエを、溶媒のみを補充したCMと防除用の着色食品を添加したバイアルに入れます。ハエがメディアを1日間食べるのを許可します。
3. ハエの各グループを個別にエーテルで麻酔します。
   1. 各グループのハエを、漏斗が開放端に挿入された円筒形のガラス容器(エーテライザー)に移し、漏斗の上でバイアルを反転させ、2つの容器を一緒に軽くたたいてハエをエーテライザーに落下させます
      注:漏斗は彼らがエーテライザーから出るのを防ぎます。
   2. マウスパッドなどの柔らかい表面でエーテライザーを軽くたたくことでノックダウンし、漏斗をエーテルに浸した綿とガーゼプラグにすばやく交換します。
   3. ハエが底に落ちて動きを止めるまで約1分待ちます.
      注:時間を超えないとハエが死んでしまいます。
4. 固定されたハエを実体顕微鏡の下に置き、対照群に対して各治療群の腹部の色を比較します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
17α-エチニルエストラジオール	シグマ	E4876-1Gの
ショウジョウバエ培地の寒天	バイオシグマ	789148
ビスフェノールA	シグマ	239658から50G
ビスフェノールAF	シグマ	90477から100MG
コーンミール	カ・ビアンカ
ジエチルエーテル	シグマ
ショウジョウバエバイアル	バイオシグマ	789008	25 mm x 95 mm
ショウジョウバエバイアル	バイオシグマ	789009	29 mm x 95 mm
ショウジョウバエバイアル	カルテック	187	22 mm x 63 mm
エタノール	フルカ	2860
エーテライザー	工芸 品		綿栓付き円筒形ガラス容器
ハンドブレンダーピミー	アリエテ		フードプロセッサー
インスタントサクセス酵母	エスカ		粉末酵母
赤い染料 No.40	シグマ	16035
LEDライト付き実体顕微鏡	ライカ		S4Eの

名 名