出典:Diegelmann, S., et al. The CApillary FEeder Assayは、ショウジョウバエの食物摂取量を測定します。J. Vis. Exp.(2017年)。
このビデオでは、食物摂取量と無制限のショウジョウバエの好みを測定する行動法であるCApillary FEeder、またはCAFEアッセイについて説明しています。注目のプロトコルは、食品の送達とその摂取量の追跡に使用される液体充填キャピラリーからの蒸発を最小限に抑えてアッセイを実行する方法を示しています。
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方法論記事
キャピラリーFEeder(CAFE)アッセイ:ショウジョウバエの食物消費と好みを追跡する方法
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2023年4月30日
この記事について
要約
プロトコル
このプロトコルは、Diegelmann et al., The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2017)からの抜粋です。
1. CApillary FEederアッセイの組み立てと実施
- 絶食が不要な場合は、タッピングまたはブローパイプで実験フライをアッセイに移します。蒸発を定量化するために、ハエのないコントロールバイアルを3つ必ず含めてください。
- 外側の開口部の1つを塞いでいるピペットチップ(2〜20 μL容量)を慎重に取り外し、最初に充填されたガラスキャピラリーの下端を挿入します。ピペットチップをキャピラリーの隣に戻して、キャピラリーを固定します。複数の食品溶液がテストされている場合は、それに応じてこの手順を繰り返します。
- 食物源が異なる高さ(蓋から3 - 4 cm)に配置されている場合に発生する可能性のあるバイアスを避けるために、すべてのバイアルの内側に毛細管の端を同じレベルに置きます。濾紙までの距離を保ち、誤って濾紙または食品源の異なる粘度に触れて毛細管が漏れるのを防ぎます。
- マーカーペンを使用して、色付きの液体の上端にラベルを付けます(マークの先頭)。さまざまなキャピラリ....
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結果
図1:ショウジョウバエメラノガスターCApillary FEederアッセイ。A)ハエによる給餌アッセイ。湿らせた濾紙は、バイアルの底に水を供給します。実験中、4つの毛細血管が設けられます(反対側の毛細血管に赤と青の食品)。キャピラリーは2番目のピペットチップによって所定の位置に固定され、未使用の位置はピペットチップを使用して閉じられることに注意してください。フタの中央にある発泡スチロールのプラグで、空気の入れ替えが可能です。B)蓋の詳細図。カットされたピペットチップ(2〜20μL、赤い境界線)を未使用のポジションの円錐形の開口部に挿入し、2番目のピペットチップをカットチップに挿入して穴を閉じます。カットされたピペットチップはマイクロキャピラリーの配置を制御するために使用され、アンカットチップはキャピラリーをしっかりと保持するために使用されます。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| バイアル(育種) | グライナーバイオワン | 960177 | www.greinerbioone.com |
| バイアル(CAFEアッセイ) | グライナーバイオワン | 217101 | www.greinerbioone.com |
| Lid-CAFEアッセイ | 工房 | - | - |
| プラスチックボックス、低壁 | プラスタイム | 353 | www.plastime.it |
| プラスチックボックスのカバー | 工房 | - | - |
| 毛細血管 | ブラウブランド | Ref(リファレンス7087 07 | www.brand.de |
| ピペットのヒント | グライナーバイオワン | 771290 | www.greinerbioone.com |
| ろ紙サークル | ワットマン | 10 311 804 | www.sigmaaldrich.com |
| D(+)-ショ糖 | アプリケム | 57勝50敗1 | www.applichem.com |
| エタノールアブソリュート | VWRケミカルズ | 20,821,330 | www.vwr.com |
| 食用色素(赤、E124) | バックファン | 10027 | www.backfun.de |
| 食品着色料(青、E133) | バックファン | 10030 | www.backfun.de |
| 石鹸液(CVK8) | CVHの | 103220 | www.cvh.de |
| デジタルノギス | ギャラント | 412,616 | www.hoffmann-group.com |
| バイアル(育種) | 高さ9.8cm、直径4.8cm | ||
| バイアル(CAFEアッセイ) | 高さ8cm、直径3.3cm | ||
| Lid-CAFEアッセイ | 大学のワークショップで製造され、製図が提供されました このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。 | ||
| プラスチックボックス、低壁 | プラスチック製のグリッドインレイは、8 x 10バイアルの位置用にカスタムメイドされました | ||
| プラスチックボックスのカバー | 寸法(37 x 29 x 18 cm) | ||
| 毛細血管 | DIN ISO 7550規格、IVDガイドライン98/79 EG、端部は研磨済み | ||
| ピペットのヒント | 外側の円のピペットは、蓋に合わせてカットされています | ||
| ろ紙サークル | 直径45 mmは、使用するバイアル用に折りたたむとうまく機能します | ||
| D(+)-ショ糖 | 有害ではない | ||
| エタノールアブソリュート | 引火性の高い液体と蒸気 | ||
| 食用色素(赤、E124) | 記載されていません | ||
| 食品着色料(青、E133) | 記載されていません | ||
| 石鹸液(CVK8) | 臭い中性石鹸 | ||
| デジタルノギス | |||
| 標準的なフライフード | (20L用) | ||
| 寒天 | 160グラム | ||
| ビール酵母 | 299.33 グラム | ||
| コーンミール | 1,200グラム | ||
| 糖蜜 | 1.6リットル | ||
| プロピオン酸 | 57.3ミリリットル | ||
| ニパギン 30% | 160ミリリットル |
