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方法論記事

コロニー形成単位(CFU)の計数:ハエの体からの細菌の定量(英語)

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2023年4月30日

この記事について

要約

出典:Koyle, M. L., et al. Racing the Fruit Fly & Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic conditions.J. Vis. Exp.(2016年)。

>ショウジョウバエの微生物叢は、動物の発育、免疫、生理機能に影響を与えます。このビデオでは、全身の準備からコロニー形成単位を決定することにより、ハエから細菌を定量する方法について説明しています。注目のプロトコールは、4つの細菌種を使用してgnotobiotic条件下で飼育されたハエを用いた技術を示しています。

プロトコル

このプロトコルは、Koyleらの抜粋です。『Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions』、J. Vis. Exp.(2016年)。

1. 卵子のデコリオネートと無菌食への移行

  1. バイオセーフティキャビネットは、内部(側面を含む)に70%エタノールを噴霧して準備します。底面を実験用ティッシュで拭き、フードをUVライトで~15分間滅菌します。すべての非生物学的供給品(試料カップ、絵筆、鉗子、廃棄物容器、400mlの滅菌水、および100mlの0.6%次亜塩素酸ナトリウム)をエタノールを噴霧して滅菌し、すぐにバイオセーフティキャビネットに入れます。UVライトで15分間滅菌します。
  2. 2回の次亜塩素酸ナトリウム洗浄のうちの最初の洗浄を開始するには、卵と一緒にブッシングを120mlの試料カップまたは他の滅菌容器に入れます。0.6% 次亜塩素酸ナトリウム溶液を ~90 ml をブッシングにゆっくりと注ぎ、縁のすぐ下まで注ぎます。
  3. 卵を2.5分間すすぎ、鉗子を使用して次亜塩素酸溶液中でブッシュを上下に動かすことにより、卵を定期的に再懸濁します。
  4. ブッシングを、バイオセーフティキャビネット内の90 ml漂白剤をあらかじめ充填した2つ目の....

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結果

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
ビール酵母MPバイオメディカルズ、LLC。903312
グルコースシグマ・アルドリッチ158968-3キロ
寒天フィッシャー--ラボサイエンティフィックフライ802010
ウェルチの100%グレープジュースコンセントレートウォルマートまたはその他の食料品店9116196
ケージ:32オンス半透明ラウンドデリコンテナウェブスタウラントストア999L5032Y
半透明の丸いデリコンテナの蓋ウェブスタウラントストア999YNL500
ストックボトルジェネシー・サイエンティフィック32〜130
ショウソプラグジェネシー・サイエンティフィック49から101
ナイロンメッシュジェネシー・サイエンティフィック57〜102
プラスチックブッシングホームデポ100404002
プラスチックブッシングキャップホームデポ100153897
試料カップMedSupplyパートナーK01-207067
リピーターM4エッペンドルフ4982000322
50ml遠心分離管TrueLine遠心分離管TR2003
フードボックスUSAサイエンティフィック〒2316-5001
ライジングマトリックスDバルクMPバイオメディカルズ、LLC。116540434
フィルターピペットチップ、300 μlUSAサイエンティフィック〒1120-9810
ペトリ皿ラボラトリー製品販売M089303
エタノール株式会社デコンラボラトリーズ2701
絵筆ウォルマート5133
鉗子漁夫08-882
家庭用漂白剤(6-8%次亜塩素酸塩)ウォルマート550646751
ユニバーサルペプトンジェネシー・サイエンティフィック20〜260
酵母エキスフィッシャーサイエンティフィックBP1422-500
リン酸二カリウムシグマ・アルドリッチP3786-1KG
クエン酸アンモニウムシグマ・アルドリッチ25102-500グラム
酢酸ナトリウムVWRの97061から994
硫酸マグネシウムフィッシャーサイエンティフィックM63-500
硫酸マンガンシグマ・アルドリッチ10034-96-5
MRSパウダーシグマ・アルドリッチ69966から500G
96ウェルプレートリーダーBioTek(エポック)NAの
1.7ml遠心分離チューブUSAサイエンティフィック1615-5500
フィルターピペットチップ、1,000 μlUSAサイエンティフィック1122-1830
96ウェルプレートグライナーバイオワン655101
セラミックビーズMPバイオメディカルズ、LLC。〒6540-434
ティッシュホモジナイザーMPバイオメディカルズ、LLC。116004500
クラス1バイオセーフティキャビネットサーモサイエンティフィックモデル1395
名 名 の 年

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