このコンテンツを視聴するには、JoVE 購読が必要です。 サインイン又は無料トライアルを申し込む。

Abstract

出典:Trannoy, S., et al. Drosophila melanogasterの攻撃性と「敗者」効果を研究するための取り扱いを排除する新しいアプローチ。J. Vis. Exp.(2015年)。

攻撃性は生まれつきの行動であり、以前の戦闘経験はハエでの戦闘戦略とその後の競技結果に影響を与えます。このビデオでは、ショウジョウバエの攻撃的な行動を研究するために使用されるアッセイについて説明しています。この例のプロトコルは、ハエの取り扱いを排除し、したがって、被験者のパフォーマンスに影響を与えるであろう動物のストレスを軽減するセットアップで実行されるアッセイを特徴としています。

Protocol

このプロトコルは、Trannoy et al., A New Approach that Eliminate Handling for Studying Aggression and the “Loser” Effect in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015)からの抜粋です。

1. 行動実験

1. 生後6〜7日のオスのハエで行動実験を行います。
2. プラスチック製の仕切りを各戦闘室に挿入します。
3. アイソレーションチューブからコットンプラグを取り外し、装置の側面にある開いた穴の下にチューブを配置します。
4. ハエをネガティブジオタクシスによって、通常は数秒以内に戦闘室に入らせます。
5. フライがチューブを離れてチャンバーに入った後、スライドウォールを閉じます。
6. 手順を繰り返して、2番目のフライを装置の反対側のファイトチャンバーに導入します。
7. 装置を照明付きのビデオ撮影位置に戻します。
8. ビデオ録画を開始し、プラスチック製の仕切りを取り外して、ハエが相互作用できるようにします。
   1. アグレッション実験の場合:
      1. これらの実験では、強力な支配関係の形成を確実にするために、少なくとも20分間の戦いを記録します。
      2. 希望の時間が経過したら、ビデオ録画を停止します。
      3. 上記の手順を逆にして、戦闘室からハエを取り除きます。
      4. 行動装置は、使用するたびに中性洗剤と水で十分に洗い、すすいでください。
   2. 「敗者」効果実験の場合:
      注:これらの実験では、最初の戦いをコンディショニングフェーズとし、2番目の戦いをテストフェーズと見なします。試合と試合の間の休息時間は異なる場合がありますが、10分で強力な「敗者」効果を形成できます。
      1. 上記の手順に従って、最初の戦いを行います。
      2. 重要なステップ:「敗者」のメンタリティの形成を誘発するためには、強力な支配関係を確立するために、最初の戦いが少なくとも20分の長さであることを確認してください。20分後、プラスチック製の仕切りを戦闘室に再度挿入して、ハエを分離します。
      3. 10分間の休息の後、プラスチック製の仕切りをそっと取り外して、ハエが2回目の戦いで相互作用できるようにします。
      4. 2回目の20分間の戦いが終わったら、ビデオ録画を停止します。
      5. 上記のように行動室からハエを取り除きます。
      6. もう一度、行動装置を徹底的に清掃します。

Materials

Behavioral chambers	Mike machine		Fabricated in-house. Directly contact the company for more information.
Borosilicate glass vials	VWR International	47729-576	16 x 10 mm
Cotton	Fisherbrand	22-456-881	Any brand can be used
Srew cap tube	VWR International	10011-394	15 mm diameter, 10 mm height
Plastic slices	Electron Microscopy Sciences	70329-40	22 x 40 x 0.25 mm Thickness
Light source (bulb)	VWR International	500003-418	Any brand can be used
Timer	VWR International	62344-641	Any brand can be used
Binocular	Nikon	SMZ-745	Any brand can be used
Camera (SONY Handycam HDR-CX330)	B&H	SOHDRCX330B	Any brand can be used