局所熱プローブアッセイ:ショウジョウバエ幼虫の高温の侵害受容を評価する方法

要約

出典:Chattopadhyay, A., et al. ショウジョウバエの幼虫における熱侵害受容の評価方法。J. Vis. Exp.(2012年)。

ショウジョウバエの幼虫は、専用の感覚ニューロン(侵害受容器)を持っており、その反応が潜在的に有害な熱刺激に対する反応が、動物に嫌悪的、またはいわゆる「侵害的」行動を引き起こします。このビデオでは、キューティクルに熱プローブを局所的に適用した場合の幼虫の行動を記録することにより、熱侵害受容を評価する方法について説明します。したがって、この方法は局所熱プローブアッセイと呼ばれます。

プロトコル

このプロトコルは、Chattopadhyay et al., Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2012)からの抜粋です。

1. 局所熱プローブアッセイ

Pro-Dev Engineeringが製造した特注のサーマルプローブを使用して、個々の幼虫の体節に有害な熱刺激を照射します(材料の表を参照)。このプローブには最適な設計上の特徴(~.07 mm²の面積の小さな金属チップと、23 °Cから65 °Cの設定温度を正確に維持する能力)がありますが、原則として、定義された温度まで最大20秒間加熱できる小さなチップを備えたツールで十分です。プローブの先端は、腹部セグメントA4の背側正中線上で初期の3^番目の幼虫を正確に刺激するために使用されます(図1を参照)。この熱刺激に応答して、幼虫は一般に、横方向に360度以上転がる嫌悪的な引きこもり行動を示します。この行動は、一般に自発的な活動に短い一時停止を伴う、無害な室温の金属プローブに対する軽いタッチ反応とは異なります。

熱プロ....

結果

図1:局所熱プローブアッセイの実験セットアップ。熱プローブは、プローブの温度を設定および維持するために使用される熱制御ユニットによって制御されます。プローブは前後軸に対して垂直に保持され、水平に対して45°の角度で幼虫を刺激するために使用されます。プローブの接触は、図のように腹部セグメントA4で特別に行われます。ユーザーは、20秒のカットオフまで、またはローリング動作が始まるまで、この接触を穏やかな圧力で維持する必要があります。温度が有害であると認識されると、幼虫は少なくとも1回の360°ロールを特徴とする嫌悪的な離脱行動を示します。ロールの数は、1つまたは複数にすることができます(図2Bを参照)。この図の拡大版を表示するには、.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
サーマルプローブ	Pro-Devエンジニアリング	オンデマンドでカスタムビルド	連絡先情報はリクエストに応じて提供できます
ライカ DFC290 12V/400mA カラーカメラ	ライカマイクロシステムズ	12730080	同等のカメラなら何でもかまいません。
ライカ MZ6 顕微鏡	ライカマイクロシステムズ	MZ6ズーム本体(光学系キャリア)の品番は10445614
Schott Ace Modulamp ユニット	ショットAG	A20500(エー20500
ショットデュアルグースネック23インチ光ファイバーライトガイド	ショットAG	ショットA08575
サーマルコントロールユニット	TSCI株式会社	カスタムビルド	詳細はご要望に応じて提供できます
ツァイスステミ2000顕微鏡	カールツァイス株式会社	NT55-605	同等の顕微鏡であれば何でもかまいません。
鉗子	ファインサイエンスツール	FS-1670
絵筆	ブリックアートマテリアル	06762-1002
35 X 10 mmポリスチレンシャーレ	ファルコンBD	351008	代替料理のテストは行っておりません。
ビニール片	オフィスデポ	480009

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