温度勾配アッセイ:ショウジョウバエの幼虫の温度選好性を試験する方法

Abstract

出典:Liu, J., et al. ショウジョウバエの幼虫の熱的選好を決定するための温度勾配アッセイ。J. Vis. Exp.(2018年)。

ショウジョウバエは温度の小さな変化を区別できるため、好ましい温度条件の環境を選択できます。このビデオでは、ショウジョウバエの幼虫の温度選好を線形の温度勾配でテストする行動アッセイについて説明します。

Protocol

このプロトコルはLiuらからの抜粋です。A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2018).

1. 温度勾配の設定

1. 一方向のグラデーションを準備する
   1. アッセイ中に湿度の高い周囲環境を作り出すには、2つのウォーターバスに接続された2つのアルミニウムブロックを、10 cm離して濡れたペーパータオルの上に置きます(図1A)。
   2. アッセイを開始する~2時間前に2つのウォーターバスをオンにして、アルミニウムブロックの温度が平衡化するのに十分な時間を確保します。
      注:模擬実験を実施して、目的の線形温度勾配を達成するために必要な各ウォーターバスの温度を決定することをお勧めします。ウォーターバスを設定するための一般的な温度ペアを表1に示します。ただし、表面温度は周囲温度の影響を受けることに注意してください。チューブの長さも、チューブ内で冷却が行われるため、温度に影響します。私たちのセットアップのチューブの長さは1.5m....

Results

図1:単一および双方向のグラジエントアッセイのセットアップ。(A)2つのアルミニウムブロックに2つのアルミニウムアッセイプレートを使用した一方向グラジエントセットアップ。アルミブロックの温度は、2つのウォーターバスからの循環水によって制御されます。(B)3つのアルミニウムブロック、ウォーターバス、および双方向勾配のためのアルミニウムプレート(250 x 220 mm)の配置。左右のブロックは同じウォーターバスに接続され、中央のブロックは他のウォーターバスに接続されています。アルミニウムアッセイプレートをテープで包み、10 mmの壁を形成して1%アガロースを封じ込めます。(C)プレート上の温度をチェックし、幼虫を放流する位置(ドットで示されています)。実験を開始する前に、各ゾーン内の2つのポイントで温度を確認し、目的の線形温度勾配が確立さ.......

Materials