Egg Laying Assay: A Method to Quantify the Egg-Laying Behavior of <em>C. elegans</em>

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Research Article

産卵アッセイ:C.エレガンスの産卵行動を定量化する方法

April 30, 2023

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>C. elegans 産卵行動は、発生研究、生殖研究、および解剖学的研究において重要な情報を提供します。このビデオでは、産卵アッセイの重要なステップを紹介し、薬物の生殖毒性をテストするサンプル実験を示しています。

1. C. elegans 産卵アッセイ

DMSOまたはエトポシドを含むNGMプレート上で、年齢同期卵子を64時間(初回出生前)インキュベートし、若年成人期が20°Cになるまで
注:成長測定実験で得られた線虫の使用は任意です。成長測定と産卵アッセイを一緒に行うと便利です。
成虫5匹を薬品を含まない新しいNGMプレート(条件1、一定期間内の化学処理、卵子から若成体期まで)または同じ薬品前処理を含む新しいNGMプレート(条件2、実験期間全体を通じて化学物質の連続暴露)に移し、24時間
注:各処理で3〜5枚のNGMプレートを使用して反復を行うことをお勧めします。これらの反復は、統計分析に使用できます。
上記のように新しいNGMプレートに移し、毎日卵の数を数えます。這いずり落ちて死に、内部で孵化したワームを数えます。
ワームが卵を産まなくなるまで、通常は5日でこれらの手順を繰り返します。
各プレートからワームごとに産む卵の数を計算し、これらの値を5日間毎日合計して、産む卵の総数を決定します。
注: 這いずり出して内部で孵化したワームの数を計算から除外します。

Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		ワイルドタイプ
ジメチルスルホキシド	Sigma, アメリカ	D2650
大腸菌OP50	カエノーラブディティス遺伝学センター(CGC)
エトポサイド	Sigma, アメリカ	E1383
35 × 10 mm シャーレ	SPL Life Sciences、韓国	10035
実体顕微鏡	Nikon, 日本	SMZ800N

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