産卵アッセイ:C.エレガンスの産卵行動を定量化する方法

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Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>C. elegans 産卵行動は、発生研究、生殖研究、および解剖学的研究において重要な情報を提供します。このビデオでは、産卵アッセイの重要なステップを紹介し、薬物の生殖毒性をテストするサンプル実験を示しています。

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. C. elegans 産卵アッセイ

DMSOまたはエトポシドを含むNGMプレート上で、年齢同期卵子を64時間(初回出生前)インキュベートし、若年成人期が20°Cになるまで
注:成長測定実験で得られた線虫の使用は任意です。成長測定と産卵アッセイを一緒に行うと便利です。
成虫5匹を薬品を含まない新しいNGMプレート(条件1、一定期間内の化学処理、卵子から若成体期まで)または同じ薬品前処理を含む新しいNGMプレート(条件2、実験期間全体を通じて化学物質の連続暴露)に移し、24時間
注:各処理で3〜5枚のNGMプレートを使用して反復を行うことをお勧めします。これらの反復は、統計分析に使用できます。
上記のように新しいNGMプレートに移し、毎日卵の数を数えます。這いずり落ちて死に、内部で孵化したワームを数えます。
ワームが卵を産まなくなるまで、通常は5日でこれらの手順を繰り返します。
各プレートからワームごとに産む卵の数を計算し、これらの値を5日間毎日合計して、産む卵の総数を決定します。
注: 這いずり出して内部で孵化したワームの数を計算から除外します。

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Materials

List of materials used in this article

Name

Company

Catalog Number

Comments

Caenorhabditis elegans N2

Caenorhabditis Genetics Center (CGC)

ワイルドタイプ

ジメチルスルホキシド

Sigma, アメリカ

D2650

大腸菌OP50

カエノーラブディティス遺伝学センター(CGC)

エトポサイド

Sigma, アメリカ

E1383

35 × 10 mm シャーレ

SPL Life Sciences、韓国

10035

実体顕微鏡

Nikon, 日本

SMZ800N

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