C.エレガンス割球解剖:卵殻を取り出して胚細胞を解離する方法

Abstract

出典:Hsu, C. R., et al.単離された線虫Caenorhabditis elegans胚割球および接着性ポリスチレンビーズによる空間的細胞接触パターンのin vitro再構成。J. Vis. Exp.(2019年)。

このビデオでは、初期胚からC.エレガンス割球を単離する方法を紹介しています。得られた細胞は、細胞培養やex vivo実験に適しています。

Protocol

このプロトコルは、Hsu et al, 単離された線虫胚割球と接着性ポリスチレンビーズによる空間的細胞接触パターンのIn Vitro再構成からの抜粋です。(2019年)。

1. 胚割球の単離
2. 手袋と白衣を着用して、漂白液との切断や接触を避けてください。
   1. マイクロキャピラリー(容量;10μL)の両端を右手と左手で持ちます。
   2. マイクロキャピラリーを両端に向かって引っ張って張力をかけ、キャピラリーの中心をバーナーの上に持ってきて、手で引っ張る2つのキャピラリーを作成します(図1A)。
   3. 手で引っ張った毛細血管の先端を解剖顕微鏡で鉗子で切り取り、引っ張った毛細血管をマウスピペッティング装置に取り付けます。ピペットは2種類ご用意ください。ピペットの先端開口部のサイズは、胚移植と卵殻除去のために、それぞれC.エレガンス胚の短軸の長さ(30μm)の約2倍と1倍である必要があります(図1B-D)。
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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
アスピレーターチューブアセンブリ	ドラモンド	21-180-13	割球単離用。
Caenorhabditis elegans strains:N2、野生型	カエノーラブディティス遺伝学センター	N2	この研究で使用したひずみ
Caenorhabditis elegans strains:KSG5、遺伝子型:zuIs45;itIs37	社内で	KSG5	この研究で使用したひずみ
キャリブレーション済みミルコピペット、10 μL	ドラモンド	21勝180敗13	割球単離用
CDリピッドコンセントレート	ライフテクノロジー	11905031	割球分離用。組織培養フードで作業します。
クロロックス	クロロックス	N.A.(ナウエイト)	割球分離用。次亜塩素酸塩処理がうまく機能しない場合は、新しいボトルを開けてください。
カバースリップホルダー	社内	N.A.	割球分離用。
解剖顕微鏡:Zeiss Stemi 508、Mスタンド付き。光源はLED内蔵。接眼レンズの倍率は10倍です。	カールツァイス	ステミ508	割球分離用。
ウシ胎児血清、適格ワンショット、カナダ原産	ギブコ	A3160701	割球分離用。組織培養フードで作業します。
一般使用および精密グライド皮下注射針、25ゲージ	BDの	14-826AA	割球単離用
イヌリン	アルファ・アエサル	AAA1842509	割球単離用
MEMビタミン液(100x)	ギブコ	11120052	割球分離用。
マルチテストスライド10ウェル	MPバイオメディカル	ICN6041805	割球単離用
ペニシリン-ストレプトマイシン (10,000 U/mL)	ギブコ	15140148	割球分離用。
ポリビニルピロリドン	フィッシャーバイオ試薬	BP431-100	割球単離用
塩化カリウム	バイオショップ	POC888	割球単離用
シュナイダーのショウジョウバエ滅菌ミディアム	ギブコ	21720024	割球分離用。組織培養フードで作業します。
塩化ナトリウム	バイオショップ	SOD001	割球単離用
水酸化ナトリウム溶液、10 N	フィッシャーケミカル	SS255-1	割球単離用
シリンジフィルター、PTFE、非滅菌	バシックス	13100115	割球分離用。
Tygon S3 ラボ用チューブ、配合 E-3603、内径 3.175 mm	サンゴバン・パフォーマンス・プラスチックス	89403-862	割球分離用。
Tygon S3 ラボ用チューブ、配合 E-3603、内径 6.35 mm	サンゴバン・パフォーマンス・プラスチックス	89403-854	割球分離用。