明暗選好テスト:ゼブラフィッシュの不安関連行動を研究する方法

要約

出典:Holcombe, A., et al.複数のゼブラフィッシュ(Danio rerio)への薬物投与と離脱の定量化の新規方法。J. Vis. Exp.(2014年)

このビデオでは、エタノール曝露後のゼブラフィッシュの不安関連行動を研究するための明暗選好アッセイについて説明しています。

プロトコル

1. ビヘイビアテスト

1. 幅9.5 cm、長さ55 cm、奥行き9.5 cmの明るい/暗いアリーナと白い防水床を取得します(図1B)。アリーナの内壁に白と黒の防水無反射紙をベルクロで貼り付け、アリーナの半分を白で、半分を黒で覆います。アリーナを5cmの深さまで、25〜28°Cの温度で生息地の水で満たします。テスト中はこの温度を維持します。
2. アリーナが配置される白い3面の囲いを構築することにより、外部の視覚刺激を最小限に抑えます。テストエリアには、水面での反射を引き起こさない拡散オーバーヘッド照明があり、動き追跡ソフトウェアやビデオ画像からの事後手動定量化に十分な明るさがあることを確認します。
3. アリーナをエンクロージャーに配置し、行動追跡ソフトウェアの記録および動き分析パラメーターを設定します。研究課題に応じて、試用期間を5〜15分に設定します.
   注:ここでは、5分を使用しました。
4. テストする魚のグループを生息地タンク内の研究エリアに運び、アリーナの囲いの外に置きます。魚を10分間順応させます。
5. 適切なグループから魚をそっと網にかけ、ライト/ダークアリーナの中央に置き、アリーナの長軸に平行に配置されたときに魚をリリースして、魚がライトゾーンまたはダークゾーンに偏らないようにします。
6. 動物が解放された直後に行動の記録を開始します。魚の追跡や魚のジャンプや凍結に関するソフトウェアの問題に注意してください。被験者の半数がテストされた後、アリーナを180°回転させて、アリーナの端がエンクロージャの開放端に向けられる偏りによる混乱を防ぎます。
7. トライアルが終了したら、魚をアリーナからそっと網で囲み、保持タンクまたは生息地タンクに移します。

2. 分析

1. 明るいゾーンと暗いゾーンで費やした時間を調べます。各グループおよび各魚について、ライトゾーンとダークゾーンで費やされた相対時間を取得し、1つのサンプルt検定(またはノンパラメトリックデータのWilcoxon符号順位検定、(合計試行時間の半分)との差150秒)を使用して分析し、グループが一方のエリアを他方よりも有意に好むかどうかを判断します。
2. 選好を比較するには、ダークゾーンで費やした時間からライトゾーンで費やした時間を差し引いて選好指数を計算し、グループ間の違いを比較します。t検定を使用して2つのグループを比較できます。必要に応じて、テューキーのHSDポストホック検定(またはノンパラメトリックデータのダンの多重比較ポストホック検定を使用したクラスカル・ウォリス検定)を使用して、一元配置分散分析で複数のグループを比較します。
3. グループ間で速度、ゾーン遷移の数、蛇行、不動性を比較します。必要に応じて、テューキーのHSDポストホック検定(またはノンパラメトリックデータに対するダンの多重比較ポストホック検定によるクラスカルウォリス検定)を利用した一元配置分散分析を使用します。

結果

図1:転送手順とライト/ダークアリーナ。 (A)まず、魚は移送水槽(左)に置かれています。(B-C)魚を移送タンクからエタノール溶液に移動するには、研究者が産卵インサートを移送タンクから持ち上げてエタノール溶液タンクに入れる必要があります。 (D)図示されているように、明るい/暗いアリーナは、幅9.5cm、奥行き9.5cm、長さ55cmでした。白い床と、アリーナの半分(左)に黒い壁、残りの半分に白い壁が使われ、明るいゾーンと暗いゾーンを作り出しています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ライト/ダークアリーナ	習慣		手順の説明に従って構築します。幅9.5 cm、奥行き9.5 cm、長さ55 cm。
3段ベンチトップハウジングシステム	水生生物の生息地	該当なし
1.5L 産卵タンク 400μmバッフル付	水生生物の生息地	該当なし
Ethovision XT モーショントラッキングソフトウェア	ノルダス情報技術
ピュアグレインエタノール	ルクスコ、INC	該当なし