ゼブラフィッシュの回避とチグモタキシスアッセイ:嫌悪的な視覚刺激に応答した幼虫の行動を調べるためのハイスループット法

要約

出典:Richendrfer, H., et al.ゼブラフィッシュの幼生における自動ハイスループット行動解析。J. Vis. Exp.(2013年)

このビデオでは、ゼブラフィッシュの幼生の回避とチグモタキシスアッセイについて説明しています。このビデオでは、視覚嫌悪刺激に反応したゼブラフィッシュの幼生の行動を調べています。

プロトコル

1.画像キャプチャ

1. プレートの各レーンに最大20匹の幼虫を配置できます。通常、レーンごとに5匹の幼虫は、遊泳速度の最も正確な追跡を容易にし、実験ごとに必要な幼虫の数を減らすために使用されます。レーンは、実験に応じて、医薬品や毒物の有無にかかわらず卵水で満たすことができます。ただし、レーンはイメージングキャビネットに配置されるまで完全に埋めないでください。これにより、オーバーフローを防ぐことができます。一貫性を保つために、幼虫は、アガロース型に入れられ、ラップトップ画面の上部に配置されてから10分間の順応期間を持つ必要があります。幼虫をペトリ皿からアガロースレーンに効率的に移動させることで、幼虫のストレスを軽減することができます。これは、幼虫が浅いタンクまたはシャーレに収容されている場合に最も簡単です。
2. イメージングキャビネットには、タイムラプス撮影に使用されるキヤノンのデジタルカメラとラップトップが含まれています。カメラはキャビネットの上部に配置し、15.6インチ画面のノートパソコンを画面を上に向けて配置するキャビネットの下部に向けます(図1)。4つのプレートは、ラップトップ画面の真上に手で直接配置する必要があります。この時点で、レーンの上部と同じ高さになるように、レーンに卵水または化学処理をトッピングできます(画像内のレーンの端の影をなくすため)。
3. PowerPointプレゼンテーションは、幼虫の嫌悪刺激として使用されます。過去には、6枚または12枚のマルチウェルプレートでゼブラフィッシュの幼生に動く赤いボールが示されました。現在のPowerPointは、空白の白い背景で15分間始まり、プレートの上半分に赤いバーが15分間移動します(図2)。幼虫の過熱を解消するには、画面温度が28°Cを超えないラップトップを購入するのが最善です。アガロースレーン内の液体の蒸発を避けるために、イメージングの最大時間を1時間未満に保つ必要があります。
4. デジタルカメラはタイムラプス撮影用にプログラムし、6秒ごとに写真を撮り、実験ごとに合計300枚の画像を撮影する必要があります。ただし、頻度と長さは、実験や行動の定量化に応じて調整できます。これまでは、各画像間の間隔を長くして、イメージング時間を延長することが採用されていました。カメラを低解像度に設定して、ビデオ速度(30フレーム/秒)でイメージングできます。解像度が低いと、録画が1つのマルチウェルプレートに制限されますが、ビデオ録画は急速な遊泳イベントのイメージングに適しています。

結果

図 1.イメージングキャビネット。イメージングキャビネットは、私たちの研究室で特別に作られ、ハイスループットな行動分析に使用されました。15メガピクセルのデジタルカメラがキャビネットの上部に下向きに取り付けられ、ラップトップの画面上部に配置されたマルチレーンプレートに幼虫のタイムラプス画像が収集されました。プレートとスクリーンの間には、収集された画像のモアレパターンを防ぐために使用されるプラスチック製のディフューザーがあります。

図 2.空白の背景と PowerPoint の嫌悪感刺激。これは、ゼブラフィッシュの幼生の行動変化を呼び起こすために使用される現在の PowerPoint...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
イメージングキャビネット	ウッドクラフトタワーズ
アガロース	漁夫	BP1356-100
デジカメ	キヤノンEOS	反乱軍T1i
ラップトップ	エイサーアスパイア		15.6インチである限り、どれでも良いです。1366 x 768ピクセルの解像度と220 cd / m2の明るさのLCDスクリーン。
1ウェルプレート	漁夫	12-565-493
PowerPoint 2010	マイクロソフト
プラスチックディフューザー	ペンダフレックス	52345

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