アグレッションアッセイ:鏡に反応したゼブラフィッシュの攻撃的な行動を研究する方法

Abstract

出典:Way G.P., et al. ゼブラフィッシュ行動症候群に対する大胆さ、攻撃性、浅瀬のアッセイ。J. Vis. Exp.(2016年)

この記事は、ゼブラフィッシュの攻撃性を研究するためのアッセイについて説明しています。この手法は、単純な鏡を用いて、鏡に映る自身の行動に対するゼブラフィッシュの行動反応を観察するものです。

Protocol

1. アグレッションアッセイの実施

1. 30 cm x 15 cm x 10 cmの19 L長方形タンクでアグレッションアッセイを実施します。アグレッションタンクの3つの側面を囲む外部の不透明なパーティションにタンクを装備し、前面を露出させて表示し、望ましくない外部刺激を減らします。外部マーキングのあるタンクを4つの等しい長方形の象限に分割し、タンクの左端に対して直角三角形を形成する22.5°に傾斜した左下の象限内にミラーを恒久的に(シリコンコーキングで)固定します。
2. 順応タンクとアグレッションタンクの水の温度がハウジングラックから2°C以内であることを確認してください。そのためには、27.5〜28.5°Cにあらかじめ温めた新鮮な熟成水をアグレッションタンクに追加する準備をします。手記：不当な嗅覚の手がかりを排除するために、各アッセイの間に水を交換することが重要です。
3. カッピングにより、焦点となる魚をハウジングラックから別の順応タンクに移し、10分間順応させます
   手記：不適切な取り扱いによって魚に導入される刺激を減らすことが重要です。前述のように、個人を転送します。具体的には、小さな透明なプラスチックカップを目的のタンクに手動で慎重に入れます。網を使って移すほど魚を乱さずに、ゆっくりと魚をカップにすくい上げます。
4. ビデオカメラが録画する準備ができていることを確認し、アグレッションアッセイタンク(ステップ1.1を参照)にピントが合っていることを確認し、個人をアグレッションタンクに移す直前に、デバイスの録画を押します。カッピングを介して馴化タンクからアグレッションタンクに焦点魚を移します.
   手記：魚がアグレッションタンクに入る前に記録して、正確な侵入時間を追跡することが重要です。
5. アグレッションタンクを10分30秒間記録し、アグレッションタンクから焦点の魚を順化タンクに戻します。
6. 録画を見るときは、魚が追加の順応期間として水槽に導入されてから30秒待ってから、行動をスコアリングします。
7. 攻撃的な行動のために定義されたJWatcherスコアリングシステムを使用して、次の行動を10分間定量化します:ミラーの近くで過ごした時間、ミラーアプローチの数、ダーツの数、噛み合わせの試みの数(ミラーの方向に口を開く)、および側面ディスプレイの数(背側、胸筋、肛門、尾びれの勃起)。
8. 1 つのアグレッションアッセイを少なくとも 2 回スコアリングし、反復間でアッセイの一致度が高くなるまで
スコアを付けます。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
19 L 長方形タンク	あの魚の場所	211932
ArtMindsスクエアミラー、バリューパック3 "x 3"	マイケルズ	10334162
ゼブラフィッシュラックシステム	アクアニアリング株式会社	ZS550
Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s MACRO レンズ	株式会社ニコン	NAの
日立 KP-D20A CCDカメラ	プレスコット株式会社	NAの
Jウォッチャー	NAの	NAの