成体ゼブラフィッシュの電気生理学:in vivoでのニューロンの細胞外電気活性を測定する方法

要約

出典:Johnston, L., et al.無傷の成体ゼブラフィッシュの脳内の電気生理学的記録。J. Vis. Exp. (2013年度)

このプロトコルは、成魚のゼブラフィッシュで電気生理学を行う手順を説明しています。この方法は、in vivoでの神経活動の測定に使用できます。

プロトコル

1. 電気生理学

1. 挿管ストップコックを止め、挿管ベースとトリカイン点滴をつないでいるルアーロックをすばやく外します。
   1. 無傷の挿管セットアップを電気生理学顕微鏡に移し、灌流システムに接続します。
   2. 生息地の水をオンにし、トリカインを洗い流すために、1 ml /分の速度で~1時間灌流します。
2. 目視制御下のマイクロマニピュレーターを使用して、電極の先端を動物の鼻孔または上顎の後ろのくぼみに挿入できるように二次電極を配置します。
3. 一次電極針を開頭術の開口部に挿入します。針を組織に挿入し、先端が視蓋内のかなり表面的な位置に配置されるようにします。
   1. 電極が深すぎると、電気信号が小さくなる可能性があります。
4. 一次参照電極と二次参照電極の間に記録された電気的差を収集して分析します。このプロセスにより、細胞外記録を取得することができます。
   1. ギャップフリー・モードで、0.1 kHz のローパス・フィルターと 1 Hz のハイパス・フィルターを使用して、5 kHz のサンプル・レートでデータを収集します。
   2. 生息地の水が最低45分間灌流されるまで、電気生理学的活動の記録を開始しないでください。
   3. 実験薬を追加する前の少なくとも 15 分間、ネイティブ活動のベースラインを記録します。選択した実験薬で灌流を開始し、希望の時間だけ記録します。健康な製剤では、神経学的活動を2〜3時間記録することが可能です。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
生息地の水			pH 7.0-7.4、導電率400-450 μS; Instant Ocean and によって管理されています 炭酸水素ナトリウム
0.4% トリスバッファードトリカイン	シグマ・アルドリッチ	E10521	pH 7.2-7.4; -20°Cで保存
60 ml ルアーロックシリンジチューブ	ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー	309653
ルアー接続付き3ウェイストップコック
0.010 銀線	A-Mシステムズ株式会社
Qシリーズ電極ホルダー
フィッシャーブランド 100 mm x 15 mm シャーレ	フィッシャーサイエンティフィック	NC9299146
34 G 斜めの針	ワールド・プレシジョン・インスツルメンツ(株)	NF34BV
37 cm x 42 cm キムウィップ	キンバリー・クラーク・プロフェッショナル	TW31KEM
直径1/8チューブ
直径1mmのチューブ
マイクロスコープ(ライカMZ APO)	別の顕微鏡を使用できます

の