腹腔内注射:成体ゼブラフィッシュの腹腔内への溶液送達法

要約

出典:Luukinen, H., et al.Mycobacterium marinum感染成体ゼブラフィッシュの結核のモデリング。 J. Vis. Exp.(2018年)。

このビデオでは、ゼブラフィッシュの成魚の腹腔内に溶液を送達する方法である腹腔内注射の技術について説明しています。

プロトコル

1. 腹腔内注射によるM. marinumの実験的感染

1. 希釈した細菌溶液の5μLの液滴をパラフィルムフィルムにピペットで移し、液滴を30Gのインスリン針に引き込みます。
2. 実験には、生後5〜8か月の野生型魚とrag1-/-hu1999変異魚を使用してください。成魚のゼブラフィッシュを水槽水で0.02%3-アミノ安息香酸エチルエステル(pH 7.0)で麻酔します。魚の腹側を上にして、湿った発泡プラスチックのスリットに配置します。
   注:ラグ/-突然変異魚は、体細胞組換えを受けることができず、機能的なT細胞とB細胞を産生することができません。
3. 骨盤のひれの間に針を約45°の角度で注入します。針を上向きに開いたままにして、開口部全体が腹腔内にあることを確認します。細菌懸濁液をゆっくりと注入し、針を慎重に取り外します.
   手記：注射時に赤いトレーサーが魚から漏れている場合は、実験から魚を除外してください。
4. 注入後すぐに、魚を新鮮な水槽の水が入った回収タンクに移します。
5. 使用中の細菌アリコートから15分ごとに7H10プレート上の細菌懸濁液のサンプルを採取し、細菌を29°Cで5日間インキュベートし、プレート上のコロニーをカウントして感染量を確認します。
6. 魚の健康状態を定期的にチェックし、感染の症状がある魚は0.02%を超える濃度の3-アミノ安息香酸エチルエステル(pH 7.0)で安楽死させます
   手記：34 CFU ± 15 CFU に感染した成魚の 7% と、2029 CFU ± 709 CFU に感染したゼブラフィッシュの成魚の約 7% が 8 週間までに症状を呈します。症状には、異常な水泳、触覚に対する反応の欠如、あえぎ、浮腫、または観察可能な消耗が含まれる場合があります。
7. ゼブラフィッシュは共通の基準に従って維持します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
マイコバクテリウム・マリナム	アメリカンタイプカルチャーコレクション	ATCC 927
フェノールレッド	シグマ・アルドリッチ	P3532
リン酸緩衝生理食塩水錠剤(PBS)	シグマ・アルドリッチ	P4417-50TAB
ミドルブロック7H10寒天	BD、サーモフィッシャーサイエンティフィック	11799042
3-アミノ安息香酸エチルエステル(pH 7.0)	シグマ・アルドリッチ	A5040 (英語)
Omnican 100 30 Gインスリン針	ブラウン	9151133
1 mLシリンジ	ヘンケ・サス・ウルフ	4010.200V0