zPDX-侵襲性の解析:ゼブラフィッシュ胚異種移植片における転移性がん細胞の侵襲性挙動の調査

要約

出典:Ren, J. et al.胚ゼブラフィッシュにおけるヒト乳がん細胞の侵襲的挙動。J. Vis. Exp. (2017).

このビデオでは、トランスジェニックゼブラフィッシュ胚の周辺領域への乳がん細胞送達のためのマイクロインジェクション方法を説明しています。インキュベーション後、蛍光顕微鏡で胚を可視化し、がん細胞の浸潤、播種、転移を観察します。

プロトコル

1. 転移過程の画像化と解析

1. 先端の広いパスツールピペットで麻酔をかけたいくつかの胚を採取し、ポリスチレン皿のガラス底に移します。
2. 余分な水分を取り除き、卵の水分を限られた量に保ちます。ヘアループツールで胚を所定の位置に操作し、ガラスの上にカバーを置きます。
3. 倒立共焦点顕微鏡は、水浸対物レンズまたは長距離乾燥対物レンズと組み合わせて使用します。関心領域ができるだけ目的に近づくように胚を配置します。
4. 麻酔後すぐに画像診断を行い、液体の蒸発による死亡リスクを減らします。
   1. 胚上の同じ位置にあるEGFP標識血管系細胞とmCherry標識腫瘍細胞からのシグナルを捕捉し、2つのイメージングチャネルを融合させることにより、注入した細胞を血管に共登録します。
   2. ゼブラフィッシュの胚ごとに、頭部領域と尾部領域から2つの異なる画像セットを収集します。
5. 播種した細胞の数を定量化します。
   1. ペリビテリン腔注射の場合、頭部および尾部領域4,15内の細胞塊から胚性魚体に向けて播種した各魚の細胞の数を数える;領域は、正面的には心臓腔の境界を越え、背側は水泳膀胱の上部にあり、尾側は泌尿生殖器開口部を超えている。
   2. Doc注射については、循環から尾びれのコラーゲン繊維に侵入した個々の細胞の数(MDA−MB-231)ま....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ワイドチップパスツールピペット(0.5-20μL)	エッペンドルフ	F276456I
共焦点顕微鏡	ライカ	SP5 STED
実体顕微鏡	ライカ	MZ16FA
Tg(fli:EGFP)ゼブラフィッシュ株			Ewa SnaarJagalska博士(ライデン大学生物学研究所、オランダ、ライデン)
ガラス底のポリスチレン皿	ウィルコ	GWST-5040
蛍光実体顕微鏡	ライカ	M165 FC
トリカイン(3-アミノ安息香酸)	シグマアルドリッチ	A-5040

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