ウサギの乳管内注射:ウサギの乳腺への目的の溶液の局所的な送達

要約

出典:Clark et al., Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland. J. Vis. Exp. (2017).

このビデオでは、ウサギの乳管に目的の溶液を投与する技術について説明し、造影剤の高解像度超音波イメージングによって送達を確認します。

プロトコル

1. 術前準備

1. 各ウサギの体重を記録します。すべての前臨床試験と同様に、動物の体重を定期的に監視して、潜在的な毒性を評価します。
2. ウサギに麻酔をかける前に、市販の超音波ゲルで50mLの円錐管を満たし、500×gで30秒間回転させる;遠心分離の完了時にゲル内に目に見える気泡がないこと。
3. グリコピロレートを0.1 mg / kgの用量で皮下投与し、アセプロマジンを0.75 mg / kgの用量で筋肉内投与します。.バイタルサインと行動を監視しながら、鎮静剤が効くまで15〜20分待ちます
   手記：グリコピロレートは、徐脈を予防し、呼吸器および消化管の分泌を減少させる抗コリン作用薬です。アセプロマジンは、麻酔の前薬として機能する鎮静剤です。
4. 麻酔薬として35 mg / kgのケタミンと5 mg / kgのキシラジンを皮下投与します。.ただし、オペレーターが経験を積み、より迅速に管内送達を達成できるようになると、薬物投与量をケタミンの15 mg / kgとキシラジンの皮下投与量を3 mg / kgに減らします。これにより、麻酔時間が短縮され、動物が麻酔から回復するまでの時間が短縮されます。
5. 心拍数、SPO_2、体温、呼吸数、および粘膜の色を15分ごとに確認し、文書化します。両目に眼の潤滑剤を塗布します。
   手記：適切なトレーニングを受け、所属機関のIACUCによって承認された人員のみが麻酔を投与または監視する必要があります。獣医用麻酔モニターの使用は、バイタルサインの獲得に役立つため、推奨されます。しかし、獣医用麻酔モニターは、15分ごとに動物を手動でチェックする必要性に取って代わるものではありません。獣医用モニターの適切な使用については、製造元の指示を参照してください。
6. つま先を優しくつまんで麻酔の開始を確認します;ウサギは続行する前に反応しないはずです。
7. 鼠径乳頭の3番目と4番目のペアの周りの領域でウサギの尾腹部を慎重に剃ります。
8. 髪の毛の大部分を取り除いたら、剃った部分に市販の脱毛クリームを塗ります。広告を使用して塗布後10分でクリームを取り除きますamp ぬるま湯で濡らしたペーパータオル.
   手記：ウサギの肌は非常に壊れやすい/敏感です。脱毛クリームは10分以内に使用する必要があります。実際、5分で「テストスポット」を試し、テストスポットがもっと長い時間が必要であることを示している場合にのみ、より長く放置する方が安全です。
9. アルコールに浸したガーゼパッドでその部分を拭き、注射部位を清掃します。
10. ウサギを背部に置き、再循環式温水ブランケットと吸収パッドで裏打ちされたV字型のトラフに置きます。

2. 造影剤の調製

1. ノンターゲット造影剤をメーカーの指示に従って再構成します。ピペットを上下にやさしく動かして混ぜます.
   手記：このプロトコールで使用される造影剤は、再構成後4〜6時間室温で安定です。各回収の間にバイアルを静かに揺らします.
   注:必要な溶液の量は、注入するダクトの数によって異なります。ウサギには乳頭ごとに4つの管開口部があり、成体のニュージーランド白ウサギ(Oryctolaguscuniculus)の1本の管木を満たすには0.2mLの溶液で十分です。したがって、0.8mLの総量が1つの乳腺に送達され得る。

3. イントラダクションデリバリー

1. 注入する適切な乳頭を見つけてください;鼠径乳頭の3^番目と4^番目のペアが推奨されます。なぜなら、動物が背側に位置するときに簡単に視覚化できるからです。
2. 0.2 mLの滅菌0.9%生理食塩水を22 G針付きの1 mLルアーロックツベルクリンシリンジに入れます。生理食塩水がシリンジに入ったら、22G針を適切に廃棄し、滅菌済みの25ゲージ針と交換します。ガーゼパッドで85%イソプロピルアルコールでその部分をやさしく拭きます。
3. 針の斜角を上にし、注射器を動物の体と平行にして、針の斜角を乳頭の側面に挿入し、生理食塩水の0.1-0.2mLをゆっくりと注入します。
4. 0.2 mLの注射液を1 mLのルアーロックツベルクリンシリンジに入れます。.
5. 親指と人差し指で乳頭を優しく持ち、わずかに持ち上げて乳管内注射の位置を決めます;装着可能な眼球ルーペは、乳管開口部の視覚化に役立つ場合があります。
6. 乳頭の持ち上げ位置を維持しながら、25Gの鈍い先端の針を使用して目的の管を慎重にカニューレ状にします。
7. カニューレ挿入後、ルアーロックシリンジをブラントチップ注入針のハブにゆっくりとひねり、所定の位置に固定します。.
8. 乳頭を持ち上げて溶液をゆっくりと注入し、ダクト内で急速に移動する流体によって引き起こされる潜在的な損傷を最小限に抑えます。溶液を注入する際に抵抗があってはなりません。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
MicroMarkerノンターゲット造影剤	ビジュアルソニックス	VS-11694
ルアーロック 1 mL シリンジ	BDの	309628
グリコピロレート0.2 mg / mL	ウェッジウッド調剤薬局	グリコップINJ013VC	保存期間は6ヶ月で、供給が制限される場合があります。
ケタミンHCL 100 mg/mL	アニマルヘルスインターナショナル	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
アセプロマジン10 mg / mL	アニマルヘルスインターナショナル	17640541
キシラジン20 mg / mL	アニマルヘルスインターナショナル	20101547
脱毛クリーム	ヴィート		敏感肌の解決策。お近くの小売店からお買い求めいただけます。
鈍い先端注入針	Sai Infusion Technology(サイ・インフュージョン・テクノロジー	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ コレクション/鈍針
獣医用パルスオキシメータ	エダンUSA	VE-H100Bシリーズ	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
温水ポンプ	ゲイマー	TP700
温水ブランケット	アニマルヘルスインターナショナル	21232696	Maxi-Therm Lite ウォーミングパッド