肺の点滴と固定:気管に液体を導入し、肺を固定して固定された肺容量を測定する

要約

出典: Limjunyawong, N. et al, マウス肺がん研究に役立つ点眼および固定法。 (2015年)。

このビデオでは、肺の点滴、固定、肺活量測定のために気管に液体を導入する簡単で信頼性の高い方法を説明しています。

プロトコル

動物が関わるすべての手続きは、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 肺点滴

1. 挿管に使用する市販の1インチの長さの20g静脈内カニューレを選択します。
2. カテーテルの先端を手動で曲げて変更し、図 1 に示すように先端にわずかな湾曲を生成します。
3. ケタミン(100 mg / kg)とキシラジン(15 mg / kg)の混合物でマウスに麻酔をかけ、反射運動がない状態で麻酔を確認します。麻酔直後に目に獣医軟膏を塗ります。麻酔直後に、動物用軟膏を眼に塗り、術後および点眼鎮痛のためにカルプロフェン(5-10 mg / kg SQ)を投与します。
4. マウスを仰臥位で傾斜したプラットフォームに置きます。図2に示すように、縫合糸ループをテープで固定した大型のオフィスバインダーは、完璧に機能します。
5. 首の腹側部分を剃り、70%アルコールで首の部分をきれいに消毒します。新しいラテックスおよびパウダーフリーの手袋を使用して、70%アルコールで消毒した手術器具を使用してください。
6. 鋭利なハサミを使用して、下切歯の約12mm下の首に小さな外科的切開を行います。
7. 鉗子を使用して、気管の腹壁が見えるまで首の皮膚を尾側にそっと引っ張ります。
8. 舌をそっと引っ込め、曲がった先端をマウスの腹面に向けて傾けた状態でカニューレを挿入します。1.4と同様に、首の皮膚を優しく引っ張り、カニューレを気管に挿入します.
   手記：少し練習すれば、カテーテルが気管を下って移動しているのが見えるようになります。食道に入ると、カテーテルの動きを視覚的に確認できなくなります。気管に切開は行われません。
9. カテーテルが首の気管に見えるようになったら、声帯を確実に通過するように約5 mm進めますが、それでもカリーナのかなり上にあります。
10. ゲルローディングピペットチップを使用してカテーテルから注入することにより、最大50μlの液体を注入する準備をします。チップをルアーハブに置きますが、注入する前に、マウスの呼吸と同期してチップ内の液体の動きを注意深く観察してください。その後、点眼薬を注入します。
11. 1 mlのシリンジを使用して、カテーテルを介して0.6 mlの空気を比較的急速に肺に膨張させ、液体を肺の奥深くに分配します。カニューレを取り外します。
12. カニューレを取り外します。
13. 少量のシアノアクリレート接着剤を使用して、VetBondのパッケージインサートの指示に従って小さな外科的傷を閉じます。マウスを個々のケージに入れ、目を覚まし、不快感の兆候なしに正常に行動するまで、マウスを視覚的に監視します。

2. 固定肺活量の測定

1. 図3に示すように、アルキメデスの原理を使用して肺活量を測定します。ホルムアルデヒドから固定された肺を取り出し、心臓と他の肺以外の組織を解剖します。.
2. 肺を完全に水中に保つために使用される、以前に構築された簡単な自家製ワイヤーサポートデバイスを使用してください。
   手記：このデバイスは、使用されている天びんと互換性を持たせる必要があります。図4に示す一般的なデバイスは、プラスチック製のピペットと細い(20G)ワイヤーでできています。このシステムは、ビデオで使用されている天びんとうまく機能しますが、ほとんどのラボ用天びんに簡単に適合させることができます。
3. ≈200mlの水を入れたビーカーを天秤に置き、支持ケージを水中に設置して風袋引きします。図 5 を参照してください。金属製のケージを取り外します。肺を水面に置き、ケージで水中に押し込みます。
4. 天秤に重量を記録します。この数値は、変位した水の量を反映しているため、肺活量の直接的な尺度です。肺や縫合糸、またはワイヤーケージの一部がビーカーの側面や底に触れないように注意してください。
5. 精度を上げるために、この測定を繰り返します。肺を水から取り出し、ティッシュで乾かします。ケージを所定の位置に付けたビーカーを再び風袋引きし、肺活量の測定を繰り返します。その後、2 つの体積測定値を平均化する必要があります.
   手記： 肺をホルマリンに約1週間以上放置すると、肺の空気が液体に溶けます。これが起こると、肺は沈んでしまうため、図4のように肺を水没させておくための装置を使用する必要がなくなります。このような場合、図3に示すように、縫合糸の1つで肺を完全に水没させるまで肺を保持するだけで体積を測定できます。

結果

図1:点眼に使用されるわずかに湾曲した先端を備えた静脈カテーテル。

図2:挿管のためにマウスをサポートするために使用される傾斜した3リングバインダー。このバインダーは3匹のマウスを保持するようにセットアップされています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ラボバランス	オーハウス	アドベンチャラープロ モデルAV 313	他の天びんは、1〜300 gの範囲がある場合に使用できます
20gルアー静脈カテーテル	インシルト		他のいくつかの可能なベンダー、例えば、Jelco Optiva
500ml実験用ボトル	諸		その他にもいくつかのベンダー候補