低周波超音波アプリケーション:ヒト白血病細胞に対する超音波処理の影響を決定する方法

要約

出典:Trendowski, M. et al. Generation and Quantitative Analysis of Pulsed Low Frequency Ultrasound to Determine the Sonic Sensitivity of Untreated and Treated Neoplastic Cells. J. Vis. Exp. (2015).

このビデオでは、低周波超音波を使用してヒト白血病細胞の選択的損傷について説明しています。前臨床のin vitro条件における低周波超音波のこの適用は、白血病および正常細胞に対する超音波処理の影響を調べ比較するために細胞破壊を達成できることを実証している。

プロトコル

1. 細胞と培地の調製

1. 240 mlのIscove's Modified Dubecco's Medium(IMDM)と50 mlのウシ胎児血清を使用して培地を調製します。ウシ胎児の血清を温水浴で解凍しないでください、急激な温度上昇は血清の安定性を損なう可能性があるためです。240 μlのゲンタマイシン50 mg/mlと5 mlのペニシリン/ストレプトマイシン100xを標準培養フラスコに混ぜ合わせ、培地に加えます。培地は4°Cで保管してください。
2. 調製した培地を用いて、25 cm²フラスコに~4 x 10⁴細胞/mLでU937細胞を播種します。TC20セルカウンターとトリパンブルー排除法を用いて、15-20μlの細胞と15-20μlのトリパンブルーをマイクロ遠心チューブに入れ、内容物を混合することにより、細胞の濃度と生存率を評価します。この混合物をTC20サンプリングスライドに15-20μlをピペットで入れ、スライドをTC20セルカウンターに置いてカウントを開始します。
3. 細胞を37°Cおよび5%_CO2でインキュベートし、トリパンブルー排除とTC20セルカウンターを使用して細胞生存率を確認します。細胞が適切な濃度にあるとき、および/または適切な時間枠でソノセンシタイザーで処理されたら、培養フラスコから3 mLの細胞を20 mLのガラスシンチレーションバイアルに移します。こ....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Iscove's Modified Dulbecco's Medium w/ NaHCO3 & 25mM Hepes	ライフテクノロジー	12440079
ウシ胎児血清	シグマ・アルドリッチ	12105
ゲンタマイシン50mg / ml	シグマ・アルドリッチ	G1397
ペニシリン/ストレプトマイシン100x溶液	ライフテクノロジー	〒10378-016
バイオ・ラッド TC20 自動セルカウンター	バイオ・ラッド	〒145-0102
トリパンブルーソリューション	シグマ・アルドリッチ	T8154
Falcon 50 ml & 25 ml ベント式培養フラスコ	フィッシャーサイエンティフィック	353082
100 μl マイクロピペット	ウィートン	851164
1,000 μl マイクロピペット	ウィートン	851168
U937 ヒト単球性白血病細胞	ATCCの	CRL1593.2
THP1ヒト単球性白血病細胞	ATCCの	TIB-202
Branson SLPe 40kHz セルディスラプター 3インチ (25mm) カップホーン付き	ブランソン超音波	〒101-063-726	超音波処理装置
Beckman-Coulter Z2 Cell Sizer with AccuComp® ソフトウェア	ベックマン・コールター	6605700
Seal-Rite 1.5 ml 微量遠心チューブ	USAサイエンティフィック	1615-5510
ベックマン・コールター Accuvette ST 25 ml バイアル&キャップ	ベックマン・コールター	A35473 (英語)
AccuJet Proオートピペット	ブランドテックサイエンティフィック	26330
USAサイエンティフィック10ml使い捨て血清ピペット	USAサイエンティフィック	〒1071-0810
Tip 100 μl および 1,000 μl フィルターチップ	USAサイエンティフィック	1120-1840、1126-7810
BioRad デュアルチャンバーカウンティングスライド	バイオ・ラッド	〒145-0015
20 mlガラスシンチレーションバイアル	シグマ・アルドリッチ	Z190527
ウィートン250mlフラスコ	シグマ・アルドリッチ	Z364827

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