出典:Hlozkova K. et al. Assessment of the Metabolic Profile of Primary Leukemia Cells. J. Vis. Exp. (2018).
このプロトコルは、細胞外フラックスアッセイを使用して初代白血病細胞の細胞外酸性化率(ECAR)と酸素消費率(OCR)を測定するための生化学的アプローチを提供します。これらの細胞の代謝プロファイルの評価は、それらの要求を特徴付けるのに役立ち、個別化治療につながります。
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方法論記事
細胞外フラックスアッセイ:細胞の代謝プロファイルを測定する方法
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2023年4月30日
この記事について
要約
プロトコル
1. 試薬の調製
- 137 mM NaCl、2.7 mM KCl、4.3 mM Na2HPO4、1.47 mM KH2PO4をddH2Oに溶解して、PBS500 mLを調製します。HClでpHを7.4に調整します。オートクレーブ滅菌します。
- 100 mLのRPMI培地を調製します:10 %ウシ胎児血清(FBS)、ペニシリン(100 U / mL)、ストレプトマイシン(100 μg / mL)を添加したL-アラニルグルタミンを含むRPMI-1640培地。
- 蒸留水に0.1 M NaHCO3 50 mLを調製します。pHを8.1に調整し、フィルター滅菌(0.22μm)し、4°C.
で保存します 手記：8ウェル細胞外フラックス分析プレート2枚の場合、0.1 M NaHCO3 pH 8.1 250 μLを調製します。 - 蒸留水に2 M D-グルコース1 mLを調製します。フィルター滅菌(0.22μm)し、-20°Cで保存します。
- 100 μLの1 mMオリゴマイシンAをエタノール溶液で調製します。フィルター滅菌(0.22μm)し、-20°Cで保存します。
- 1 M 2-デオキシ-D-グルコース(2-DG)をMinimal DME....
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| タツノオトシゴアナライザーXFp | アジレント・テクノロジーズ | S7802A型 | |
| タツノオトシゴXFp細胞培養ミニプレート | アジレント・テクノロジーズ | 103025から100 | |
| Corning™ Cell-Tak 細胞および組織用接着剤 | サーモフィッシャーサイエンティフィック | CB40240 | |
| D-(+) グルコース | シグマ・アルドリッチ | G7021-100G | |
| オリゴマイシンA | シグマ・アルドリッチ | 75351から5MG | |
| 2-デオキシ-D-グルコース | シグマ・アルドリッチ | D8375-1Gの | |
| FCCPの | シグマ・アルドリッチ | C2920-10MG | |
| ロテノン | シグマ・アルドリッチ | R8875-1Gの | |
| Streptomyces sp.のアンチマイシンA。 | シグマ・アルドリッチ | A8674-25MGの | |
| タツノオトシゴ XF ベース ミディアム 100mL | アジレント・テクノロジーズ | 103193から100 | |
| L-グルタミン溶液、200 mM | シグマ・アルドリッチ | G7513-100ミリリットル |
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