マウス後肢からの骨髄採取

要約

出典:Zhu, Y. P., Padgett, et al. Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells. J. Vis. Exp. (2019).

このビデオでは、白血病などの血液疾患の患者のために、マウスの後肢から新鮮な全骨髄を分離するための詳細なプロトコルについて説明しています。

プロトコル

1. Harvest Mouse Bone Marrow(BM)

1. C57BL/6Jマウスは市販の業者から購入します。標準的なげっ歯類の食事と家を病原体のない施設のマイクロアイソレーターケージに給餌します。
2. 実験目的で、6〜10週齢のオスマウスを使用します。CO₂吸入とそれに続く頸部脱臼による安楽死。
3. 腹部を上にして、マウスを滅菌外科用パッドに置きます。腹部と後肢領域の皮膚を70%エタノールを噴霧して滅菌します。解剖用の手術用ハサミを使用して、腹腔を切り開きます。
4. 皮膚をはがして後肢を露出させます。先端が鈍いドレッシング鉗子を使用して、マウスの脛骨を足首の真下に保持します。別のペアの湾曲したドレッシング鉗子を使用して、鈍い先端のドレッシング鉗子の下の脛骨を安定させます。脛骨を骨折し、先端が鈍い被覆鉗子で筋肉を引き裂いて骨を露出させます
   手記：脛骨は膝関節にゆるく取り付けられており、先端が鈍いドレッシング鉗子を使用することで簡単に取り出すことができます。
5. 脛骨を冷たい1xPBSに入れます。
6. 次に、安定化湾曲ドレッシング鉗子を大腿骨まで下向きに動かします。先端が鈍いドレッシング鉗子を膝関節の下にスライドさせ、膝蓋骨を保持します。膝蓋骨をそっと引き上げて脱臼させます。膝蓋骨に付着した筋肉をはぎ取るようにして大腿骨を露出させます。露出した大腿骨を湾曲した包帯鉗子で保持し、解剖手術用ハサミを使用して骨の底から大腿骨を切り取ります。
7. 大腿骨を冷たい1x PBSに入れます。
8. 0.5 mLの微量遠心チューブに18 Gの針で穴を開けます。
9. 脛骨と大腿骨の両方を同じ0.5mLの微量遠心チューブに入れ、骨の開放端を穴に向けて下向きにします。
10. 脛骨と大腿骨の両方を含む0.5mLチューブを1.7mLの微量遠心チューブに入れます。
11. 脛骨と大腿骨の両方を含む二重層チューブを5,510 x gでマイクロ遠心分離機で30秒間回転させます。
12. BMが骨から抽出され、チューブの底でペレット化されていることを確認します。神聖な骨が入った0.5mLのチューブを投げます。マウス BM は次のステップの準備ができています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
マウス:C57BL / 6J	ジャクソン研究所	品番:000664
HyClone リン酸緩衝生理食塩水	GEライフサイエンス	カタログ番号#SH30256.01