マウス回腸切除モデル:マウスモデルにおける回腸切除術誘発性胆汁代謝の研究

要約

出典:Zhang, R., et al. マウス腸における回腸切除術による胆汁の過剰蓄積。J. Vis. Exp.(2017年)

このビデオでは、マウスモデルにおける腸切除の詳細なプロトコルについて説明しています。この手法は、回腸切除術によるマウス腸内の胆汁吸収不良、過剰蓄積、および毒性に関する洞察を提供します。

プロトコル

1. 回腸切除術と吻合

1. 小動物のインキュベーションチャンバー内でイソフルラン(2〜3%)でマウスを麻酔します。動物がイソフルランを服用している間に、つま先をつまむ技術を使用して適切な麻酔を決定します。
2. 脱毛剤を塗布して腹部の毛を取り除き、麻酔をかけたままサージカルスポンジで毛を拭き取ります。体温を37°Cに維持するために、温度制御された小動物の手術台(図1A)にマウスを置き、フェイスマスクを通じてイソフルラン(1〜2%)で麻酔を維持します。マウスの目を眼軟膏で治療します。
3. ポビドンヨードと70%アルコールを使用して皮膚をきれいにし、腹部の手術領域を滅菌外科用ガーゼで覆います(図1B)。
4. 麻酔が効いたら、外科用メスを使用して腹部の正中線を切開します。先端が綿のアプリケーターを使用して腸を保護し、リトラクターでマウスの腹筋を引っ張って腹腔を完全に開いて露出させます(図1C)。
5. 盲腸を見つけます。盲腸から始めて、接続された回腸と空腸の一部を慎重に腹腔外に移動します(図1D).
   手記： 盲腸は、絶食後でもサイズが大きいため、簡単に識別できます。
6. 上腸間膜動脈の上部枝を 7-0 シルク縫合糸で結紮して、切除する回腸セグメントに供給する血液を閉塞します。回腸の色は結紮後にピンクから濃い紫色に変わります。(図1E-F)。
7. 実験の目的に応じて、ハサミを使用して、回腸の50%または90%を切除および除去します><。 手記： 偽手術の場合は、上腸間膜動脈結紮術や回腸切除を行わないでください。
8. 回腸両端の内腔を0.9%生理食塩水で洗い流します.
   手記：残りの無傷の回腸は、上腸間膜動脈から正常な血液供給を受けているため、プロセス中に少量の血液が洗い流されます。これはまた、回腸末端への血液供給が正常であり、吻合処置中に虚血が起こらないことを確実に示しています(図1G)。
9. 腸間膜を回腸の両端の側面に配置します。腸間膜を整列させ、8-0を使用して回腸端を縫合します。縫合糸(図1G-H)。
10. 回腸の反対側を縫合して、回腸を自然な方法で吻合します(図1I)。
11. 2つの元の縫合糸の間の上側と下側を縫合して、2つの回腸端を完全に結合します(図1J)。
12. 3段階の縫合手順が終了した後、吻合部位からの漏れがないことを確認します(図1G-I)。盲腸と小腸を腹腔内に戻して、元の解剖学的位置に戻します。鈍い針を使用して、温かい0.9%生理食塩水で手術部位を洗います。(図 1K)。
13. 6-0縫合糸で腹筋層の切開を閉じます。鉗子を使用して腹部の皮膚切開部の位置を合わせ、腹部の皮膚を縫合して最適な創傷治癒を促進します(図1L)。

>2. 術後のケア

1. 手術後のマウスを集中治療室に移して回復させます。温度制御された加熱パッドの上の紙製寝具ケージにそれらを収容して、手術後の回復を一晩中続けます。通常の餌と水に加えて、柔らかい餌をマウスに供給します。
2. 鎮痛のためにブプレノルフィン(0.05-0.1 mg / kg)を8〜12時間ごとに皮下注射で投与します.
   手記：重篤な病気の場合は、マウスを_CO2で安楽死させます。
3. エンドポイントでは、過剰摂取したイソフルランを使用してマウスを犠牲にし、必要に応じてサンプルを採取します(セクション3)。

>3. 回腸切除術による胆汁過剰蓄積の評価

1. 回腸の0%(偽)、50%、または90%の切除の1日後にマウスの体重を量り、解剖します。
2. 消化管を取り外して体重を量ります。胆汁酸塩の吸収不良と過剰蓄積の重症度を評価するために、GI重量と体重の比率を計算します。
3. 消化管を15mLの円錐管に移し、ハサミで短いセグメントに切ります。切断後、3,000 x gで10分間遠心分離します。上清(胆汁酸塩を含むGI液)をきれいなチューブに移します。
4. 消化管液の総体積と重量を測定し、消化管重量に対する体液重量の比率を計算して、消化管内の胆汁の過剰蓄積をさらに評価します。
5. 胆汁酸アッセイにより、上清中の総胆汁量を決定します。

結果

図1:回腸切除術の手術手順。(A)温度管理された小動物用手術台を使用して体温を維持します。(B)腹部の皮膚の準備後、手術部位を滅菌ガーゼで覆います。(C)腹部の正中線切開部から小腸を露出させます。(D)盲腸(白い破線で強調表示)は、回腸の位置を特定するためにマークされています。回腸(黄色の破線)と上腸間膜動脈の枝(黄色の矢印)を露出させます。(E)回腸に血液を供給する上腸間膜動脈の枝を結紮します。結紮部位は黄色の矢印で示されています。回腸の色は、動脈結紮後に濃い紫色または黒色に変わります。虚血性セグメントは黄色の破線で強調表示されています。(F)破線は、虚血性回腸と正常灌流回腸の境界を示しています。矢印は回腸の虚血領域を示しています。(G)回腸の虚血部分を切開して取り除き、端(黄色の破線)を0.9%生理食塩水で洗い流します。黄色の矢印は腸間膜側を示しています。(H)回腸末...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
C57BL/6J	ジャクソン研究所
解剖顕微鏡	オリンポス	SZ61	手術用
動物温度コントローラー	Physitempインスツルメンツ株式会社	TCAT-2LV	体温調節に
イソフルラン麻酔気化器	ベトエキップ	911104	麻酔に
解剖鉗子	ファインサイエンスツールズ株式会社	11274から20	手術用
鋏	ファインサイエンスツールズ株式会社	14084-08	手術用
ニードルホルダー	ロボズ手術器具株式会社	RS-7882	手術用
マイクロナイフ-ニードルブレード	フィッシャーサイエンティフィック	10318-14	手術用
6-0モノフィラメント縫合糸	エチコン	1698グラム	腹部の皮膚閉鎖用
7-0シルク縫合糸	エチコン	766グラム	ライゲーション用
8-0モノフィラメント縫合糸	エチコン	1714グラム	吻合用
外科用スポンジ	ダイナレックス株式会社	3333名	手術用
小さな綿の先端のアプリケーター	フィッシャーサイエンティフィック	23-400-118	手術用
イソフルラン	ピラマル・ヘルスケア・リミテッド	66794-013-25	麻酔に
ブプレノルフィン塩酸塩	レキットベンキーザーファーマシューティカル	12496-0757-1	鎮痛剤
0.9%塩化ナトリウム注射	B.ブラウンメディカル株式会社	0264-7800-10	洗浄/注入用
ポビドンヨウ素調製液	ダイナレックス株式会社	1413	お肌づくりに
Puralube獣医軟膏	Dechra 獣医製品	17033-211-38	目の保護に
脱毛ローション	チャーチ&ドワイト株式会社		お肌づくりに
集中治療室	サーモケア	FW-1	術後の回復に
総胆汁酸アッセイキット	ジェンザイム診断	DZ042A-K01	胆汁酸アッセイ用

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