出典:Betzler, A. M., et al. 散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル。J. Vis. Exp. (2017).
このビデオでは、分節的なアデノクレ感染による結腸直腸マウスモデルの生成について説明しています。感染した結腸セグメントは、粘膜のこのセグメント内で腫瘍形成を引き起こし、最終的に腺腫は浸潤性および転移性癌に進行します。このモデルは、がん生物学の研究や前臨床治療試験のための魅力的なプラットフォームです。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
方法論記事
分節性Adeno-Cre感染:遺伝子改変マウスモデルを用いた単離大腸がん作製技術
1K 回視聴
⸱
2023年4月30日
この記事について
要約
プロトコル
動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。
1. 外科的アデノクレ感染による局所腫瘍導入
- 手術用動物の調製
手記：事実上、任意の条件付き(「floxed」)突然変異は、ここで説明する方法を介して誘導することができる。Apc、Kras、またはTp53などの結腸直腸癌に関連する遺伝子の突然変異の使用が推奨されます。Cre再結合の効率は、切除するコンストラクトのサイズに依存します。大きなフロックス配列は、効率が悪くなります。すべての対立遺伝子の組換えは、PCRによって腫瘍で確認する必要があります。- 結腸直腸腫瘍の発生には、CRCの基本モデルに次の条件付き対立遺伝子の十字架を使用します(括弧内はMGIデータベース番号):
APCtm2Rak (MGI: 3688435)
Krastm4Tyj (MGI: 2429948)
TP53tm2Tyj (MGI: 3039263) - 蛍光レポーター対立遺伝子が必要な場合(微小転移巣の検出など)は、次の対立遺伝子を使用します:
....
- 結腸直腸腫瘍の発生には、CRCの基本モデルに次の条件付き対立遺伝子の十字架を使用します(括弧内はMGIデータベース番号):
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
結果
図 1.結腸直腸腫瘍の大腸内視鏡画像(括弧内は与えられた動物の条件付き対立遺伝子)。
A. 正常な遠位結腸 B. アデノクレ感染の2週間後の早期腺腫。このマウスのGFPレポーター対立遺伝子による緑色に注意してください。(Apctm2Rak, Krastm4Tyj, Gt(ROSA)26Sortm6(CAG-ZsGreen1)Hze). C. 遅発性腺腫 (Apctm2Rak, Krastm4Tyj). D. 結腸直腸腺癌 (大腸内視鏡検査画像が得られた後に病理学的に診断された;Apctm2Rak、Kr.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水 | ライフテクノロジーズGmbH | 14190169 | |
| トリプシン-EDTA(0.25%、フェノールレッド) | ライフテクノロジーズGmbH | 25200072 | |
| 生理食塩水0.9%(E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| アクアアドインジェクタビリア | B.ブラウンメルズンゲンAG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre(アデノウイルス、c = 2E +11 PFU/mL) | 遺伝子導入ベクターコアアイオワ大学 | ||
| 15 mL、50 mL遠心チューブ | グライナー・バイオワン社 | 188271/227270 | |
| エッペンドルフチューブ 1.5 mL/ 2 mL | ザルスタットAG & Co. | 72,695,400 | |
| ペトリ皿PS 100/15 mm(滅菌、ヌクロン) | フィッシャーサイエンティフィックGmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| 1 mLシリンジ(デッドボリュームなし) - Injekt-F SOLO | ブラウン/neoLab | 194291661 | |
| 30G注射針 | ベクトン・ディキンソン | 304000 | |
| セボフルラン(Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG (アッヴィ・ドイツ GmbH & Co. KG | ||
| 医療用酸素 | エア・リキード・メディカルGmbH | ||
| ブプレノルフィン(テムゲシック) | Indivior Eu Ltd.(英語) | ||
| Bepanthen - 眼科用軟膏 | バイエルバイタルGmbH | 10047757 | |
| テーブルトップ研究麻酔器 x/O2 フラッシュ セボフルラン気化器 | パークランド・サイエンティフィック | V3000PS/PK | |
| セルロース綿棒 | ローマン&ラウシャー・ドイツ | 13356 | |
| インスリンシリンジEMG 1 mL(30Gカニューレ付き) | B.ブラウンメルズンゲンAG | 9161627S | |
| ファインボアチューブ(内径0.28mm/径0.61mm) | スミスメディカルドイツ8 | 800/100/100 | |
| マイクロアドソン鉗子 | ファインサイエンスツール | 11018-12 | |
| アイリスシザー - タフカット | ファインサイエンスツール | 14058-11 | |
| Olsen-Hegarニードルホルダー | ファインサイエンスツール | 12002年12月 | |
| オートクリップキット | ファインサイエンスツール | 12020年00月 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (外科用縫合糸) | ジョンソン・エンド・ジョンソン・メディカルGmbH | Z1012Hの | |
| 湾曲したマイクロSerrefine血管クランプ | ファインサイエンスツール | 18055-05 | |
| フォガティスプリングクリップ | エドワーズ | CDSAFE 6 | |
| ホットプレート062 | ラボテクト | 13854 | |
| Isis - ヘアシェーバー | Aesculap - ブラウン | ||
| コールドライトファウンテン キセノン 175 | カールストルツ | 20132101-1 | カールストルツ コロビューシステム マインツ |
| 光ファイバーライトケーブル | カールストルツ | 69495NLの | カールストルツ コロビューシステム マインツ |
| TRICAM 3チップカメラヘッド | カールストルツ | 20221030 | カールストルツ コロビューシステム マインツ |
| TRICAM SLIIカメラコントロールユニット | カールストルツ | 20223011-1 | カールストルツ コロビューシステム マインツ |
| 15インチフラットスクリーンモニターEndoVue | カールストルツ | 9415NNの | カールストルツ コロビューシステム マインツ |
| ホプキンスストレートフォワード望遠鏡 直径1.9 mm、長さ10 cm、オートクレーブ可能な光ファイバー光伝送を内蔵 | カールストルツ | 64301のAA | |
| 保護および検査シース | カールストルツ | 61029C |
