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Research Article
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出典: Ali, M. Y et al., Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Cultturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry. J. Vis. Exp. (2015)
このビデオでは、ヒトの原発性結腸がん細胞の細胞骨格と焦点接着を研究し、基質の剛性に応じたその変化を理解する技術について説明しています。軟質および硬質基質上でのがん細胞の培養により、がんの予後に関するさまざまな下流の生物物理学的測定が可能になります。
1. 免疫蛍光顕微鏡アッセイ
図 1.ソフトゲルおよび硬質ポリスチレン基質上のF-アクチンおよびビンキュリンの免疫蛍光染色。軟質2 kPaゲル上の広がりの少ない(A1)腫瘍細胞または(A2)正常細胞にはアクチン繊維は存在しませんでした。ただし、点状ビンキュリン含有焦点接着は、軟質ゲル(B1-B2)上に存在します。逆に、初代細胞は、硬質ポリスチレン基質上に、よく広がる形態、明確に定義されたアクチンストレスファイバー(C1-C2)、および離散的な細長い焦点接着(D1-D2)を示します。
| 試薬 | |||
| PBSの | ロンザ | 17-516階 | |
| パラホルムアルデヒド | 電子顕微鏡科学 | RT15710 | |
| シグナルエンハンサー | ライフテクノロジー | I36933 | |
| モノクローナル抗ビンキュリン抗体 | シグマ・アルドリッチ | V9131 | の|
| Alexa Fluor 488ヤギ抗マウスIgG | ライフテクノロジー | A11001 (英語) | |
| TRITCファロイジンコンジュゲート | シグマ・アルドリッチ | P1951 | |
| 料 | |||
| 12 mm2ガラスカバースリップ | コーニング | 2865-12 |
